五味子及其單味制劑中木質(zhì)素類成分相對差異研究*

張亞鋒，荀 英，孫 曉△，李 榮，單 敏，陳玉龍

（1. 陜西省西安市食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710054； 2. 陜西省渭南市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 渭南 714000；

3. 陜西省藥品技術(shù)審核查驗(yàn)中心，陜西 西安 710065）

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill. 的干燥成熟果實(shí)，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。作為藥食同源的傳統(tǒng)中藥材，五味子含有多種化學(xué)成分，有益氣斂肺、解毒保肝、生津止渴、滋腎澀精、寧心安神、抗菌、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等功效，臨床常用于治療肺炎、肝病、心臟病、失眠等且五味子多糖具有較好的免疫促進(jìn)和抑瘤作用［1-9］。五味子顆粒是五味子加水煎煮2 次后濃縮加入輔料，制成顆粒所得。五味子糖漿是五味子粗粉，用30%乙醇浸漬72 h 后，滲漉加入輔料所得。2015年版《中國藥典（一部）》收錄的含量測定項(xiàng)，五味子、五味子顆粒、五味子糖漿的含量測定指標(biāo)均為五味子典型成分五味子醇甲?；诖酥笜?biāo)分析，抽查的30 批次樣品均符合規(guī)定，但成品狀態(tài)、工藝、劑型均不同［10］，會導(dǎo)致三者間木質(zhì)素類成分有差異。本研究中采用多組分峰面積比較法評價(jià)五味子藥材及其單味制劑中木質(zhì)素類成分相對含量的差異，即以樣品中某一典型成分（五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物），以其響應(yīng)面積作為1，計(jì)算其余成分（五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素）響應(yīng)面積的相對比例，進(jìn)而比較不同工藝產(chǎn)品間的差異?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate 3000 型高效液相色譜儀（Chromeleon 7.2工作站，UV 檢測器，Thermo Fisher Scientific）；ME204E型電子分析天平（精度為萬分之一），MS105 型電子分析天平（精度為十萬分之一），均購自德國Mettler-Toledo 公司；KQ700VDB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為700 W，頻率為45 kHz）。

1.2 試藥

五味子醇甲對照品（批號為110857-201010），五味子酯甲對照品（批號為110857-201714），五味子甲素對照品（批號為110764-201010），五味子乙素對照品（批號為110765-200710），均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher）；水為超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）；五味子藥材、五味子顆粒、五味子糖漿均為監(jiān)督抽樣樣品，各隨機(jī)選取10 批次。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：OMNI BOND C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0 ～15 min 時(shí)50%A，15 ～25 min 時(shí)50%A ～55%A，25 ～30 min 時(shí)55%A ～75%A，30 ～38 min 時(shí)75%A，38 ～43 min 時(shí)75% A ～65% A，43 ～49 min 時(shí) 65% A ～50% A）；流 速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：217 nm；進(jìn)樣量：10 μL［11-19］。

2.2 溶液制備

分別精密稱取1.2 項(xiàng)下各對照品適量，置25 mL 容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得對照品溶液。取五味子藥材適量，研細(xì)，取0.3 g，精密稱定，置100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min（功率為250 W，頻率為20 kHz），放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得五味子藥材供試品溶液。取五味子顆粒適量，研細(xì)，取0.9 g，精密稱定，按五味子藥材供試品溶液制備方法制備五味子顆粒供試品溶液。精密吸取五味子糖漿3 mL，按五味子藥材供試品溶液制備方法制備五味子糖漿供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

本研究中對含量測定方法進(jìn)行了專屬性、耐用性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、加樣回收試驗(yàn)等方法學(xué)考察。結(jié)果表明，本研究中所采用含量測定方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于五味子及其單味制劑中木質(zhì)素類成分相對差異探究的數(shù)據(jù)采集處理分析。

2.4 樣品含量測定

將對照品溶液，空白溶劑，五味子藥材、五味子顆粒、五味子糖漿供試品溶液分別按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。色譜圖見圖1，峰面積見表1 至表3。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 測定結(jié)果分析

以樣品中五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物，以其響應(yīng)面積作為1，計(jì)算五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素響應(yīng)面積的相對比值，采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，繪制箱型圖，詳見圖2。

3 討論

3.1 3 種木質(zhì)素類成分相對比值分析

五味子酯甲在以五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物的相對比值分析中，五味子藥材高于五味子顆粒，五味子糖漿次之，相對比值中位數(shù)依次為0.035，0.029，0.013。五味子甲素在以五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物的相對比值分析中，五味子藥材高于五味子顆粒，五味子糖漿次之，相對比值中位數(shù)依次為0.224，0.165，0.031。五味子乙素在以五味子醇甲為內(nèi)標(biāo)物的相對比值分析中，五味子藥材高于五味子顆粒，五味子糖漿次之，相對比值中位數(shù)依次為0.464，0.330，0.012。

3.2 同一劑型相對差異分析

五味子顆粒采用五味子加水煎煮，水提液濃縮，加乙醇濃縮，添加輔料制粒等工藝步驟，工藝較五味子糖漿更煩瑣。結(jié)果顯示，五味子顆粒中木質(zhì)素類成分相對比值較五味子糖漿更離散，分析原因可能與五味子藥材大小、煎煮溶劑水量、水提液濃縮溫度、回收乙醇濃縮溫度、制粒方式、顆粒干燥溫度等多因素有關(guān)［20-23］。

五味子糖漿采用30%乙醇浸漬滲漉、添加輔料的工藝步驟，相比五味子顆粒、五味子糖漿生產(chǎn)工藝更簡單、可控。結(jié)果顯示，五味子糖漿木質(zhì)素類成分相對比值較五味子顆粒更集中，分析原因發(fā)現(xiàn)，五味子糖漿采用粗粉，原料大小均一；滲漉法提取，影響因素更少，從數(shù)據(jù)離散角度分析，五味子糖漿工藝更穩(wěn)定、可控。

表1 五味子藥材中木質(zhì)素類成分相對比值測定結(jié)果

表2 五味子顆粒中木質(zhì)素類成分相對比值測定結(jié)果

表3 五味子糖漿中木質(zhì)素類成分相對比值測定結(jié)果

3.3 不同劑型相對差異分析

結(jié)果顯示，五味子顆粒中的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素相對提取率高于五味子糖漿。分析制劑工藝過程，得出可能與五味子顆粒采用水煎煮提取方法、提取過程劇烈、提取溫度高致使木質(zhì)素類組分的溶解度增大有關(guān)，從整體木質(zhì)素類組分相對提取率角度分析，五味子顆粒工藝提取效果更好。提示大生產(chǎn)時(shí)應(yīng)進(jìn)行藥效學(xué)物質(zhì)提取率和工藝穩(wěn)定性的綜合考量，篩選出更科學(xué)、可靠、經(jīng)濟(jì)的制劑工藝。

3.4 評價(jià)方法選擇

本研究中采用的評價(jià)方法對藥品的評價(jià)將不局限于單一組分，更加全面、科學(xué)；只需對某一典型成分進(jìn)行含量測定，后期建立科學(xué)、可靠的譜效比例關(guān)系后，只需在相同色譜條件下進(jìn)行峰面積比較即可得出結(jié)論；方便快捷，任意一針分析樣品色譜圖即可計(jì)算積分，完成質(zhì)量評價(jià)，更加便捷，極大地避免了人員操作誤差（稱量誤差、定容誤差等）和儀器誤差（進(jìn)樣量誤差等），數(shù)據(jù)結(jié)果更可靠，質(zhì)量評價(jià)更全面。但此方法對提取溶劑、檢測波長、色譜分離等要求更嚴(yán)苛，尤其在分析評價(jià)處方組成較復(fù)雜的復(fù)方制劑時(shí)更困難。該方法對于評價(jià)五味子藥材、五味子顆粒和五味子糖漿中多組分相對含量差異與傳統(tǒng)方法結(jié)果一致，且操作更簡單快速，更易避免操作誤差，且計(jì)算方便。

圖2 箱型圖