山楂籽黃酮提取物抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用的研究

唐小荷，陳震翼

(湛江市第二人民醫(yī)院，廣東 湛江 524003)

山楂(Crataegus pinnatifida)，別名紅果，薔薇科山楂屬植物，廣泛分布于我國(guó)大多數(shù)省份。山楂果肉、種子及葉均具有很高的藥用價(jià)值和保健作用，是最早被列入食藥兼用的植物之一，具有消食化滯、行氣散瘀的功效［1］。對(duì)于山楂果肉和葉的化學(xué)成分及其對(duì)心血管保護(hù)作用已有較多研究［2～4］，但對(duì)其種子的化學(xué)成分及心血管相關(guān)的藥理作用鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過研究山楂籽黃酮提取物(Hawthorn seed flavonoids，HSF)抗化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的心率失常作用，可為進(jìn)一步開發(fā)山楂抗心率失常有效部位群提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 KM小鼠(雌雄各半)，40只，體重28～32g;SD大鼠(雌雄各半)，體重260～320g，32只，均由廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SYXK(粵)2008－0007。

1.1.2 試劑 山楂籽總黃酮提取物(干山楂籽500g，8倍量乙醇85℃水浴浸提3次，每次2 h，回收乙醇至無醇味，以雙蒸水配成含生藥濃度為2g·mL－1的母液備用，以蘆丁為對(duì)照，其總黃酮含量不低于10mg·mL－1)。三氯甲烷(AR，廣東光華);烏頭堿(中國(guó)藥品生物制品檢定所);維拉帕米(山東魯能制藥);水合氯醛(上海國(guó)藥);Medlab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)(南京美易科技公司)。

1.2 方法

1.2.1 三氯甲烷誘發(fā)的小鼠心律失常模型建立 取40只KM小鼠，雌雄各半，將小鼠隨機(jī)分為4組(n=10)，分別給予以下處理:①模型組:給予生理鹽水;②陽(yáng)性對(duì)照組:給予10mg·kg－1維拉帕米;③高、低劑量組:分別給予 50、100mg·kg－1山楂籽黃酮提取物。以上各組均灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥5 d。于末次給藥30min后，將小鼠放入浸有4mL三氯甲烷的棉球500mL燒杯內(nèi)，密封，小鼠呼吸停止5 s后，立即取出，采用Medlab系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)，記錄心電圖曲線并觀察小鼠的室顫(ventricular fibrillation，VF)發(fā)生率。

1.2.2 烏頭堿誘發(fā)的大鼠心律失常模型 取SD大鼠32只，隨機(jī)分為4組(n=8)，分別給予以下處理:①模型組:給予生理鹽水;②陽(yáng)性對(duì)照組:給予維拉帕米10mg·kg－1;③高、低劑量組:分別給予50、100mg·kg－1山楂籽黃酮提取物。以上各組均灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥5 d。于末次給藥30min后，水合氯醛2.5mL·kg－1腹腔注射麻醉，仰臥位固定，從舌下靜脈以2 μg·min－1恒速輸入新鮮配制的烏頭堿溶液至室性早搏出現(xiàn)，用Medlab系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)記錄心電圖曲線，觀察室性早搏(ventricular premature beats，VPB)、室性心動(dòng)過速(ventricular tachycardia，VT)的發(fā)生次數(shù)，以及心律失常持續(xù)時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 山楂籽黃酮提取物對(duì)抗三氯甲烷誘導(dǎo)的小鼠心律失常的作用 與模型組相比，維拉帕米組和山楂籽黃酮提取物組均能降低小鼠的室顫發(fā)生率，且山楂籽黃酮提取物對(duì)小鼠室顫發(fā)生率的抑制呈劑量依賴性，結(jié)果見表1。

表1 山楂籽黃酮提取物對(duì)三氯甲烷誘發(fā)小鼠室顫的影響(n=10)

2.2 山楂籽黃酮提取物對(duì)烏頭堿誘導(dǎo)的大鼠心律失常的作用 與模型組相比，維拉帕米組和山楂籽黃酮提取物各組均可明顯增加引起烏頭堿誘發(fā)心律失常的消耗量。維拉帕米可明顯降低烏頭堿誘發(fā)的VPB、VT發(fā)生次數(shù)及心率發(fā)生的持續(xù)時(shí)間，但山楂籽黃酮提取物各組對(duì)這幾項(xiàng)指標(biāo)均無明顯改善，結(jié)果見表2。

表2 山楂籽黃酮提取物對(duì)烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響(n=8)

3 討論

心律失常是臨床最常見的一種心血管疾病，主要由器質(zhì)性病變導(dǎo)致的心肌缺血再灌注損傷及藥物中毒引起。以往的研究已發(fā)現(xiàn)山楂黃酮提取物能減輕乳鼠缺血缺氧損傷后心肌細(xì)胞心律失常的程度，延緩心肌停搏時(shí)間，且能減輕心肌損傷的程度［5］，但能否對(duì)抗藥源性引起的心率失常尚無相關(guān)報(bào)道。

目前的研究認(rèn)為，三氯甲烷誘發(fā)的小鼠室顫可能與三氯甲烷刺激植物性神經(jīng)釋放神經(jīng)遞質(zhì)或腎上腺髓質(zhì)釋放大量?jī)翰璺影?、繼而激動(dòng)腎上腺素β受體有關(guān)［6］。β－受體激動(dòng)后可通過促進(jìn)受體依賴性的胞內(nèi)Ca2+大量釋放，導(dǎo)致胞內(nèi)Ca2+貯存庫(kù)耗竭，后者觸發(fā)細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，最終使胞內(nèi)鈣超載而誘發(fā)心律失常［7］。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，山楂籽黃酮提取物能明顯降低三氯甲烷誘導(dǎo)的小鼠心率失常發(fā)生率，提示了山楂籽黃酮提取物抗心律失常作用可能與抑制細(xì)胞膜上的Ca2+通道有關(guān)。

烏頭堿是川烏、附子等中藥中的有毒成分，每年都有不少因誤飲含烏頭堿藥酒的中毒事件發(fā)生，由烏頭堿誘發(fā)的心率失常則是致死的主要原因之一。烏頭堿引發(fā)心律失常主要以激活心肌細(xì)胞的快Na+通道，使心肌快Na+通道開放，加速心肌細(xì)胞Na+內(nèi)流，促細(xì)胞膜發(fā)生去極化，提高心房傳導(dǎo)組織和房室束－蒲肯野系統(tǒng)等快反應(yīng)細(xì)胞自律性，加速起搏點(diǎn)自律，誘發(fā)多源性異位節(jié)律點(diǎn)，縮短心肌不應(yīng)期，導(dǎo)致心律失常［8］?？岫∧芘c通道蛋白質(zhì)相結(jié)合，適度抑制Na+內(nèi)流，減慢傳導(dǎo)速度，延長(zhǎng)不應(yīng)期。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，山楂籽黃酮提取物對(duì)降低烏頭堿誘發(fā)的大鼠VPB及VF的發(fā)生次數(shù)均無明顯改善，但在明顯推遲室性早搏發(fā)生時(shí)間的同時(shí)，增加了誘發(fā)心率失常所需烏頭堿的消耗量。提示了山楂籽黃酮提取物對(duì)烏頭堿中毒的心臟有保護(hù)作用，意味著有更多的時(shí)間搶救患者生命。這表明了山楂籽黃酮提取物具有進(jìn)一步開發(fā)成抗心腦血管藥物的良好前景。

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