3種酒糟菌糠三萜類成分含量比較

王 松，殷中瓊，周瑞平，王 濤*

（1.宜賓學(xué)院 生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，四川 宜賓 644000；2.宜賓學(xué)院 發(fā)酵資源與應(yīng)用四川省高校重點實驗室，四川 宜賓 644000；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，四川 雅安 625014；4.四川宜賓市敘府酒業(yè)有限公司技術(shù)中心，四川 宜賓 644000）

酒糟栽培食用菌是合理利用酒糟的有效途徑之一[1]。以酒糟為主要原料栽培食用菌后的培養(yǎng)基即為酒糟菌糠。菌糠中殘留大量的菌絲體，富含蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素及一些生物活性物質(zhì)[2-5]。三萜類化合物是天然物質(zhì)中數(shù)量最多的一類化合物，廣泛存在于自然界，具有抗腫瘤、保肝、鎮(zhèn)痛、抗氧化等生理活性，是被人們所關(guān)注的重要活性物質(zhì)之一。已在許多食用菌的子實體、孢子和菌絲體中提取出三萜類化合物組份且被證實具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用[6-8]。

為了比較研究不同食用菌培養(yǎng)后以及在不同階段的酒糟菌糠的三萜含量的差異，對茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）這三種酒糟菌糠進行了三萜含量的測定，為酒糟菌糠飼料的進一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 酒糟菌糠

酒糟菌糠來源：茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇），由四川宜賓敘府酒業(yè)有限公司食用菌生產(chǎn)基地提供。

將鮮酒糟9.2kg、花生殼0.6kg、玉米粉0.27kg、蔗糖0.1kg、石膏0.1kg、石灰0.3kg混合，以配制培養(yǎng)基。在滅菌后的培養(yǎng)基上分別接種茶樹菇5號、雞腿菇特白。茶樹菇5號培養(yǎng)兩個月后，采摘第一茬菇后的菌糠為茶樹菇菌糠（出菇）；茶樹菇5號培養(yǎng)大約40d，菌絲體長滿后的菌包為茶樹菇菌糠（未出菇）；雞腿菇特白培養(yǎng)大約30d，菌絲體長滿后的菌包為雞腿菇菌糠（未出菇）。

酒糟菌糠的處理：酒糟菌糠在105℃烘箱中烘15min，然后降到60℃，烘干6h，冷卻后粉碎過40目篩。

1.2 儀器與試劑

RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；ESJ200-4電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）；LG-04C四兩裝高速中藥粉碎機（浙江瑞安市百信藥機器廠）；UV-2102PC紫外可見分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司）；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）等。

齊墩果酸對照品（中國生物制品檢定所），高氯酸、冰醋酸、香草醛、乙酸乙酯、甲醇等均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制備

分別稱取茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）粉末20g，分別加入200mL石油醚，用索氏提取12h，得提取液。將提取液放置于通風(fēng)櫥內(nèi)12h，使石油醚揮發(fā)完全。然后將剩余物50℃真空干燥30min，稱取干燥物質(zhì)量，計算得率。

1.3.2 提取物中三萜含量的測定[9]

香草醛-高氯酸比色法測定三萜含量。以齊墩果酸作為標準樣品。

1.3.3 標準曲線的制作

將齊墩果酸用甲醇配成0.2mg/mL的標準溶液，精確吸取該液0、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL和0.8mL分別置于具塞磨口試管中，水浴蒸干，溶劑揮干后，準確加入0.4mL 5%香草醛冰醋酸溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）和1.6mL高氯酸，混勻。然后將8支試管同時放入70℃恒溫水浴鍋中水浴15min，取出后冷卻至室溫。最后向每支試管中各加入8mL乙酸乙酯，用紫外分光光度法檢測。

1.3.4 三萜含量測定方法

分別將茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）石油醚提取物溶解在50mL甲醇中，再將茶樹菇菌糠（未出菇）甲醇溶液做1:10稀釋，茶樹菇菌糠（出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）做1:5稀釋。按標準曲線的測定方法，測出其在560nm下的OD值，根據(jù)標準曲線計算各代謝提取物中三萜含量，并計算三萜的得率。

2 結(jié)果與分析

2.1 酒糟菌糠提取物的得率

茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）的石油醚提取物的得率分別為0.31%、1.43%、0.54%，其中茶樹菇菌糠（未出菇）石油醚提取物的得率最高。

2.2 齊墩果酸標準曲線

以齊墩果酸濃度為橫坐標，吸光度測定值為縱坐標，繪制標準曲線見圖1。標準曲線回歸方程為：y=3.4321x-0.0131，R2=0.999 2。結(jié)果表明，本品在40μg/mL～160μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 齊墩果酸標準曲線Fig.1 Standard curve of oleanolic acid

2.3 酒糟菌糠的三萜含量

茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）三種酒糟菌糠三萜類物質(zhì)含量OD值測定結(jié)果如圖2所示，根據(jù)其不同的濃度稀釋倍數(shù)，對應(yīng)標準曲線，可計算出三種酒糟菌糠甲醇溶液濃度分別為0.25mg/mL、0.85mg/mL、0.51mg/mL。則三種菌糠提取物中的三萜含量分別為20.39%、14.82%、23.50%，進一步計算出三萜得率分別是0.06%、0.21%、0.13%，其中茶樹菇菌糠（未出菇）的得率最高。

圖2 三種酒糟菌糠三萜含量Fig.2 The triterpenoid content to three kinds of distiller's grains-based spent mushroom substrate

3 討論

大量研究表明，食藥用菌類菌絲體和子實體營養(yǎng)成分差異不明顯，都含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和菌體多糖等相關(guān)活性物質(zhì)[10-12]。未出菇的酒糟菌糠中殘存大量的菌絲體，因此2種未出菇酒糟菌糠三萜含量較高。而出菇的酒糟菌糠中菌絲體較少，且出菇后，菌絲體中一部分生物活性物質(zhì)轉(zhuǎn)運到子實體上，導(dǎo)致其三萜含量較低。

同樣在未出菇的條件下，茶樹菇酒糟菌糠三萜含量比雞腿菇酒糟菌糠大的多，推測可能是因為不同種類的食用菌對三萜的合成與貯藏的能力不同，在本實驗的條件下，茶樹菇三萜合成與貯藏能力優(yōu)于雞腿菇；也可能是因為雞腿菇菌絲體中三萜類活性物質(zhì)合成較慢，在本實驗期內(nèi)其含量還未到峰值[13]。

本實驗研究表明，雖然含量不一，但三種酒糟菌糠都含有三萜類物質(zhì)，結(jié)合我們對其他營養(yǎng)成分和喂飼情況的研究情況（結(jié)果另發(fā)），酒糟菌糠飼料是一種優(yōu)良的飼料，其按一定的比例添加到家畜日糧中，具有良好的開發(fā)前景。

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