陜產(chǎn)中藥鐵筷子質(zhì)量標準研究

王月茹 趙 濤 盧 露 謝 偉 王西芳 陜西國際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院（咸陽 712046）

鐵筷子，別名黑毛七、見春花、九百棒，經(jīng)考諸歷代本草文獻認為中藥鐵筷子主要有兩種：毛茛科植物鐵筷子和臘梅科植物臘梅根，陜西生長的中藥鐵筷子為毛茛科植物鐵筷子的干燥根及根莖，其主要功效有清熱解毒，活血散瘀，消腫止痛。主治：膀胱炎、尿道炎、瘡癤腫毒、跌打損傷、勞傷。為了能有效控制陜產(chǎn)中藥鐵筷子的質(zhì)量，本文中采用定性和定量實驗法對其進行了質(zhì)量標準的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀，Empower色譜工作站，2996二極管陣列檢測器；SB3200DT超聲波清洗機；梅特勒電子天平。

1.2 試藥 葡萄糖對照品、甘露糖對照品、薯蕷皂苷元對照品（中國藥品生物制品檢定所提供），甲醇、乙腈均為色譜純，其他試劑均為分析純。鐵筷子藥材，分別購于陜西太白、周至、漢中等草藥店，部分藥材采自陜西秦嶺山區(qū)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層層析定性鑒別［1～3］

2.1.1 鐵筷子多糖TLC鑒別對照品溶液的制備：精密稱取葡萄糖、甘露糖對照品各5mg，溶入少量50%乙醇中，移入10mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，制成濃度為0.5mg／mL的對照品溶液。

鐵筷子多糖供試品溶液的制備：稱取鐵筷子藥粉2g，于100mL錐形瓶中，加入95%乙醇50mL，連接回流裝置，加熱回流2h，取出，放冷至室溫，濾過，棄去濾液，殘渣和濾紙同時移至錐形瓶中，加入50mL蒸餾水，加熱回流2h，取出，放冷至室溫，濾過，濾液蒸干，殘渣加50%乙醇1mL溶解，即得。

薄層條件：將硅膠GF254濕法制板，110℃活化30min后使用。供試品點樣量為10μl，對照品點樣量為5μl，以乙酸乙酯－乙酸－甲醇－水（13∶3∶5∶2）的混合溶液為展開劑，將硅膠G板放置于層析缸中飽和10min后展開，當(dāng)溶劑前沿線約至12cm左右時，取出，晾干，先用苯胺－鄰苯二甲酸顯色，105℃干燥數(shù)分鐘，使其斑點清晰，顯色穩(wěn)定；再用α－萘酚試液顯色，于105℃加熱至斑點清晰，于紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果：在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的淺黃色和藍紫色斑點。

2.1.2 鐵筷子皂苷元TLC鑒別

薯蕷皂苷元對照品溶液的制備：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，即得。

供試品樣液的制備：稱取鐵筷子藥材粉末約4g于100mL錐形瓶中，加（30～60℃）石油醚50mL，超聲處理30min，濾過，棄去濾液，殘渣和濾紙同時移至錐形瓶中，加入50mL乙醇，加熱回流2h，取出，放冷至室溫，濾過，濾液蒸干，殘渣加3mol／L的鹽酸20mL進行酸水解（溫度為70℃），水解液依次用30mL、20mL、20mL氯仿萃取三次，合并氯仿層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容，搖勻，即得。

薄層條件：將硅膠GF254濕法制板，110℃活化30min后使用。供試品點樣量為15μl，對照品點樣量為10μl，以氯仿－甲醇（10∶1）混合溶液為展開劑，將硅膠G板置于層析缸中飽和10min后展開，當(dāng)溶劑前沿線約至12cm左右時，取出，晾干，用10%硫酸乙醇液顯色，于105℃加熱至斑點清晰，于自然燈光和紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果：在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2 含量測定［4］

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用Waters 2695高效液相色譜儀，2996PDA檢測器，Empower色譜工作站進行3D掃描，以確定最優(yōu)的色譜條件為：色譜柱 Akasil－C18ODS柱（5μm，250mm×4.6mm）；流速：1.0mL／min；柱溫：25℃；檢測波長：203nm；流動相：（乙腈∶水＝85∶15）。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：精密稱取鐵筷子藥材粉末適量，加10倍量75%乙醇，浸泡0.5h后，超聲處理30min，濾過，收集濾液，水浴蒸干，用3mol／L的鹽酸20mL進行酸水解（溫度為70℃），水解液分別用30mL、20mL、20mL氯仿萃取三次，合并氯仿層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容，搖勻，即得。

2.2.4 標準曲線的繪制：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每1mL含薯蕷皂苷元0.05mg的高濃度標品溶液；再將高標液取1mL稀釋5倍，制成每1mL含薯蕷皂苷元0.01mg的低濃度標品溶液，分別取高標液（5，10，20μL）和低標液（5，10，20μL）注入高效液相色譜儀中，在上述的色譜條件下進行分析，以峰面積A為縱坐標，薯蕷皂苷元含量C（μg）為橫坐標繪制標準曲線。計算得回歸方程為：A＝2010115C－38918，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999，結(jié)果表明，薯蕷皂苷元在0.051～1.02μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗：精密稱取鐵筷子藥粉適量，按供試品溶液的方法制備樣品溶液，并依據(jù)上述色譜條件，吸取該樣品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.89%，表明本方法精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗：取本品適量，共6份，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，分別精密取10μl進樣，在上述色譜條件下測得樣品，RSD為3.96%，表明此方法重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗：采取加樣回收法，取一定量已知含量的樣品6份，分別精密加入薯蕷皂苷元對照品適量，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定含量，計算回收率為99.32%，RSD為3.15%。結(jié)果表明，本方法回收率良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗：精密取本品適量，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，間隔4h進樣，記錄峰面積，共測定4次，RSD為2.33%。結(jié)果表明，供試品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.9 樣品的含量測定：將樣1，樣2，樣3，樣4，樣5，樣6，照“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定，其中含鐵筷子皂苷的最高含量為0.0036%，最低為0.0028%，平均含量為0.0032%，考慮到藥材的來源差異，以及實驗誤差、儲藏等因素，故暫定陜產(chǎn)鐵筷子藥材中含甾體皂苷不得少于0.003%。

3 討 論 目前國內(nèi)外對鐵筷子藥材的化學(xué)成分研究較多，但成分含量測定多停留在多糖上，且均采用紫外－可見分光光度法測定，該方法存在準確性差，誤差大等缺陷，較難以控制該藥材的質(zhì)量。曾在實驗中嘗試用高效液相色譜法，采用蒸發(fā)光檢測器進行多糖的含量測定，但實驗過程中發(fā)現(xiàn)此方法穩(wěn)定性差，分離度低等缺陷。然而，鐵筷子甾體皂苷又是另一熱點活性成分，具有較強的生理活性，目前國內(nèi)尚無鐵筷子皂苷類成分的標準對照品，故實驗中選擇了結(jié)構(gòu)與鐵筷子皂苷類成分相似的薯蕷皂苷元為對照品，雖然測量結(jié)果會稍有出入，但由于二者的基本骨架結(jié)構(gòu)相似，故在暫無標準品的情況下，仍不失為一種較佳的選擇。

在酸水解鐵筷子皂苷成苷元的實驗中，發(fā)現(xiàn)隨著水解溫度的升高，樣液的顏色會顯著加深；樣品液在存放的過程中，溶液顏色也會隨時間發(fā)生很大的變化，然而皂苷元的含量并未隨之變化，這一點在今后的實驗中應(yīng)再做進一步研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［2］王冬梅.安宮消瘤膠囊質(zhì)量標準的研究［J］.中藥材，2008；31（12）：1911.

［3］楊 健，苗 芳，趙 偉，等.正交設(shè)計優(yōu)選鐵筷子甾體［J］.中藥材，1991，14（3）：20－21.

［4］曾 里，夏之寧.超聲波和微波對中藥提取的促進和影響［J］.化學(xué)研究與應(yīng)用，2002，14（3）：245－249.