醬油中對羥基苯甲酸酯類的測定

齊懿鳴，孫英麗

（1.黑龍江省農(nóng)墾乳品檢測中心，哈爾濱 150090；2.黑龍江完達山哈爾濱乳品有限公司，哈爾濱，150078）

對羥基苯甲酸酯( parabens) 又名尼泊金酯，是一類由對羥基苯甲酸所形成的酯，因其抗菌譜廣，在空氣中穩(wěn)定、對酸堿穩(wěn)定、低毒和價格低廉等諸多優(yōu)點，被廣泛用做食品、藥品、化妝品等的防腐抗菌劑。對羥基苯甲酸酯雖然可以被人體快速吸收、代謝并排泄，但近年來有研究顯示，該類物質(zhì)和其代謝物具有弱雌激素活性，可能是乳房癌和男性不育等疾病的誘因[1]。對羥基苯甲酸酯最大允許使用量（以對羥基苯甲酸計），醬油、果醬（罐頭除外）、醬及醬制品、果蔬汁（肉）飲料、風味飲料0.25g/kg、經(jīng)表面處理的鮮水果、新鮮蔬菜0.012g/kg；焙烤食品餡料（僅限糕點餡）0.5g/kg；熱凝固蛋制品（如蛋黃酪、松花蛋腸）、碳酸飲料0.2g/kg；醋0.1 g/kg。對羥基苯甲酸也用作染料、農(nóng)藥的中間體。在農(nóng)藥中用于合成有機磷殺蟲劑GYAP、CYP；在染料工業(yè)中用于合成熱敏染料的顯色劑；還可用于彩色膠片及合成油溶性成色劑“538”及尼龍12中用作增塑劑的生產(chǎn)原料。另外，還用于液晶聚合物和塑料。

本文所采用的方法參考了GB/T 5009.31-2003[2]，對樣品前處理和色譜分析方法進行優(yōu)化改進，并用GB/T 5009.1-2003附錄A計算檢出限、精密度、回收率等。該法適用于檢測醋、果汁、果醬及含乳飲料等食品中對羥基苯甲酸酯類的檢測。

1 材料與方法

1.1 方法提要

試樣酸化后，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮后，用氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，外標法定量。

2.2 試劑

2.2.1 乙醚、重蒸。

2.2.2 無水硫酸鈉。

2.2.3 飽和氯化鈉溶液。

2.2.4 無水乙醇。

2.2.5 10g/L碳酸氫鈉溶液。

2.2.6 1：1鹽酸：量取50mL鹽酸，用水稀釋至100mL。

2.2.7 對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標準溶液：準確稱取對羥基苯甲酸乙酯、丙酯各0.1000g溶于100mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，該溶液1mg/mL。

2.2.8 對羥基苯甲酸乙酯、丙酯使用溶液：分別吸取0.5mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標準溶液于10mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，此時濃度分別為0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.60mg/mL、0.80mg/mL。

2.3 儀器和設備

2.3.1 氣相色譜儀：配有FID檢測器。

2.3.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

2.4 測定步驟

2.4.1 提取凈化

稱取5g的醬油于125mL分液漏斗中。加入1：1鹽酸酸化，10Mlbaohe 氯化鈉溶液，搖勻，分別以75mL、50 mL、50 mL乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，棄去水層，合并乙醚層于250mL分液漏斗中，加10mL飽和氯化鈉溶液洗滌一次，再分別以10g/L碳酸氫鈉溶液30mL、30mL、30mL、洗滌三次，棄去水層。將提取液經(jīng)事先裝有15—20g無水硫酸鈉的漏斗濾入250mL 瓶底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，然后轉(zhuǎn)移定容至5mL容量瓶中，供氣相色譜儀用。

2.4.2 測定

2.4.2.1 色譜條件

色譜柱：DB-1701毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 um）；

進樣量：1 μL；

分流比：20：1

進樣口溫度：230 ℃；

載氣：氮氣，1 mL/min；

升溫程序：100 ℃保持1 min，以10 ℃/min進行升溫，達到250 ℃保持2 min；

檢測器溫度：250 ℃；

H2流速：45 mL/min；

Air流速：450 mL/min。

2.4.2.2 標準曲線

將對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標準系列溶液分別進樣后，以標樣濃度對峰面積作標準曲線。線性相關系數(shù)為0.9990以上。

2.4.2.3 將試樣進樣，根據(jù)標準品的保留時間定性樣品中對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的色譜峰。根據(jù)樣品的峰面積，查標準曲線得出對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的含量。

2.5 結(jié)果計算

樣品中對羥基苯甲酸酯類含量按式計算：

式中：X——樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，單位為毫克每千克（g/kg）；

C——從標準曲線求得測定溶液中對羥基苯甲酸酯類的含量，單位為微克每毫升（mg/mL）；

V——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

所得結(jié)果保留兩位小數(shù)。

在重復條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。

5 檢測方法評價

5.1 線性分析范圍評價

將標準使用液按照色譜條件，注入氣相色譜儀，以峰面積進行定量，繪制成曲線。見圖1、圖2。Y1= (-5542.225053) +(915976.434764) X；R2=0.999827；Y2= (-5898.232289) +(974952.472964)X；R2= 0.999898

圖1 對羥基苯甲酸乙酯標準曲線

圖2 對羥基苯甲酸丙酯標準曲線

表1 對羥基苯甲酸乙酯測定結(jié)果統(tǒng)計（空白樣品測定含量為0g/kg）

表2 對羥基苯甲酸丙酯測定結(jié)果統(tǒng)計（空白樣品測定含量為0g/kg）

從圖1和圖2中可以看出對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的檢測范圍在0.05—0.80mg/mL范圍內(nèi)，線性良好，相關系數(shù)R=0.9998。

5.2 方法的準確度，精密度評價

用標準加入回收實驗驗證方法的準確度，用平行試驗的精密度驗證方法的重復性。按照方法要求來處理樣品，所有樣品均稱取5g，在樣品中分別添加0.4mg、0.6mg、0.8mg三個梯度的對羥基苯甲酸酯類混合溶液，同時測定空白樣品，按照方法進行處理。按以上方法的色譜條件下進樣，結(jié)果見表1、表2。

0.4 ppm標準溶液重復7次分析匯總報告：如表3、表4所示。

表3 對羥基苯甲酸乙酯精密度分析結(jié)果

表4 對羥基苯甲酸丙酯精密度分析結(jié)果

要求在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對值不得超過算術平均值的10%，所以此方法的精密度很高。

5.3 方法的檢測底限評價

根據(jù)3倍信噪比所對應的濃度，計算得到對羥基苯甲酸乙酯的檢出限為1mg/kg，對羥基苯甲酸丙酯的檢出限為1mg/kg。

5.4 重現(xiàn)性

在本實驗室內(nèi)，通過人員比對實驗來驗證方法的重現(xiàn)性。實驗員甲和乙用同一檢測方法，同一檢測儀器在不同時間，做一批樣品，結(jié)果見表5、表6。

表5 實驗員甲乙實驗結(jié)果比對（對羥基苯甲酸乙酯）

表6 實驗員甲乙實驗結(jié)果比對（對羥基苯甲酸丙酯）

表3、表4結(jié)果表明：濃度在0.082g/kg時，實驗員甲對羥基苯甲酸乙酯RSD%=2.21%、對羥基苯甲酸丙酯RSD%=1.71%，實驗員乙對羥基苯甲酸乙酯RSD%=1.23%、對羥基苯甲酸丙酯RSD%=0.81%。對甲乙兩人的檢驗結(jié)果，進行F檢驗和t檢驗，結(jié)果表明兩人的對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯檢驗結(jié)果無顯著差異。

6 結(jié)論

通過驗證，對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯測定濃度在0.05—0.80mg/mL范圍內(nèi)線性良好，相關系數(shù)R=0.9998，檢出限為1mg/kg，加標回收率在93.51%～95.94%之間，RSD%在所要求范圍內(nèi)，對雙人比對實驗結(jié)果進行F檢驗和t檢驗，結(jié)果表明其檢驗結(jié)果無顯著差異。

從以上數(shù)據(jù)可以看出該方法檢測醬油中對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯，結(jié)果準確可靠，可以適用于本實驗室在實際工作運用此方法檢測醬油中對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯的含量。

[1] 岳強.對羥基苯甲酸酯在人體中的暴露研究進展，北方環(huán)境，第23 卷第3 期2011 年3 月

[2] GB/T 5009.31－2003 食品中對羥基苯甲酸酯類的測定。