顱咽管瘤組織中 IFN-α、IFN-αR、OPN的表達變化及意義

黃廣龍，吳欣洪，郭邦明，漆松濤

(1南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院，廣州 510515;2廣東省東莞市塘廈人民醫(yī)院)

顱咽管瘤是鞍區(qū)常見腫瘤，腫瘤與周圍重要結(jié)構(gòu)粘連緊密，手術(shù)剝離困難，術(shù)后可遺留嚴重并發(fā)癥，且復發(fā)率較高，是神經(jīng)外科的難題之一。顱咽管瘤的炎癥反應是導致其與周圍組織粘連的重要原因［1，2］。IFN-α 和骨橋蛋白(OPN)都是重要的炎癥相關(guān)細胞因子，與腫瘤的發(fā)病密切相關(guān)。2010年5月～2012年5月，本研究觀察了顱咽管瘤組織中IFN-α、IFN-α 受體(INF-αR)及 OPN 的表達變化，并探討其意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集南方醫(yī)院神經(jīng)外科收治并手術(shù)切除，術(shù)后病理證實為顱咽管瘤的患者58例(顱咽管瘤組)，所有患者術(shù)前均未接受過放化療。其中男42例，女16例。年齡2～61(31±18.9)歲。造釉細胞型顱咽管瘤41例，鱗狀乳頭型17例。初發(fā)43例，復發(fā)15例。其中首次手術(shù)43例，術(shù)后復發(fā)再次手術(shù)者15例。另取12例正常腦組織標本(為同期腦腫瘤造瘺切除組織)作為對照組。

1.2 試劑 一抗為兔抗人IFN-α干擾素多克隆抗體(稀釋1∶200)，兔抗人IFN-αR多克隆抗體(稀釋1∶200)，鼠抗人 OPN 單克隆抗體(稀釋 1∶100)，用PBS替代一抗作為陰性對照。二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG。即用型快帶免疫組化EnvisionTM試劑盒。HE染色試劑盒。

1.3 組織學觀察 實驗前將標本從液氮罐中取出，經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)4 μm厚切片，進行HE染色。切片常規(guī)用二甲苯脫蠟，乙醇脫水，蘇木素染色1～2 min，自來水沖洗10 min，鹽酸乙醇分化30 s，自來水沖洗5 min，水洗返藍，伊紅液染色30 s～1 min。常規(guī)脫水，透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。

1.4 IFN-α、IFN-αR、OPN 的檢測 石蠟包埋標本塊以4 μm 厚切片分別進行 IFN-α、IFN-αR 及 OPN免疫組化染色。①EnvisionTM二步法免疫組化染色:按試劑盒說明書操作。將已知陽性片(采用Santa Cruz公司陽性對照片)設為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。②結(jié)果判定:以細胞核、細胞質(zhì)被染成棕黃色或棕褐色為IFN-α、OPN陽性細胞，以細胞膜被染成棕黃色或棕褐色為IFN-αR陽性細胞。在400倍光鏡下每張切片隨機選取5個視野，計算每個視野區(qū)內(nèi)陽性細胞以及總細胞數(shù)，取平均值。陽性細胞百分比=(陽性細胞數(shù)/總細胞數(shù))×100%。陽性細胞百分比＜5%或被污染者為陰性(－)，5% ～20%為弱陽性(+)，21% ～50%為中度陽性(++)，＞50%為強陽性(+++);+、++、+++判定為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用Mann-WhitneyU檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 組織學觀察結(jié)果 41例造釉細胞型顱咽管瘤標本均可看到角蛋白小結(jié)和囊實性混合的上皮分化為特征，還有纖維化、鈣化、陳舊性出血和膽固醇沉積等退化性改變的特征性表現(xiàn)。17例鱗狀細胞型顱咽管瘤主要為成熟的鱗狀上皮細胞，細胞呈多角形，腫瘤只有實性結(jié)構(gòu)呈乳突狀生長，沒有囊性表現(xiàn)和退化成分。顱咽管瘤組織間質(zhì)中有血管分布，腫瘤組織中可見炎性細胞浸潤，腫瘤周圍腦組織可見膠質(zhì)細胞增生。正常腦組織中未見炎性細胞聚集。

2.2 兩組 IFN-α、IFN-αR的表達比較 顱咽管瘤組IFN-α表達陽性共52例，陽性率89.7%，對照組2例弱陽性表達，陽性率17%，兩組相比，P＜0.05。造釉細胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中IFN-α陽性表達率分別為 92.68%(38/41)、82.35%(14/17)(P＜0.05)。復發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤組織中IFN-α陽性表達率分別為 93.33%(14/15)和88.37%(38/43)，兩者相比，P＜0.05。顱咽管瘤組 IFN-αR 表達陽性共54例，陽性率93.10%，對照組分別為1例和8%，兩組相比，P＜0.05。造釉細胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中IFN-αR陽性表達率分別為100%(41/41)、76.47%(13/17)(P＜0.05)。復發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤中IFN-α陽性表達率分別為100%(15/15)和 90.70%(39/43)，兩者相比，P＜0.05。顱咽管瘤組織中IFN-αR與IFN-α的表達呈正相關(guān)(rs=0.902，P＜0.01)。

2.3 兩組OPN表達情況 顱咽管瘤組OPN表達陽性共51例，陽性率87.93%，對照組未見表達，兩組相比，P＜0.05。造釉細胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中OPN陽性表達率分別為100%(41/41)、58.82%(10/17)(P＜0.05)。復發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤中OPN陽性表達率分別為93.33%(14/15)和86.04%(37/43)，P＜0.05。

2.4 顱咽管瘤組織中IFN-α與OPN表達的相關(guān)性顱咽管瘤組織中IFN-α與OPN的表達呈正相關(guān)(rs=0.814，P＜0.01)。

3 討論

顱咽管瘤是顱內(nèi)最常見的鞍區(qū)腫瘤之一，盡管在病理學上其屬于良性腫瘤，但是由于腫瘤組織與周圍重要結(jié)構(gòu)如視神經(jīng)、視交叉、垂體柄、下丘腦、顱底動脈環(huán)等緊密粘連，使得手術(shù)全切除難度大，術(shù)后復發(fā)率高，術(shù)后并發(fā)癥嚴重，致殘率及病死率高［1，2］。臨床研究證明，顱咽管瘤的炎癥反應是導致其與周圍結(jié)構(gòu)緊密粘連的一個重要原因［3～6］。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，在造釉細胞型顱咽管瘤中，腫瘤組織及腫瘤間質(zhì)中炎癥細胞聚集，炎癥相關(guān)因子明顯增強，患者血清、腦脊液及囊液中炎癥相關(guān)的C反應蛋白明顯升高，都說明了造釉細胞型顱咽管瘤存在嚴重的炎癥反應［7～9］。

各種原因引起的炎癥介質(zhì)的過度和(或)持續(xù)性釋放是急慢性炎性疾病的主要病理機制，IFN-α是重要的炎癥標記物，通過檢測IFN-α可以判斷炎癥的程度。同時，IFN-α具有抗腫瘤作用［10］，其可直接作用于腫瘤細胞，抑制原癌基因表達，誘導抑癌基因表達，抑制腫瘤細胞增殖。有學者［11］發(fā)現(xiàn)IFN-α可通過JAK-STAT信號通路，激活STAT蛋白家族，作用于IFN激活的反應原件(ISRE)，從而引發(fā)一系列IFN刺激基因的轉(zhuǎn)錄，如2'-5'腺苷酸合成酶(OAS)、Fas/FasL、XAF-1、DAP 激酶、TRAIL/Apo2L、Caspase-4、Caspase-8、IRFS、PML 等，從而促進細胞凋亡，抑制細胞增殖。亦有研究認為IFN-α的抗腫瘤效應與 p53、COX-2等相關(guān)［12］。IFN還可調(diào)節(jié)機體免疫，激活包括巨噬細胞、NK細胞、CD+4T細胞、CD+8T細胞、Th1細胞、樹突狀細胞等多種免疫細胞攻擊腫瘤細胞，使機體產(chǎn)生保護性免疫機制抑制腫瘤增殖［12］。IFN-α還有很強的抗血管形成作用，可通過下調(diào)VEGF、堿性成纖維細胞生長因子(BFGF)，抑制腫瘤血管生成，進而抑制腫瘤的生長［13～15］。IFN-α 發(fā)揮作用需要與 IFN-αR 結(jié)合。研究表明，IFN-αR在顱咽管瘤中有廣泛表達，在造釉細胞型表達高于在鱗狀乳頭型，在復發(fā)者中的表達較初發(fā)者更強，這與本研究結(jié)果一致。IFN-α與IFN-αR作為一個功能整體，所組成的信號系統(tǒng)可能參與了顱咽管瘤細胞的生長調(diào)控過程，但其具體作用及機制目前尚不明確［16］。

OPN是炎癥激活的重要因子，OPN通過對炎癥細胞的趨化作用誘導某些細胞因子的表達，從而促進炎癥的發(fā)生與發(fā)展［7，8］。本研究結(jié)果顯示，顱咽管瘤組織中OPN表達高于正常組織，且在造釉細胞型及復發(fā)的顱咽管瘤分別高于鱗狀乳頭型和初發(fā)者，顱咽管瘤組織中OPN與IFN-α的表達呈正相關(guān)，這表明IFN-α及其受體、OPN共同參與了顱咽管瘤的發(fā)生發(fā)展過程。本研究結(jié)果同時證實，顱咽管瘤發(fā)病過程中存在炎癥反應，且造釉細胞型較鱗狀乳頭型、復發(fā)者較初發(fā)者炎癥反應更重。

綜上，IFN-α、IFN-αR 及 OPN 在顱咽管瘤組織中高表達，三者共同參與了顱咽管瘤的發(fā)病，與腫瘤炎癥反應程度有關(guān)。在以后的治療中有望通過對IFN-α的干預，在術(shù)前減輕顱咽管瘤的炎癥反應，從而降低顱咽管瘤的手術(shù)風險，術(shù)后利用IFN-α對腫瘤生長的抑制作用降低腫瘤復發(fā)的幾率。

［1］黃廣龍，漆松濤.顱咽管瘤特點及起源的研究［J］.國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志，2005，(6):562-565.

［2］Sorva R，Heikanen O.Craniopharyngioma in Finland:A stardy of 123 cases［J］.Acta Neurochir，1986，81:85-89.

［3］Qi S，Huang G，Pan J，et al.Involvement of osteopontin as a core protein in craniopharyngioma calcification formation［J］.J Neurooncol，2010，98(1):21-30.

［4］Ohmori K，Collins J，F(xiàn)ukushima T.Craniopharyngiomas in Children［J］.Pediatric Neurosurgery，2007，43(47):265-278.

［5］Vinchon M，Dhellemmes P.Craniopharyngiomas in children:recurrence，reoperation and outcome［J］.Childs Nerv Syst，2008，24(2):211-217.

［6］Wisoff JH.Surgical management of recurrent craniopharyngiomas［J］.Pediatr Neurosurg，1994，21(Suppl 1):108-113.

［7］黃廣龍，漆松濤，李佳，等.核轉(zhuǎn)錄因子κB在顱咽管瘤炎癥中的表達［J］.中國神經(jīng)精神疾病雜志，2010，36(1):39-42.

［8］劉保國，漆松濤，黃廣龍，等.CD45、ICAM-1和MIB-1在顱咽管瘤中的表達及意義［J］.廣東醫(yī)學，2012，33(1):99-101.

［9］孫慧靜.顱咽管瘤組織中IFN-αR的表達及意義［J］.山東醫(yī)藥，2009，49(22):83.

［10］TagIiaferrI P，Caraglia M，Budilon A，et al.New pharmacokinetic and pharmacodynamic tools for interferon alpha(IFN-α)treatmem of human cancer［J］.Cancer Immunol Immunother，2005，54(1):1-10.

［11］Chawla-Sarkar M，Lindner DJ，Liu YF，et al.Apoptosis and interferons:role of interferon-stimulated genes as mediators of apoptosis［J］.Apoptosis，2003，8(3):237-249.

［12］Takaoka A，Hayakawa S，Yanai H，et al.Integration of interferonalpha/beta signalling to p53 responses in tumour suppression and antiviral defence［J］.Nature，2003，424(6948):516-523.

［13］Ferrantini M，Capone I，Belardelli F.Interferon-alpha and cancer:mechanisms of action and new perspectives of clinical use［J］.Biochimie，2007，89(6-7):884-893.

［14］Aricò E，Belardelli F.Interferon-α as Antiviral and Antitumor Vaccine Adjuvants:Mechanisms of Action and Response Signature［J］.Interferon Cytokine Res，2012，32(6):235-247.

［15］Terawaki S，Chikuma S，Shibayama S，et al.IFN-α directly promotes programmed cell death-1 transcription and limits the duration of T cell-mediated immunity［J］.J Immunol，2011，186(5):2772-2779.

［16］Ierardi DF，F(xiàn)ernandes MJ，Silva IR，et al.Apoptosis in alpha interferon(IFN-alpha)intratumoral chemotherapy for cystic craniopharyngiomas［J］.Childs Nerv Syst，2007，23(9):1041-1046.