乙型肝炎核心抗體陽(yáng)性與DNA之間的關(guān)系

邵 華（徐州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 徐州 221003）

乙型肝炎是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的傳染病，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，每年有100萬(wàn)人死于本病，我國(guó)為乙型肝炎高發(fā)區(qū)，約有1.2億人為乙型肝炎病毒（HBV）攜帶者［1］。據(jù)全國(guó)病毒性肝炎流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，在我國(guó)一般人群中乙型肝炎病核心抗體（抗－HBc）陽(yáng)性率為49.8%，其中多數(shù)人為單項(xiàng)抗－HBc陽(yáng)性。本文針對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定的單項(xiàng)抗－HBc陽(yáng)性的血清，用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)其HBV DNA的含量，并探討其相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 血清標(biāo)本來(lái)源于本院2008年8月至2011年5月的門(mén)診和住院患者的HBV標(biāo)志物檢測(cè)中單純抗－HBc陽(yáng)性的標(biāo)本共計(jì)376份，其中男205例，女171例，年齡18～65歲。

1.2 儀器與試劑 血清標(biāo)志物儀器為BIO RAD－680酶標(biāo)儀測(cè)定，采用上?？迫A有限公司ELISA試劑盒。HBV DNA檢測(cè)儀器為羅氏公司Lightcycler 3.0熒光定量擴(kuò)增儀，檢測(cè)試劑由廣州達(dá)安生物公司提供。

1.3 方法 HBV標(biāo)志物采用ELISA進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按說(shuō)明操作書(shū)，結(jié)果由BR－680酶標(biāo)儀測(cè)定，每一批標(biāo)本均設(shè)陰陽(yáng)性和臨界對(duì)照。熒光定量PCR測(cè)定HBV DNA嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)和儀器廠家提供的方法進(jìn)行。每次試驗(yàn)設(shè)立4個(gè)HBV DNA標(biāo)準(zhǔn)品系列濃度，分別為1×104、1×105、1×106、1×107，其檢測(cè)靈敏度為1×103copy／mL，嚴(yán)格按照Agrawal等［2］提出的防污染措施進(jìn)行試驗(yàn)操作。

2 結(jié) 果

定量結(jié)果采用HBV DNA拷貝數(shù)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，在376例HBC陽(yáng)性患者中，HBV DNA陽(yáng)性有21例，陽(yáng)性率為5.58%。其中拷貝數(shù)在103以下的有7例，拷貝數(shù)在103～104之間的為9例，拷貝數(shù)在104～105之間的為4例，拷貝數(shù)在105～106的為1例。

3 討 論

本研究結(jié)果表明，376例抗－HBc陽(yáng)性患者中，HBV DNA的陽(yáng)性率為5.58%，低于文獻(xiàn)［3］報(bào)道7.14%的陽(yáng)性率，可能與病毒的區(qū)域分布或基因突變有關(guān)。HBV標(biāo)志物是HBV感染的實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)檢測(cè)手段，它檢測(cè)的是抗原抗體，是反映人體對(duì)HBV的免疫應(yīng)答狀態(tài)。由于HBV的表達(dá)和機(jī)體免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱受多種因素影響，因此，反映患者體內(nèi)病毒復(fù)制時(shí)有一定局限性［4］。特別是對(duì)于單純抗－HBc陽(yáng)性的患者，很難判斷出其體內(nèi)有無(wú)病毒復(fù)制。而PCR技術(shù)可檢測(cè)病毒的DNA，即HBV的拷貝數(shù)，能準(zhǔn)確地反映病程變化和治療恢復(fù)情況。HBV標(biāo)志物檢測(cè)不能明確說(shuō)明HBV在體內(nèi)的活動(dòng)情況，由于受免疫學(xué)方法靈敏度的限制很難檢測(cè)出低水平狀態(tài)下的HBV復(fù)制情況，而PCR就可以很準(zhǔn)確地檢測(cè)出來(lái)，所以結(jié)合HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)HBV DNA對(duì)臨床早期診斷和治療乙型肝炎意義更大［5］。

人感染HBV后，血清中首先出現(xiàn)HBV DNA陽(yáng)性，約1個(gè)月后出現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）陽(yáng)性，爾后出現(xiàn)抗－HBc陽(yáng)性等。隨著病情的逐漸好轉(zhuǎn)，血清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg先后轉(zhuǎn)為陰性，在HBsAg消失后隔一段時(shí)間，出現(xiàn)乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）。此時(shí)抗－HBc與抗－HBs可同時(shí)陽(yáng)性。由于抗－HBs在血清中持續(xù)存在時(shí)間較抗－HBc短，因此，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，抗－HBs消失，僅單項(xiàng)抗－HBc陽(yáng)性。因此，單項(xiàng)抗－HBc陽(yáng)性，特別是抗－HBc低水平陽(yáng)性，表示既往感染過(guò)HBV，現(xiàn)已康復(fù)。但也有一部分單項(xiàng)抗－HBc陽(yáng)性者，特別是抗－HBc高水平陽(yáng)性者，其體內(nèi)仍有HBV復(fù)制，但因病毒復(fù)制水平低，不易用常規(guī)方法檢出。但用敏感的HBV DNA擴(kuò)增法檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)他們的HBV DNA陽(yáng)性。因此，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，病毒復(fù)制活躍，他們可再次復(fù)發(fā)乙型肝炎。本研究資料提示，單憑HBV血清標(biāo)志物的測(cè)定結(jié)果判定體內(nèi)HBV的復(fù)制及傳染性是不夠的，而采用熒光定量PCR檢測(cè)HBV DNA能更準(zhǔn)確、直接地反映體內(nèi)病毒復(fù)制情況，因此動(dòng)態(tài)觀察血清HBV DNA的變化，對(duì)于病毒感染的轉(zhuǎn)歸、病情及預(yù)后的判斷更具有臨床意義。隨訪時(shí)HBV DNA水平明顯升高，提供病毒仍在復(fù)制，病情可能出現(xiàn)反復(fù)或加重，所以HBV DNA檢測(cè)在評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)抗病毒藥物療效等方面具有十分重要的臨床價(jià)值。HBV DNA定量檢測(cè)能正確反映病毒復(fù)制情況，是乙型肝炎治療有效的直接療效指標(biāo)［6］。

以上分析表明，單純依靠HBV血清標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果只能較好地反映機(jī)體對(duì)HBV感染的免疫應(yīng)答狀況，而熒光定量PCR可以定量檢測(cè)HBV DNA的濃度，且靈敏度高，特異性強(qiáng)，更能清楚地反映乙型肝炎患者的病毒活動(dòng)程度，真實(shí)地反映HBV的感染和復(fù)制情況，目前可認(rèn)為PCR定量檢測(cè)HBV DNA是診斷病毒是否復(fù)制的金標(biāo)準(zhǔn)［7］。作為臨床醫(yī)生只有將兩種方法有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，對(duì)HBV標(biāo)志物中單純抗－HBc陽(yáng)性的患者進(jìn)行綜合分析，才能對(duì)臨床診斷、治療方案設(shè)計(jì)、藥物療效觀察提供可靠的依據(jù)。

［1］劉樹(shù)林，鄒菊賢.PCR檢測(cè) HBV－DNA與 HBV血清標(biāo)志物常見(jiàn)模式和Pre－S2相互關(guān)系研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2001，30（2）：100－101.

［2］Agrawal V，Roy N.Contaminating insert degradation by preincubation colony PCR：a method for avoiding false positives in transformant screening［J］.Anal Biochem，2008，375（1）：159－161.

［3］王曉東，李秀全，李鳳換，等.慢性乙肝血清標(biāo)志物與HBV－DNA水平的關(guān)系［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（12）：1070－1072.

［4］Chemin I，Zoulim F，Merle P，et al.High incidence of hepatitis B infections among chronic hepatitis cases of unknown aetiology［J］.Hepatol，2001，34（3）：447－454.

［5］章家新，吳統(tǒng)健，郭永煉，等.熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA及其臨床價(jià)值［J］.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，18（2）：108－109.

［6］李金明.乙肝肝炎病毒血清標(biāo)志物測(cè)定及結(jié)果解釋的若干問(wèn)題［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（5）：385－389.

［7］駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：257.