高效液相色譜法測定四消丸中氫溴酸檳榔堿含量*

杜 攀，李 培，董 清，龐 博

（山東省聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東 聊城 252000）

四消丸由大黃（酒炒）、豬牙皂（炒）、牽牛子（炒）、牽牛子、香附、檳榔、五靈脂（醋炒）組方，具有消水、消痰、消食、消氣、導(dǎo)滯通便的功效，用于治療氣食痰水、停積不化、胸脘飽悶、腹脹疼痛、大便秘結(jié)。檳榔有效成分氫溴酸檳榔堿可使胃腸平滑肌張力升高，增加腸蠕動，使消化液分泌旺盛，增加食欲［1］，能增強四消丸消食、消氣的藥效，因此測定四消丸中氫溴酸檳榔堿的含量具有非常重要的意義。目前執(zhí)行的四消丸檢驗標(biāo)準(zhǔn)中無氫溴酸檳榔堿含量測定項，也無檳榔藥材的薄層鑒別［2-3］。在山東省開展的中成藥檢驗專項工作中，發(fā)現(xiàn)各生產(chǎn)廠家對四消丸的中藥材投料存在差異，甚至存在檳榔未投料的情況。為了更好地進行質(zhì)量控制，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法［4-8］對5 個廠家9 批四消丸中的氫溴酸檳榔堿含量進行測定?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200SL 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；BT125D 型雙量程電子分析天平（北京Sartorius 公司，精度為0.1 mg）；pHS-3C 型精密pH 計（上海雷磁儀器廠）；微孔濾膜（0.22 μm，美國津騰公司）。

1.2 試藥

四消丸（山東孔圣堂制藥有限公司，批號分別為1703088，1702035，1701074；河南明善堂藥業(yè)有限公司，批號分別為170402，170105；河南康華藥業(yè)股份有限公司，批號分別為17010101，17010302；山西華康藥業(yè)股份有限公司，批號為20170204；河南潤弘本草制藥有限公司，批號為170403）。氫溴酸檳榔堿（中國食品藥品檢定研究院，批號為111684-201602，供含量測定用，純度 為99.8% ）。乙 腈（瑞 典Oceanpak 公 司，批 號 為16100115G001，純度不低于99.9%）；乙醚（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號為20160419，純度不低于99.7%）；磷酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號為20170313，純度不低于85%）；氨水（萊陽經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠，批號為20150528，純度為25% ～28% ）；碳酸鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號為20160217，純度大于99%）；碳酸氫鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號為20160830，純度大于99%）；均為分析純。自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate XB -SCX 柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-磷酸溶液（2→1 000，濃氨試液調(diào)節(jié)pH 至3.8，55 ∶45，V/ V）；檢測波長：215 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL［9-12］。

2.2 溶液制備

取氫溴酸檳榔堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL 的溶液，即得對照品溶液。取樣品粉末約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醚50 mL，再加碳酸鹽緩沖液3 mL，放置30 min，時時振搖，加熱回流30 min，分取乙醚液，加入盛有磷酸溶液（5→1 000）1 mL 的蒸發(fā)皿中；殘渣加乙醚，加熱回流提取2 次（30 mL，20 mL），每次15 min，合并乙醚液，置同一蒸發(fā)皿中，揮去乙醚，殘渣加50%乙腈溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，加50%乙腈至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：按處方比例，稱取不含檳榔的其余藥材，按處方工藝制成細(xì)粉，過5 號篩［13］，取2.072 g，作為陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液，依法進樣測定。結(jié)果在對照品溶液色譜氫溴酸檳榔堿（RT=36.5）位置，供試品溶液和陽性對照品溶液均檢出相應(yīng)色譜峰，而陰性對照無干擾。色譜圖見圖1，表明方法專屬性較好。

線性關(guān)系考察：取氫溴酸檳榔堿對照品0.010 44 g，精密稱定，加流動相制成含氫溴酸檳榔堿208.8 μg/mL的 溶液，進行倍比稀釋，得208.8，167.04，125.28，104.40，83.52，52.50，20.88，10.44 μg /mL 系列質(zhì)量濃度的對照品溶液。分別取10μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以質(zhì)量濃度（X，μg /mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=23.201X-5.888（R2=0.999 7）。結(jié)果表明，氫溴酸檳榔堿質(zhì)量濃度在10.44 ～208.80 μg /mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好［14-15］。

精密度試驗：取線性關(guān)系考察項下質(zhì)量濃度為104.4 μg /mL 的對照品溶液，重復(fù)進樣5 次，每次10 μL，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.40%（n=5），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗：稱取同一批（批號為1703088）樣品6 份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結(jié)果含量的RSD為1.82%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

表1 氫溴酸檳榔堿加樣回收試驗結(jié)果（ n=6）

穩(wěn)定性試驗：精密吸取重復(fù)性試驗項下供試品溶液，分別于0，2，6，12，20，24 h 時進樣測定。結(jié)果氫溴酸檳榔堿峰面積積分值的RSD為0.14%（n=6），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批（批號為1703088）樣品6 份，精密稱定，同時精密加入質(zhì)量濃度為104.4 μg /mL 的對照品溶液5 mL，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取5 個廠家每個批號的樣品各2 份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結(jié)果見表2。

表2 各批樣品中氫溴酸檳榔堿含量測定結(jié)果

2.5 陽性樣品含量測定

按處方比例稱取各種藥材，按工藝方法制成細(xì)粉，過5 號篩，即得陽性樣品。取5 份陽性樣品，精密稱定，依法制備供試品溶液方法制備陽性樣品溶液，依法進樣測定。結(jié)果陽性樣品中氫溴酸檳榔堿的平均含量為0.312 mg/g。

3 討論

本研究中采用HPLC 法測定四消丸中氫溴酸檳榔堿的含量，方法簡便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能用于準(zhǔn)確檢測四消丸中檳榔堿的含量，可用于控制四消丸的產(chǎn)品質(zhì)量。由樣品含量測定結(jié)果可見，目前生產(chǎn)四消丸的廠家普遍存在檳榔投料低于處方規(guī)定量的現(xiàn)象，建議建立測定四消丸中氫溴酸檳榔堿含量的HPLC 法，增加檳榔藥材的薄層色譜鑒別項目，提高藥品質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)。