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    動物性食品中土霉素、金霉素和四環(huán)素檢測方法研究進展

    2012-05-18 08:42:04
    中國動物檢疫 2012年8期
    關鍵詞:金霉素土霉素色譜法

    楊 琳

    (萬源市動物疫病預防控制中心,四川 萬源 636350)

    四環(huán)素類藥物(TCs)具有廣譜抗生活性,有良好的殺菌抑菌作用,不僅對革蘭氏陽性,革蘭氏陰性和支原體,甚至對立克次體和衣原體之類的微生物都有活性[1]。價格便宜,經(jīng)常作為飼料添加劑用于畜牧及水產(chǎn)養(yǎng)殖中,常見的TCs包括四環(huán)素(Tetracycline,TC)、土霉素(Oytetracycline,OTC)、金霉素(chlortetracycline,CTC)和強力霉素(Doxycycline,DC)[2]。近年來,為有效預防和治療畜禽、魚類的疾病,獸藥及化學藥品被廣泛地應用做飼料添加劑,以促進其生長速度,控制其生殖周期和繁育能力。土霉素、金霉素和四環(huán)素是我國應用最廣、應用時間最長的動物保健性抗生素,一些不法分子為了經(jīng)濟效益,常濫用這類藥物,致使在動物性食品中大量殘留,不僅危害人體健康,而且更為嚴重的是畜禽產(chǎn)品中殘留較低濃度的土霉素、金霉素和四環(huán)素容易誘導各種致病菌產(chǎn)生耐藥性,不利于對人類和畜禽類疾病的治療[3-5]。世界糧農(nóng)組織、世界衛(wèi)生組織、歐盟及我國等都對畜禽產(chǎn)品中土霉素、金霉素和四環(huán)素的殘留做出了嚴格的規(guī)定。因此,控制土霉素、金霉素和四環(huán)素的使用,實施對畜禽產(chǎn)品中土霉素、金霉素和四環(huán)素及有害代謝產(chǎn)物殘留的檢測分析十分重要。本文就目前畜禽產(chǎn)品中土霉素、金霉素和四環(huán)素的殘留分析方法的新進展進行綜述。

    1 土霉素、金霉素和四環(huán)素的危害

    土霉素、金霉素和四環(huán)素都屬于四環(huán)素類抗生素,常用于防止禽畜病害,促進幼年禽畜生長等。隨著TCs在畜禽養(yǎng)殖中的廣泛應用,濫用藥的情況時有發(fā)生,其殘留問題也引起了人們的高度關注。長期食用含有抗生素的食品將對人們的健康造成極大危害,引起骨骼畸形和生長抑制,干擾人體的正常生理機能,影響兒童和青少年的生長發(fā)育,降低人體對致病菌的抵抗能力,并可造成肝腎損害,引起前庭反應、過敏反應、變態(tài)反應、耐藥性等[6]。

    2 土霉素、金霉素和四環(huán)素的限量標準

    隨著人們生活水平的提高,食品安全問題日益受到廣泛關注,獸藥殘留問題也引起高度重視。土霉素、金霉素和四環(huán)素在畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖中應用廣泛,在畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展中發(fā)揮了重大作用,但是一些不法分子濫用四環(huán)素類抗生素,造成其在畜禽產(chǎn)品中大量殘留,因此,一些國家和地區(qū)紛紛建立了土霉素、金霉素和四環(huán)素的限量標準(表1)。

    表1 部分國家和地區(qū)限量標準

    3 土霉素、金霉素和四環(huán)素檢測方法

    3.1 高效液相色譜法

    高效液相色譜法(HPLC)按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。HPLC是目前常用于獸藥殘留檢測的方法,可進行定性和定量分析,并可配套使用不同的萃取、提純及柱前、后衍生和靈敏的檢測系統(tǒng),主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器、質(zhì)譜檢測器以及安培計。李月歡等[7]建立超高效液相色譜—電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜快速測定畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素的方法。土霉素、四環(huán)素、金霉素的最低檢出限分別為0.1、0.1、0.5 μg/kg,在5.0~80.0 ng/L的線性范圍內(nèi),相關系數(shù)r均大于0.99,回收率82.6%~111%。智若嵐等[8]建立了測定豬肉組織中土霉素及金霉素殘留量HPLC法,土霉素、金霉素標準品分別在0.1~1.0 μg/mL、0.2~2.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好;土霉素在3個不同濃度添加水平的回收率為78.06%~87.21%,變異系數(shù)為3.02%~7.72%;金霉素的回收率為76.45%~85.62%,變異系數(shù)為3.46%~6.32%。土霉素及金霉素的最低檢出線分別為20 μg/kg和10 μg/kg(表2)。

    表2 高效液相色譜法檢測土霉素、金霉素和四環(huán)素

    HPLC用于真菌毒素檢測結(jié)果準確可靠,靈敏度、分辨率高,重現(xiàn)性好,樣品需要量少,溶劑用量少,能把同時分離多種物質(zhì),適用于四環(huán)素類獸藥殘留的精準檢測;但由于其設備昂貴、對樣品中樣品純度的要求較高、前處理復雜、建立方法比較困難,導致檢測成本高、周期長,無法滿足大批量樣本快速篩查的需要,因而使用受到限制。

    3.2 免疫學方法

    免疫學分析法是以抗原抗體的免疫反應為基礎進行抗原抗體含量測定的方法,它具有高度的特異性、靈敏性和快速簡便等優(yōu)點。用于土霉素、金霉素和四環(huán)素檢測的免疫學方法主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)和膠體金免疫層析技術(shù)。

    邢淑婕等[22]采用間接競爭ELISA分析了自制抗土霉素抗體的靈敏度與特異性,結(jié)果表明,所得抗體的靈敏度和特異性都較好,與其它結(jié)構(gòu)相似或相近物質(zhì)的交叉反應率較低;同時對蜂蜜中土霉素的提取方法進行了研究,得出了最佳提取方法和條件;檢測范圍為5~200 ng/mL,相關系數(shù)r為0.9951,在此范圍內(nèi)對人工污染樣品的平均回收率為97.5%~107.0%。劉智宏等[23]構(gòu)建了一種四環(huán)素類藥物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,試劑盒的最低檢測限為0.3 μg/L,檢測范圍為0.3~30 μg/L,可同時測定獸醫(yī)常用的四環(huán)素、金霉素、土霉素和多西環(huán)素4種藥物殘留,靈敏度、精密度和準確度均能滿足獸藥殘留檢測要求。邢淑婕等[24]以自制抗體建的間接競爭ELISA法對牛奶中土霉素的殘留進行了檢測,所建立的間接競爭ELISA方法對土霉素的檢測范圍為5~200 ng/mL,相關系數(shù)為0.9951。付云潔等[25]研究了食品中金霉素殘留的膠體金免疫層析法的快速檢測方法,試紙條法的金霉素檢測限為0.7 μg/mL,檢測時間僅需5 min。林杰等[26]探討應用ROSA法同時快速檢測UHT奶中的四環(huán)素類和β—內(nèi)酰胺類藥物殘留,驗證了ROSA法的檢測靈敏度、特異性和穩(wěn)定性,10 min可出檢測結(jié)果。檀尊社等[27]建立用于快速檢測水產(chǎn)樣品中四環(huán)素類藥物殘留含量的膠體金免疫層析檢測試劑,試劑靈敏度最低值可達100 ng/mL,僅需5~10 min,與金霉素、土霉素、強力霉素等四環(huán)索族抗生素有很強的交叉反應。武玉香等[28]研究了斑點金免疫滲濾法快速檢測禽肉中金霉素殘留,方法的檢測限為0.4 μg/mL,在金霉素濃度為0.6~μg/mL范圍內(nèi)可實現(xiàn)定量分析。免疫學方法用于金霉素、土霉素和四環(huán)素檢測,靈敏,簡便,快速,特異性強,對樣品中凈化純度要求不高,能同時對多個樣品定性或定量檢測,適于獸藥殘留的批量檢測,但檢測結(jié)果的重現(xiàn)性差,酶穩(wěn)定性差,試劑壽命短,而且由于存在交叉反應而易造成假陽性,使復雜樣品受干擾,因此需要用其它的方法來驗證。適用于樣品的定性篩選檢測。

    3.3 其他檢測方法

    少數(shù)研究表明毛細管電泳法、微生物學法也可用于土霉素、金霉素和四環(huán)素的檢測。邢曉平[29]運用毛細管電泳—電化學檢測法對雞蛋中殘留的四環(huán)素、土霉素進行快速測定分析。TC和OTC的線性范圍分別為2.0×10-6~5.0×10-4g/mL、8.0×10-6~3.0×10-4g/mL,檢出限分別為1.9×10-8g/mL、4.1×10-8g/mL。陳樹橋等[30]建立了一種相對簡便有效的微生物法檢測青蝦肌肉組織中土霉素的殘留。在0.32~5.12 μg/mL的土霉素濃度范圍,線形關系較好,相關系數(shù)達0.999。在青蝦肌肉中的最低檢出限是2.0 μg/kg,通過與HPLC對比并經(jīng)t檢驗,發(fā)現(xiàn)2種方法檢測結(jié)果沒有顯著性差異。毛細管電泳法檢測四環(huán)素類藥物殘留不需要過柱等繁瑣的預處理過程,方法簡便、易操作。微生物學方法操作簡便、具有一定的靈敏度,特別在大批量樣品分析中具有很大優(yōu)勢[31]。

    4 小結(jié)與展望

    食品中獸藥殘留嚴重影響公共健康,獸藥殘留的檢測引起了人們的高度重視。土霉素、金霉素和四環(huán)素作為常用的動物用藥,其殘留問題已較普遍,其檢測方法已經(jīng)建立。目前,在土霉素、金霉素和四環(huán)素的檢測中,高效液相色譜法是應用最為廣泛的檢測方法,酶聯(lián)免疫分析法和膠體金免疫分析法也發(fā)展很快,同時逐漸出現(xiàn)了毛細管電泳法和微生物學法等檢測方法。這些檢測方法各有優(yōu)缺點,高效液相色譜法,尤其是HPLC—MS聯(lián)用技術(shù),具有高靈敏度、高分離效率和高準確度,但必須要有一定的測定儀器支持,前處理過程也較復雜,凈化程度要求較高,檢測成本較高,主要應用于土霉素、金霉素和四環(huán)素殘留的定量測定。免疫學方法則具有簡便、快速、靈敏的特點,但準確度則稍差,側(cè)重于大批量樣品的定性篩選檢出。在今后的研究中,抗生素類藥物替代品有很好的研究前景,像微生物制劑類生物藥品既能代替抗生素的功能,在動物養(yǎng)殖業(yè)中發(fā)揮重大作用,又不至于導致細菌產(chǎn)生耐藥性,對人類健康構(gòu)成重大威脅。同時應致力于建立既簡便、快速,又靈敏度高、重復性好、準確度高、檢測成本低的檢測方法,保證公共健康。

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