Galectin-3、CK19在橋本氏甲狀腺炎中的表達(dá)及意義

幸世濤　吳燕霞

[摘要] 目的 分析橋本氏甲狀腺炎（HT）中Galectin-3及CK19的表達(dá)情況，探討Galectin-3、CK19在HT合并甲狀腺乳頭狀癌（PTC）及HT伴不典型細(xì)胞群中的表達(dá)意義。 方法 復(fù)習(xí)我院存檔的HT病例切片，選取18例伴不典型細(xì)胞群的HT、18例伴PTC的HT，以20例單純橋本氏甲狀腺炎的病變組織做對(duì)照。行免疫組化單克隆抗體染色，一抗為Galectin-3和CK19，統(tǒng)計(jì)并分析。 結(jié)果 Galectin-3在HT伴PTC、HT伴不典型細(xì)胞群及對(duì)照組的表達(dá)率分別為83%、11%、5%，第一組與后兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），后兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05）。CK19在HT伴PTC、HT伴不典型細(xì)胞群及對(duì)照組的表達(dá)率分別為89%、78%、10%，前兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05），前兩組與對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 結(jié)論 HT增生淋巴組織周圍?？梢姴坏湫图?xì)胞群，這些不典型細(xì)胞群有時(shí)與PTC難以區(qū)分，通過Galectin-3、CK19聯(lián)合免疫組化染色有助于判斷不典型細(xì)胞群的性質(zhì)。

[關(guān)鍵詞] Galectin-3；CK19；橋本氏甲狀腺炎；不典型細(xì)胞群；乳頭狀癌

[中圖分類號(hào)] R736.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）29-0086-02

橋本氏甲狀腺炎（Hashimoto thyroiditis，HT）又稱慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎（chronic lymphocyticthyroiditis，CLT），由日本學(xué)者Hashimoto（橋本）于1912年首先報(bào)道并描述[1]，是以甲狀腺組織中淋巴細(xì)胞彌漫浸潤(rùn)、淋巴濾泡形成及濾泡上皮嗜酸性變?yōu)橹饕卣鞯募谞钕傺装Y性病變。目前認(rèn)為HT與自身免疫有關(guān)，以30～50歲女性多見，起病隱匿，發(fā)展緩慢，病程較長(zhǎng)。不少學(xué)者觀察發(fā)現(xiàn)，HT病變中增生淋巴組織周圍常見PTC核樣改變的不典型細(xì)胞群，并可檢測(cè)到具有PTC特征的基因重排，并認(rèn)為該基因重排是HT癌變的分子學(xué)基礎(chǔ)[2]，但是否可以就此判斷為HT伴PTC仍有較大分岐。Galectin-3和CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)意義已較明確，Galectin-3、CK19聯(lián)合應(yīng)用可提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的敏感性[3]，但這兩種抗體在橋本甲狀腺炎中的研究較少。本文試圖通過檢測(cè)橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌（PTC）和HT病變中具有PTC核樣改變的不典型細(xì)胞群中Galectin-3、CK19的表達(dá)，初步探討Galectin-3、CK19在橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌及橋本氏甲狀腺炎不典型細(xì)胞群中的表達(dá)意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2006年8月～2011年8月存檔的橋本氏甲狀腺炎及橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌病例，復(fù)習(xí)并選取其中臨床資料完整的56例，其中橋本氏甲狀腺炎伴PTC核樣不典型細(xì)胞群18例、橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌18例，單純性橋本氏甲狀腺炎20例。患者均為女性，中位年齡43歲。

1.2 方法

對(duì)上述56例患者病案蠟塊切片行HE染色及免疫組化染色，一抗即用型抗體為Galectin-3和CK19，染色方法為即用型（非生物素）Envison二步法，所有抗體及免疫組化試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)開發(fā)公司。染色步驟按試劑盒說明書操作：切片常規(guī)脫蠟至水，PBS沖冼；高溫高壓抗原修復(fù)2 min，滴加一抗4℃過夜，PBS沖洗后滴加非生物素二抗，25℃孵育15 min，PBS沖洗后滴加新鮮配制的DAB顯色液，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，脫水透明后中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判斷

結(jié)果以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)算1000個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞的比例，無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-），陽性細(xì)胞數(shù)10%~25%為輕度陽性（+），26%~50%為中度陽性（++），＞50%為強(qiáng)陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，陽性率用相對(duì)數(shù)表示，組間資料采用χ2檢驗(yàn)，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理檢查

橋本氏甲狀腺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)：①甲狀腺實(shí)質(zhì)彌漫性淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，伴或不伴淋巴濾泡形成。②淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)甲狀腺濾泡，濾泡上皮變性、壞死或崩潰。③甲狀腺濾泡萎縮。④濾泡上皮嗜酸性變及間質(zhì)纖維化。PTC核樣不典型細(xì)胞群的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：一般位于增生的淋巴濾泡周圍或陷于淋巴濾泡內(nèi)，細(xì)胞立方或柱狀，排列不規(guī)則、較擁擠，胞質(zhì)淡染或嗜酸，核增大，圓形或橢圓形，呈毛玻璃樣改變，部分細(xì)胞核內(nèi)可見核溝或核內(nèi)包涵體樣結(jié)構(gòu)，核/質(zhì)比增大，但不足于診斷乳頭狀癌（封三圖1、2）。橋本氏甲狀腺炎合并乳頭狀癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)：同時(shí)具有橋本氏甲狀腺炎和典型甲狀腺乳頭狀癌的形態(tài)特征，且以橋本甲狀腺炎病變?yōu)橹?，乳頭狀癌往往為微小癌。

2.2 免疫組化染色結(jié)果

表1顯示，Galectin-3在HT合并PTC中的陽性表達(dá)顯著高于單純HT及HT伴PTC核樣不典型細(xì)胞群，且多數(shù)為較強(qiáng)的陽性表達(dá)（++～+++），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），而單純HT與HT伴PTC樣不典型細(xì)胞群Galectin-3的表達(dá)率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05）。

表2顯示，CK19在HT合并PTC及HT伴PTC核樣不典型細(xì)胞群中的表達(dá)（封三圖3）顯著強(qiáng)于單純HT，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。

Galectin-3、CK19在HT合并PTC中均有強(qiáng)陽性表達(dá)，而表3顯示在HT伴PTC核樣不典型細(xì)胞群的病變組織中，Galectin-3和CK19的表達(dá)有顯著差異（P ＜ 0.05），Galectin-3在HT伴不典型細(xì)胞群中的表達(dá)顯著低于CK19在HT伴不典型細(xì)胞群中的表達(dá)，即便陽性，也大都為弱陽性（封三圖4）。

表1～3顯示，Galectin-3和CK19在HT合并PTC中均有強(qiáng)陽性表達(dá)，在單純HT中的表達(dá)率較低，而在HT伴不典型細(xì)胞群中Galectin-3的表達(dá)顯著低于CK19（P ＜ 0.05）。因此，在HT中若發(fā)現(xiàn)不典型細(xì)胞群，難于判斷是否為HT合并PTC時(shí)，可聯(lián)合檢測(cè)Galectin-3和CK19，若兩者均有強(qiáng)陽性表達(dá)，則應(yīng)考慮HT合并PTC；若僅CK19強(qiáng)陽性而Galectin-3陰性或弱陽性，則應(yīng)考慮為HT伴不典型細(xì)胞群，建議復(fù)查隨訪。

3討論

惡性腫瘤的治愈關(guān)鍵在于早發(fā)現(xiàn)、早治療。甲狀腺癌早期病變常無特殊癥狀和體征，臨床診斷常較困難，病理科報(bào)告的甲狀腺癌大多數(shù)是在臨床診斷橋本病或結(jié)節(jié)性甲狀腺腫而手術(shù)切除的標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)的。近年來，橋本甲狀腺炎伴乳頭狀癌的高比例已引起很多學(xué)者的重視，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為HT與PTC間有密切關(guān)系[5]，其發(fā)生是包括癌基因突變、重排、內(nèi)分泌以及免疫等機(jī)體自身穩(wěn)定系統(tǒng)調(diào)控失常等多種因素綜合作用的結(jié)果。擺在病理學(xué)者面前的問題是如何在HT病變中發(fā)現(xiàn)早期PTC病灶，以不至于漏診。

Galectin-3是一種具有氨基末端和羧基末端糖類識(shí)別區(qū)的糖類結(jié)合蛋白，存在于多種組織細(xì)胞的胞核、胞漿、胞膜及細(xì)胞間。許多研究顯示，Galectin-3可以通過刺激細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，阻止腫瘤細(xì)胞凋亡以及促進(jìn)血管生成、腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移中起重要作用[6，7]。

細(xì)胞角蛋白主要存在于正常上皮和各種上皮來源的腫瘤中，是哺乳動(dòng)物細(xì)胞5種支架成份之一，CK19分子量為40 kD，是一種低分子量角蛋白，由KRT19基因編碼，正常組織中含量極少，當(dāng)細(xì)胞癌變時(shí)CK19含量升高并被釋放出來。

本組試驗(yàn)表明，Galectin-3、CK19在HT合并PTC病變中均有較強(qiáng)陽性表達(dá)，兩組間無顯著差異，但在單純HT中的表達(dá)較弱，即便陽性也是散在弱陽性表達(dá)，與HT合并PTC中的表達(dá)有顯著差異。因此，Galectin-3、CK19聯(lián)合檢測(cè)的強(qiáng)陽性表達(dá)可作為診斷HT合并PTC的輔助指標(biāo)，甚至有學(xué)者指出，HT中Galectin-3的強(qiáng)陽性表達(dá)應(yīng)視為癌變[8]。而對(duì)于HT病變中的不典型細(xì)胞群，CK19和Galectin-3的表達(dá)則有顯著差異，CK19的表達(dá)較強(qiáng)，其強(qiáng)度與HT伴PTC相當(dāng)，與Prasad等[9]、張寶燕、李向紅等[4]的研究非常接近，提示某些HT中的PTC核樣不典型細(xì)胞群在細(xì)胞骨架水平上發(fā)生了改變，而獲得了PTC的某些免疫表型特征，可能是HT合并PTC的前驅(qū)病變。但Galectin-3的表達(dá)率顯著偏低，且陽性較弱、散，這也提示不典型細(xì)胞群還并非真正意義上的PTC，應(yīng)引起足夠的重視。因此，我們?cè)谂R床病理工作中遇到的HT不典型細(xì)胞群，若診斷上難于把握，聯(lián)合檢測(cè)Galectin-3和CK19將有助于做出正確判斷。

綜上所述，Galectin-3、CK19聯(lián)合檢測(cè)可作為早期判斷HT合并PTC的靈敏標(biāo)記，還可用于判斷HT病變中具PTC核樣不典型細(xì)胞群是否為微小PTC病變的有用標(biāo)記。對(duì)于針吸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，隨著細(xì)胞蠟塊技術(shù)及快速免疫組化技術(shù)的興起，相信Galectin-3、CK19在早期發(fā)現(xiàn)HT合并PTC的應(yīng)用價(jià)值會(huì)凸顯出來。

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[4]張寶燕，李向紅，王金泉，等. 橋本氏甲狀腺炎不典型細(xì)胞群Galectin-3、CK19、CK7的表達(dá)及意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2009，25（5）：519-522.

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（收稿日期：2012-05-23）