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    梅毒實驗室診斷技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀及評價

    2012-04-29 20:14:24覃羽華
    右江醫(yī)學(xué) 2012年2期
    關(guān)鍵詞:實驗室診斷梅毒評價

    覃羽華

    【關(guān)鍵詞】梅毒;實驗室診斷;評價

    文章編號:1003-1383(2012)02-0269-03中圖分類號:R 759.104.46文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

    doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2012.02.059

    梅毒(syphilis)是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。絕大多數(shù)是通過性途徑傳播,人體受感染后,螺旋體很快播散到全身,幾乎可侵犯全身各組織與器官,具有隱匿性,病程較長,人類對梅毒無先天免疫性,僅能在受感染后產(chǎn)生感染性免疫,已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再次感染。梅毒是我國重點防治的性傳播疾病之一,發(fā)病率呈逐年增加的趨勢[1]。梅毒的實驗室檢查對疾病診斷、療效觀察和判斷復(fù)發(fā)具有重要的意義,為了方便各實驗室選擇合適的檢測方法,本文就梅毒的實驗室診斷技術(shù)現(xiàn)狀作一綜述和評價。

    一、梅毒螺旋體病原學(xué)檢查

    早期梅毒在梅毒螺旋體(TP)非特異性抗體和特異性抗體還未產(chǎn)生或量較少時,是診斷梅毒最好的方法,而且檢查羊水中的TP對診斷先天性梅毒具有重要的意義。檢測的方法主要有以下幾種:①暗視野顯微鏡檢查:可用于有新鮮黏膜損傷的活動期早期梅毒患者的診斷,取硬下疳和扁平濕疣組織滲出液以及腫大淋巴結(jié)或羊水抽出液行鹽水涂片鏡檢,在暗視野顯微鏡下觀察可見螺旋狀微生物??谇缓透亻T等部位存在除TP以外的其他條件致病螺旋體,在暗視野顯微鏡下不易區(qū)分。雖然該方法簡便直觀且經(jīng)濟(jì),但易受內(nèi)用及外用藥的影響,敏感性較低,對晚期及潛伏梅毒患者不適用[2]。②鍍銀染色或墨汁染色檢查:取材涂片經(jīng)鍍銀或墨汁染色后,通過普通光學(xué)顯微鏡即可觀察到TP的形態(tài),實驗要求不高,適用于基層,但易受取材、外用藥和送檢時間等影響而出現(xiàn)假陰性的報告。③多功能顯微診斷儀檢查:是一種結(jié)合相差對比、暗視野及偏振光的可變投影顯微鏡,可直接觀察TP而不需染色及其他處理,具有方便、快速和準(zhǔn)確等優(yōu)點,對一期梅毒的診斷率較高,但儀器價格昂貴,未能在實驗室中普及[3]。④直接熒光抗體檢查:用異硫氰酸熒光素標(biāo)記TP單克隆抗體,在熒光顯微鏡下,出現(xiàn)黃綠色熒光表明TP陽性[2]??膳c其他條件致病螺旋體區(qū)分,靈敏性高于暗視野檢查,可檢測皮損分泌物、新鮮或甲醛固定組織中的梅毒螺旋體,但需要熒光顯微鏡且技術(shù)條件要求高,不適用于基層實驗室。⑤家兔感染實驗及TP培養(yǎng):實驗條件要求高,目前僅用于科研方面,未能有效在臨床中推廣應(yīng)用[3]。

    二、梅毒螺旋體血清學(xué)檢查

    梅毒血清學(xué)試驗是梅毒診斷最主要的實驗室檢查方法,TP感染人體后4~10周,機(jī)體可產(chǎn)生兩種抗體,一種是機(jī)體感染后組織受到破壞釋放出類脂成分,而后刺激機(jī)體產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗體,即非特異性抗體,另一種是抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體。其血清學(xué)檢查方法主要有以下幾種。

    1.非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 美國CDC認(rèn)可的磷脂類抗體檢測實驗包括:①性病研究實驗室試驗(VDRL);②不加熱血清反應(yīng)素試驗(USR);③快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR);④甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(TRUST),以上試驗的原理大致相同,只是在方法學(xué)上有所改良。VDRL是唯一被推薦用來檢測腦脊液反應(yīng)素的試驗,對診斷神經(jīng)性梅毒(包括無癥狀的)具有重要意義。VDRL和USR需要借助顯微鏡進(jìn)行觀察,目前實驗室常規(guī)篩查試驗多采用RPR和TRUST兩種,結(jié)果只需肉眼觀察是否有相應(yīng)顏色(黑色或紅色)的凝集顆粒出現(xiàn)[2]。由于早期梅毒在下疳出現(xiàn)1~2周內(nèi)心磷脂抗體出現(xiàn)較晚,晚期梅毒即使是未治療的患者也可能轉(zhuǎn)陰,因此該類試驗對早期、晚期、潛伏期梅毒和神經(jīng)梅毒的診斷不敏感,會出現(xiàn)假陰性。溶血、脂血和不新鮮的標(biāo)本、器具污染等因素以及受一些疾病的影響還可出現(xiàn)“生物學(xué)假陽性”。試驗還存在“血清固定”和“前帶現(xiàn)象”,故非TP抗原血清學(xué)試驗存在一定的局限,可作為梅毒篩查、療效觀察、復(fù)發(fā)和再感染判斷的指標(biāo)[4],不能作為TP確診的依據(jù)。

    2.梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗采用TP作為抗原檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG和/或IgM抗體,其方法學(xué)的敏感性和特異性均高于非TP抗原血清學(xué)試驗,一般用作確認(rèn)試驗[5],對于非TP抗原血清學(xué)試驗陽性結(jié)果真假性的判斷,以及潛伏梅毒和晚期梅毒的診斷具有重要的意義。①酶聯(lián)免疫吸附試驗(TP睧LISA):將基因重組的梅毒螺旋體膜特異性多肽抗原包被在酶標(biāo)板孔上,用雙抗原夾心法測定梅毒特異性抗體,該方法操作簡單,結(jié)果易于保存,可應(yīng)用于多份樣本自動化檢測系統(tǒng),是目前批量篩查和檢測梅毒的一種首選方法[6]。有報道[7]ELISA法和TPPA法具有高度相關(guān)性,且不受樣本中纖維蛋白和溶血等影響。②血球凝集試驗(TPHA):由于試劑中采用的紅細(xì)胞具有生物細(xì)胞活性,會產(chǎn)生非特異性凝集,造成生物學(xué)假陽性,且紅細(xì)胞保存時間有限,因此在臨床使用中存在些實際問題。TPHA的試劑較貴,操作較繁瑣費時,需要熟練技術(shù)人員進(jìn)行操作,以避免誤差。目前可作為國內(nèi)梅毒篩查陽性的確證試驗之一。③明膠顆粒凝集試驗(TPPA):TPPA原理與TPHA大致相同,只是將致敏粒子改為明膠顆粒,避免了生物因素(異嗜性抗體)造成的影響,增加了試劑的穩(wěn)定性,操作上更為簡化,敏感性和特異性也得到了提高。是美國疾病預(yù)防控制中心2002年推薦的梅毒確證試驗,也是我國實驗室近年來臨床常用的梅毒確診試驗[5]。④熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(FTA睞BS):FTA睞BS法是以Nichols株TP作為抗原,以FITC標(biāo)記的抗人球蛋白為示蹤劑,檢測待測血清(預(yù)先用Reiter株TP吸附)中的特異性抗體。該試驗具有一定的主觀性,需要熟練的技術(shù)人員和性能較優(yōu)的熒光顯微鏡才能保證準(zhǔn)確度,因此實驗室沒有將其作為常規(guī)方法運用。FTA睞BS法被認(rèn)為是“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗,具有特異性高、敏感性強的特點,可作為確證試驗,但有報道顯示[9]FTA睞BS在用于檢測合并有人類免疫缺陷病毒(HIV)感染的神經(jīng)性梅毒患者時易出現(xiàn)假陽性。⑤快速檢測試驗(包括乳膠凝集試驗和膠體金試驗):是利用基因重組制備高度純化的單克隆TP抗原檢測待測血清中的TP特異性抗體的一種診斷技術(shù)。其操作簡單,結(jié)果易讀,適用于快速檢驗,得到了各實驗室的認(rèn)可和應(yīng)用。乳膠凝集試驗的敏感度與TPPA大致相同,而特異性則稍高,兩種方法的一致性達(dá)98.8%[10],是一種理想的快速確診試驗。膠體金試驗存在一定的假陰性,在潛伏期梅毒和晚期梅毒時容易漏診,所以只能作為一般的篩檢試驗[11]。⑥免疫印跡試驗(WIT):免疫印跡法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的先進(jìn)檢測技術(shù),它結(jié)合了免疫學(xué)和分子生物學(xué)的特點。該試驗是用聚丙烯凝膠電泳將TP上的各種抗原分子分開,再轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上與待測抗體結(jié)合,如果出現(xiàn)特異性抗原區(qū)帶(47kD、17.5kD、15.5kD和45kD)即可診斷,其它螺旋體及正常人血清為陰性反應(yīng)[12]。雖然WIT的試劑費用較高,但對早期梅毒、潛伏梅毒和神經(jīng)梅毒的檢測敏感性高,特異性強,操作簡便,判斷結(jié)果客觀準(zhǔn)確重復(fù)性好,是目前常用且較優(yōu)的梅毒確診方法。

    3.梅毒螺旋體IgM與IgG 抗體的檢測在自身免疫性疾病患者、毒麻品成癮者以及1%健康人群(特別是高齡老年人[13])中,TP睮gG抗體血清學(xué)試驗可出現(xiàn)生物學(xué)假陽性。由于免疫記憶作用,在治愈后很長時間內(nèi)仍然存在較高的陽性率,甚至終身陽性,因此其陽性只能說明現(xiàn)癥感染或曾經(jīng)感染過,不能判斷疾病是否處于活動期,因此不能作為療效監(jiān)測的手段[1415]。TP睮gG抗體出現(xiàn)較晚,單獨檢測易發(fā)生漏診,TP19S睮gM抗體是梅毒螺旋體感染人體2周后,從血清中檢測出的最早抗體,通過FTA睞BS、TP睧LISA等方法檢測該抗體,用于早期診斷和療效觀察。母體中IgM抗體分子量較大不能通過胎盤,如檢測出其陽性則提示胎兒已被感染,對診斷先天性梅毒具有重要的意義。治療后IgM抗體水平可下降并消失,當(dāng)再感染時,IgM會再次升高,因此檢測IgM抗體還可以用于梅毒復(fù)發(fā)再感染的確診指標(biāo)。近年來應(yīng)用TP基因工程成功研制了能同時檢測IgM和IgG抗體的方法,靈敏度、特異性均較高[16],但存在試劑價格高等缺點,因此在基層實驗室中尚未普及。

    4.梅毒螺旋體分子生物學(xué)檢查(PCR) 梅毒螺旋體PCR檢測方法有常規(guī)PCR、巢式PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR、多重PCR和實時熒光定量PCR。常規(guī)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物易受污染造成假陽性;巢式PCR雖然能減少污染使敏感性和特異性有所增強,但實驗較為復(fù)雜;逆轉(zhuǎn)錄PCR操作繁瑣,臨床不易常規(guī)化;多重PCR目前用于與其他病原體同時檢測[17,18];實時熒光定量PCR實現(xiàn)了定性向定量的轉(zhuǎn)變,既降低了假陽性率,又不需要電泳確證,目前在臨床醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域已得到了廣泛的應(yīng)用。Heymans等[19]選擇TP polA作為靶基因?qū)σ伤泼范净颊哌M(jìn)行檢測,結(jié)果顯示特異性和敏感性均高于暗視野顯微鏡檢查。一期梅毒硬下疳和二期梅毒扁平濕疣處分泌物TP睤NA法檢測陽性率可達(dá)100.0%[20],但當(dāng)皮損開始愈合分泌物減少時,TP睤NA試驗易出現(xiàn)假陰性,所以PCR檢測不能作為判斷治愈的指標(biāo),只能作為血清學(xué)方法的補充方法。

    綜上所述,梅毒螺旋體實驗室的診斷方法多種多樣,每種試驗方法的臨床應(yīng)用價值各不相同,都存在各自的優(yōu)缺點,目前還沒有一種試驗方法能全面滿足臨床要求,必要時應(yīng)對多個指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測, 陽性結(jié)果必須結(jié)合患者的病史和臨床癥狀,以提高診斷結(jié)果的正確率, 避免漏診或誤診的發(fā)生。各級醫(yī)療單位和機(jī)構(gòu)應(yīng)掌握每種試驗方法的性能及應(yīng)用,根據(jù)自身的特點和需要選擇合適的試驗方法和組合方式。相信隨著科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展,梅毒的實驗室診斷方法將變得更加簡單、準(zhǔn)確、全面且經(jīng)濟(jì)實用。

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    (收稿日期:2012-01-18修回日期:2012-04-10)

    (編輯:潘明志)

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