食品中水楊酸含量測定方法的研究進展

薛 峰，林毅侃，馬躍龍，趙 琴，孫穎宜，巢強國

（1.上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗技術(shù)研究院/國家食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（上海)，上海 200233;2.上海市食品生產(chǎn)監(jiān)督所，上海 200031)

食品中水楊酸含量測定方法的研究進展

薛 峰1，林毅侃1，馬躍龍1，趙 琴1，孫穎宜1，巢強國2，*

（1.上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗技術(shù)研究院/國家食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（上海)，上海 200233;2.上海市食品生產(chǎn)監(jiān)督所，上海 200031)

對目前食品中水楊酸的測定方法的前處理及檢測手段進行了介紹與總結(jié)，重點對HPLC法進行了分析，并對現(xiàn)有的HPLC方法中存在的問題進行了討論以及今后在水楊酸的檢測方法上的研究方向上進行了展望，以便準確、及時地反映產(chǎn)品中水楊酸的添加情況，為政府提供技術(shù)支持。

水楊酸，食品，測定

水楊酸為消毒防腐藥，有溶解皮膚角質(zhì)的作用，用于局部角質(zhì)增生及皮膚霉菌感染，配制醑劑作外用，治療角質(zhì)和皮癬等，其鈉鹽可用于解熱及抗風(fēng)濕、鎮(zhèn)痛等，在醫(yī)藥工業(yè)上作為合成阿斯匹林藥物的原料，還可用作染料、香料、橡膠等方面，其副作用在于它們會嚴重擾亂患者的消化機能。由于水楊酸和乙酰水楊酸的化學(xué)性質(zhì)，也一度被許多國家允許作為食品防腐劑。隨著經(jīng)濟的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)的進步，人們的認識也在不斷地進步和提高。以前人們普遍認為比較安全并且可以合法使用的一些農(nóng)藥、獸藥和食品添加劑，因為安全問題已被禁止使用，如水楊酸。據(jù)報道，含水楊酸成分高的食物對自閉癥兒童有不良的作用，其原因是水楊酸對人體的胃腸道有嚴重的負作用，會導(dǎo)致消化道的可通透性增加。另外，人體吸入水楊酸后會引起咳嗽和胸部不適;長時間或反復(fù)皮膚接觸可能引起皮炎，甚至發(fā)生灼傷;攝入發(fā)生胃腸道刺激，可能引起耳鳴及腎損害。隨著技術(shù)的進步，人們認識的提高，包括我國在內(nèi)的許多國家在食品中禁止使用水楊酸，但是，不排除一些不法分子使用水楊酸作為食品添加劑的可能。另外，水楊酸是植物體內(nèi)普遍存在的內(nèi)源信號分子之一，已被確認為一種植物激素，具有重要的生理功能，水楊酸在植物的抗病、抗低溫、抗旱和抗鹽等方面，以及在果實成熟、園藝產(chǎn)品保鮮和種子萌發(fā)等方面具有明顯的作用，在農(nóng)業(yè)方面應(yīng)用較為廣泛;而這些農(nóng)產(chǎn)品是食品工業(yè)的原料，不可避免的帶入到其加工食品中。水楊酸（鄰羥基苯甲酸)是重要的精細化工原料。在醫(yī)藥工業(yè)中，水楊酸是一種用途極廣泛的消毒、防腐劑[1]，也是皮膚保養(yǎng)品的新寵。在我國，水楊酸并沒有被列入GB 2760-2011《食品添加劑使用標準》中，禁止用于食品加工生產(chǎn)[2]。人們食用了含有水楊酸的食品，能刺激食道、消化道的內(nèi)膜、黏膜并與機體組織中的蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，有腐蝕作用，在體內(nèi)會形成草酸，引起中毒，在國際上水楊酸被列為禁止使用的食品添加劑。一些食品生產(chǎn)和經(jīng)營者利益熏心，在一些食品中添加水楊酸，給消費者的身體健康帶來了危害。鑒于某些生產(chǎn)和經(jīng)營者在食品中非法添加水楊酸和水楊酸在化妝品、藥品中的應(yīng)用情況，迫切需要開發(fā)食品中水楊酸的檢測方法，以便準確、及時地反映產(chǎn)品中水楊酸的添加情況，為政府提供幫助，而目前測定水楊酸的方法有很多，因此，尋找靈敏度高方便可行的測定水楊酸的方法尤為重要，為此現(xiàn)將文獻報道過的主要食品中水楊酸的測定方法進行整理。

1 定性檢測

我國國家標準GB/T 5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》給出了水楊酸的定性檢測方法，樣品按照GB/T 5009.28-2003《食品中糖精鈉的測定》對應(yīng)的前處理方法進行處理后，加入三氯化鐵，因三氯化鐵可與水楊酸存在特征顯色反應(yīng)，若試液呈現(xiàn)紫堇色，說明樣品中存在水楊酸。通過此法進行快速定性。

2 定量檢測

2.1 分光光度法

2.1.1 紫外分光光度法 美國分析化學(xué)家協(xié)會AOAC[3]給出了水楊酸含量測定的分光光度法。經(jīng)乙醚提取水楊酸，在pH3.0的緩沖液中，F(xiàn)e3+與水楊酸生成穩(wěn)定絡(luò)合物，以FeCl3為顯色劑，測定樣品中水楊酸的含量，過程中FeCl3不能過量，以免影響結(jié)果準確性。

劉英杰[4]通過用乙醚萃取飲料中水楊酸，在弱酸性條件下，用乙酸銅與其生成黃綠色絡(luò)合物，在710nm下測定吸光度，對飲料中水楊酸含量進行測定，并且在該環(huán)境下，飲料中可能含有的糖精鈉、苯甲酸等也不會對其造成干擾，回收率可達到97.5%。

2.1.2 熒光分光光度法 由于水楊酸具有熒光特性，有文獻報道用熒光光度法測定水楊酸含量。龔波林[5]利用Br2與2，7-二氯熒光素反應(yīng)，使2，7-二氯熒光素熒光猝滅。加入水楊酸后，反應(yīng)體系熒光增強，檢出限2.0μg/L，具有良好選擇性。

2.1.3 阻抑動力學(xué)光度法 在硫酸和磷酸介質(zhì)中，水楊酸可以抑制碘離子催化亞砷酸還原錳，廖立新等[6]通過這一原理，用鄰聯(lián)甲苯中止反應(yīng)，在440nm下測定水楊酸的含量，檢出限達到了0.003mg/L，此方法簡便、靈敏，測定水楊酸的含量，獲得了滿意結(jié)果。

2.2 高效液相色譜法（HPLC)

目前，報道文獻中采用HPLC是測定水楊酸中最多的方法。相對于其他方法，該方法具有靈敏度高、分離效果好、檢出限低等優(yōu)點。而在實際測定時，根據(jù)不同的樣品，采用不同的方法前處理。

2.2.1 試樣的制備 樣品的制備對于水楊酸的測定是非常重要的，一般采用甲醇、乙腈等有機試劑提取方法。在提取樣品中水楊酸時，在溶劑中加入適量的酸不僅可以提高提取效率，還可以降低水楊酸的質(zhì)子化。因為水楊酸的鄰位的羥基對羧基的影響，互相容易形成分子內(nèi)氫鍵，使得氫原子解離成質(zhì)子。通常加入乙酸、甲酸及磷酸等進行調(diào)節(jié)。而通過初步的提取后，直接過濾即可進樣，當然也可以采用固液提取小柱進行進一步的純化。使得水楊酸更加富集，以減少樣品基質(zhì)的干擾。

2.2.2 標準品溶液的制備 采用的標準對照品一般用相應(yīng)的流動相進行溶解，定容，備用。

2.2.3 色譜條件 根據(jù)水楊酸的化學(xué)性質(zhì)，紫外和熒光均有吸收，因此可以采用DAD、FLD、UV等檢測器對水楊酸進行檢測?？紤]到水楊酸在不同流動相體系中的紫外吸收和熒光吸收均有所不同，所以要根據(jù)流動相來選擇檢測的波長。

2.2.3.1 色譜柱 水楊酸的測定一般均選用固定相填料的反相C18色譜柱。

2.2.3.2 流動相的選擇 流動相的選擇關(guān)系到水楊酸的色譜行為，如峰形、分離等。陽文瓊等[7]采用乙酸銨（0.02mol/L)∶甲醇∶冰乙酸（91∶9∶0.15)系統(tǒng)作為流動相，流速為1.0mL/min;進樣量為10μL;檢測波長為230nm，紫外檢測器對食品中水楊酸含量進行測定。Dini P.Venema等[8]采用乙腈∶水∶乙酸（25∶75∶5)作為流動相，流速為0.9mL/min，在303nm紫外波長下檢測食品中水楊酸。國際葡萄與葡萄酒組織OIV則采用pH2.0水溶液作為流動相，并用甲醇和四氫呋喃的混合液作為洗脫液，在235nm紫外波長下檢測在葡萄酒中水楊酸[9]。張玉等[10]采用甲醇∶乙酸=50∶50，在pH3.2的條件下，采用熒光檢測器，激發(fā)波長310nm，發(fā)射波長415nm，流速1.0mL/min，測定獼猴桃果肉中內(nèi)源水楊酸的含量。鄧文紅等[11]則采用25∶75的乙腈與5%醋酸水溶液作為流動相，在302nm下用紫外檢測器測定植物組織中水楊酸。徐幼平等[12]則用乙腈∶甲醇∶乙酸=30∶1∶60、pH2.5的流動相，采用熒光檢測器，在313nm激發(fā)波長，360nm發(fā)射波長下，測定番茄組織中水楊酸。

2.3 液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS)

較之液相色譜，液質(zhì)聯(lián)用具有靈敏度更高的特點。周紅霞等[13]采用甲醇和甲酸作為流動相，用LCMS測定蜂蜜中的水楊酸，定量限達到了20μg/kg，具有更高的靈敏度。Jiri G等[14]用UPLC-MS/MS檢測飲料中的水楊酸，單個樣品僅僅需要12min，提高了分析效率。Siska C等[15]利用LC-MS對動物組織中水楊酸進行定量測定。

2.4 離子色譜法

通過對水楊酸的化學(xué)性質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)，水楊酸在堿性條件下，溶液電離成為酸根離子，可以以此進行定量測定。董影杰等[16]建立了以離子液體作反相高效液相色譜流動相添加劑測定水楊酸的方法，在優(yōu)化條件下，水楊酸的保留時間約為4.4min，檢出限為0.059mg/L，大大縮短了檢測時間。劉巧茹等[17]利用高效離子色譜對水楊酸進行了測定，流動相由0.22mol/L NaOH-H2O-50%異丙醇組成，0.025mol/L H2SO4溶液作為抑制劑。

2.5 氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS)

氣質(zhì)聯(lián)用具有高效快速的分離能力和質(zhì)譜定性的優(yōu)勢。Michael J.Scotter等[18]采用內(nèi)標法，用乙腈∶水∶冰醋酸，25∶75∶5（V∶V∶V)作為提取溶劑，質(zhì)譜掃描范圍為50～450amu，水楊酸檢出限達到0.008mg/kg，目前在食品和飲料的范圍內(nèi)得到廣泛的推廣。

3 結(jié)論與展望

美國分析化學(xué)家協(xié)會AOAC用紫外分光光度法測定水楊酸含量，方法簡便，易操作。但由于食品成分廣泛，該方法仍需要考慮到樣品本身的復(fù)雜性，避免一些有色物質(zhì)或者干擾物質(zhì)對數(shù)據(jù)結(jié)果準確性的影響。

HPLC及LC-MS法是目前應(yīng)用最為廣泛的檢測方法，靈敏度高于其他方法，特別是HPLC-FLD法。而在具體實踐應(yīng)用時候，應(yīng)該考慮到：a.樣品基質(zhì)的復(fù)雜性，由于水楊酸存在于食品、化妝品及藥品中，針對不同的樣品建立不同的前處理方法來消除基質(zhì)的干擾。b.檢出限作為一種方法的可行性重要考核指標，需要通過不斷的優(yōu)化條件及改進方法，來降低HPLC及LC-MS的檢出限。

綜上所述，雖然目前水楊酸的測定方法很多，而且也各不相同，但是相對都具有一定的缺陷性，考慮到水楊酸對人體的危害性，非常有必要建立一種應(yīng)用范圍廣、重現(xiàn)性好、檢出限低的水楊酸檢測技術(shù)標準，為政府監(jiān)督檢測提供可靠的技術(shù)保障，有利于加強對市場的監(jiān)管力度，為商家把好質(zhì)量關(guān)，保障消費者身體健康，維護消費者的合法利益。

[1]朱慧，王玫程，伶俐，等．水楊酸的光電離和光激發(fā)機理[J]．物理化學(xué)學(xué)報，2010（1).

[2]閻田，沈全光，劉存德．水楊酸對果實成熟的影響[J]．植物學(xué)通報，1998，15（3)：61-64.

[3]AOAC官方方法[S].第17版.975，30.

[4]劉英杰．飲料中水楊酸的快速定量分析[J]．中國飲食衛(wèi)生與健康，2004，4（2)：61-62.

[5]龔波林．以溴化鉀-溴酸鉀-2’，7’-二氯熒光素為試劑對痕量水楊酸的間接熒光測定[J]．分析化學(xué)，2001，29（9)：1055-1057.

[6]廖立新，周昕．阻抑動力學(xué)光度法測定水楊酸[J]．中國衛(wèi)生監(jiān)測雜志，2001，11（5)：528-529.

[7]陽文瓊，申鴻麗，鄧華．食品中水楊酸的測定[J]．中國食品添加劑，2009（4)：177-179.

[8]Dini P Venema，Peter C H Hollman，Karin P L T M Janssen，et al．Determination of acetylsalicylic acid and salicylic acid in foods，using HPLC with fluorescence detection[J]．Journal of Agricultural and Food Chemistry，1996，44：1762-1767.

[9]OENO06：2006高效液相色譜法測定葡萄酒中山梨酸、苯甲酸和水楊酸的含量[S].

[10]張玉，陳昆松，張上?。J猴桃果實中內(nèi)源水楊酸的提取、測定及其在采后研究中的應(yīng)用[J]．中國食品學(xué)報，2004（3)：6-9.

[11]鄧文紅，張風(fēng)娟，金幼菊．反相高效液相色譜法測定植物組織中的水楊酸[J]．北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007，29（1)：151-153.

[12]徐幼平，蔡新忠．反相高效液相色譜測定番茄組織中的水楊酸[J]．植物生理學(xué)通訊，1997（1)：49-52.

[13]周紅霞，張鳳，許蔚，等．高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中馬來酸和水楊酸[J].南京曉莊學(xué)院學(xué)報，2010，26（3)：57-60.

[14]Jirl G，Ondrej N，Miroslav S．Rapid analysis of phenolic acids in beverages by UPLC—MS/MS[J].Food Chemistry，2008，111：789-794.

[15]Siska C，Maes A，Kris B，et al．Quantitative detemrination of salicylic acid and metbaolites in animal tissues by liquid chromatography—tnadem mass spectrometry[J].Analytica Chimica Acta，2005，527：179-187.

[16]董影杰，于泓，黃旭，等．離子液體作高效液相色譜流動相添加劑測定水楊酸[J]．分析測試學(xué)報，2011（3)：302-306

[17]劉巧茹，石起增，董文舉．高效離子色譜法測定水楊酸[J]．2006，22（3)：357-358.

[18]Michael J Scotter，Dominic P T Roberts，Lesley A Wilson，et al.Free salicylic acid and acetyl salicylic acid content of foods using gas chromatography-mass spectrometry[J].Food Chemistry，2008，105：273-279.

Research progress in method of determination of salicylic acid in food

XUE Feng1，LIN Yi-kan1，MA Yue-long1，ZHAO Qin1，SUN Ying-yi1，CHAO Qiang-guo2，*
（1.Shanghai Institute of Quality Inspection and Technical Research/National Food Quality Supervison and Inspection Center（Shanghai)，Shanghai 200233;2.Shanghai Food Production Supervision Institute，Shanghai 200231)

Food in the current method of determination of salicylic acid pre-treatment and detection methods were described and summarized，the existing problems of HPLC method were discussed and the future in salicylic acid detection method on research direction was prospected，so as to reflect the product of salicylic acid adding conditions accurately and timely，also provide technical support to the government.

salicylic acid;food;determination

TS201.2

A

1002-0306（2012)14-0429-03

2011－11－10 *通訊聯(lián)系人

薛峰（1984-)，男，工程師，主要從事食品安全的檢測與研究。

上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局公益性科研項目（2010-Z09)。