中藥逆轉(zhuǎn)乳腺癌MCF-7/ADM多藥耐藥性的實驗研究

楊 靜

(南京中醫(yī)藥大學，江蘇 南京 210029)

腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是腫瘤細胞對結(jié)構(gòu)、細胞靶點和作用機制不同的抗癌藥物同時產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象，是導致化療失敗的主要原因。其主要機制是多藥耐藥基因編碼的P-gp高表達與腫瘤細胞內(nèi)的藥物結(jié)合并將其排出細胞外，降低細胞內(nèi)藥物濃度,減弱藥物對腫瘤細胞的殺傷抑制作用[1]?，F(xiàn)對近年來中藥逆轉(zhuǎn)乳腺癌MCF-7/ADM多藥耐藥性的實驗方面研究，總結(jié)如下。

1 中藥單體

1.1 β-攬香烯(β-elemene，β-ELE) β-攬香烯是從中草藥溫莪術(shù)的揮發(fā)油中提取的國家二類廣譜抗腫瘤藥物。胡軍等[2]研究發(fā)現(xiàn)無毒劑量的β-欖香烯乳劑(6 μg/mL)能顯著降低化療藥物阿霉素(ADM)對乳腺癌耐藥細胞株MCF-7/ADM細胞的IC50，明顯增加耐藥細胞內(nèi)藥物濃度。非細胞毒性劑量(6 μg/mL)及低毒劑量(13 μg/mL)的β-ELE對MCF-7/ADM細胞的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.4倍及2.2倍。β-攬香烯作用后，MCF-7/ADM的細胞內(nèi)ADM濃度明顯增加(P<0.01),Bcl-2由90.2%降至70.0%(P<0.05)。結(jié)果提示β-ELE可部分逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADM細胞的耐藥性，逆轉(zhuǎn)機制與增加細胞內(nèi)藥物積累及降低Bcl-2的表達有關[3]。

1.2 砷劑 砷劑主要是指雄黃[主要成分為硫化砷(AsS)]和砒霜[有效成分為三氧化二砷(As2O3)]。砷化合物能與組織蛋白質(zhì)中的巰基(-SH)結(jié)合使多種酶失活。谷胱苷肽S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)酶的催化活性部位有巰基參與砷劑還可與次巰基結(jié)合，部分逆轉(zhuǎn)耐藥。三氧化二砷在非毒性劑量可增加MCF-7/ADM細胞內(nèi)ADM的含量，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為2.1倍；非毒性、低毒性劑量作用前后GST-酶活性有顯著改變、GST-mnRNA的表達水平也呈不同程度的下調(diào)，結(jié)果提示三氧化二砷可部分逆轉(zhuǎn)人乳腺癌MCF-7/ADM細胞對ADM的耐藥性，其逆轉(zhuǎn)機制可能與細胞內(nèi)GST-酶活性的改變有關[4]。15、25 μg/mL的雄黃對MCF-7/ADM的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.0倍和2.8倍，并能明顯抑制mdr-1基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果提示雄黃可以逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADM細胞的多藥耐藥性，并呈劑量依賴性，逆轉(zhuǎn)機制可能為下調(diào)了mdr-1基因的表達[5]。

1.3 雄黃聯(lián)合β-欖香烯 胡軍等[6]研究發(fā)現(xiàn)雄黃與β-欖香烯聯(lián)合用藥對MCF-7/ADM的耐藥性有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約4.2倍,明顯好于二者單獨應用(P<0.01)；MCF-7/ADM細胞內(nèi)阿霉素濃度明顯增加(P<0.01)；P-gp及Bcl-2表達均明顯降低(P<0.01)。結(jié)果提示雄黃與β-欖香烯聯(lián)合用藥可顯著增強對MCF-7/ADM細胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，逆轉(zhuǎn)機制與增加細胞內(nèi)藥物積累，降低P-gp、Bcl-2的表達有關。

1.4 川芎嗪 研究[7]報道中藥鈣通道阻滯劑川芎嗪(TMP)能下調(diào)腫瘤細胞P-gp的表達，提高細胞內(nèi)化療藥物濃度，逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥。解霞等[8]研究發(fā)現(xiàn)非細胞毒性劑量(320 mg/L)及低毒劑量(1250 mg/L)川芎嗪均能顯著降低MCF-7/ADM 的IC50(P<0.01)，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.13倍和2.82倍，均能顯著增加耐藥細胞內(nèi)ADM的濃度(P<0.01)。320 mg/L川芎嗪能顯著增加耐藥細胞的凋亡百分率(P<0.01)。結(jié)果提示川芎嗪具有部分逆轉(zhuǎn)人乳腺癌 MCF-7/ADM 細胞對阿霉素的耐藥性，其逆轉(zhuǎn)機制與增加細胞內(nèi) ADM 濃度有關。李海霞等[9]將TMP與ADM聯(lián)合作用于MCF-7/Adr，與單用ADM相比，ADM對細胞的殺傷效應及細胞內(nèi)ADM熒光強度明顯升高(P<0.05)，且呈劑量依賴性；與對照組比較，TMP能抑制ADM對細胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上調(diào)作用。結(jié)果提示TMP能有效逆轉(zhuǎn)MCF-7/Adr耐藥，可能的機制為抑制了ADM對細胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上調(diào)。

1.5 補骨脂 劉敘儀等[10]研究發(fā)現(xiàn)補骨脂提取物R3能明顯增加MCF-7/ADM對ADM的敏感性，且與異博定有協(xié)同作用，在非細胞毒性劑量下能使 MCF-7/ADM對阿霉素的濃度升高，逆轉(zhuǎn)乳腺癌MCF-7/ADM的多藥耐藥性。補骨脂素(psoralen)為呋喃香豆素類化合物，對多種小鼠肉瘤、艾氏腹水瘤、肝癌等有生長抑制和體外細胞毒作用[11]。蔡宇等[12]觀察了補骨脂素對MCF-7多藥耐藥細胞株Bc1-2基因蛋白表達影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bc1-2在正常MCF-7細胞中表達為陰性，而在MCF-7/ADR細胞表達陽性，提示Bc1-2過度表達可導致多藥耐藥(MDR)的產(chǎn)生，同時發(fā)現(xiàn)補骨脂素能降低MCF-7/ADR細胞中凋亡抑制基因Bc1-2的表達，達到提高化療敏感性作用，可推測Bc1-2可能是補骨脂素逆轉(zhuǎn)MDR的靶點之一 。

1.6 人參皂苷Rh2張暉等[13]研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh2可以顯著降低MCF-7/ADM的ADM IC50，Rh2和維拉帕米可以增加MCF-7/ADM細胞內(nèi)羅丹明123熒光表達率，Rh2比維拉帕米抑制羅丹明123外排作用更強，Rh2對MCF-7/ADM細胞mdrl mRNA表達及P-gp表達沒有影響。結(jié)果提示人參皂苷Rh2可有效逆轉(zhuǎn)P-gp介導乳腺癌MCF-7/ADM的多藥耐藥性。

1.7 三七總皂苷(PNS) 劉麗麗等[14]研究發(fā)現(xiàn)PNS可增強阿霉素對MCF-7/ADM的細胞毒作用，PNS 50、100、200 μg/mL分別作用于乳腺癌耐藥細胞48 h后，耐藥細胞株的IC50分別降至17.85，13.80，11.63 μg/mL。PNS(50、100、200 μg/mL)均可下調(diào)多藥耐藥基因mdr-1及其表達的糖蛋白P-gp的量，且隨PNS濃度的增加，下調(diào)作用更加明顯。結(jié)果提示三七總皂苷能夠部分逆轉(zhuǎn)耐藥細胞MCF-7/ADM的多藥耐藥性，呈劑量依賴性，可能的逆轉(zhuǎn)機制為下調(diào)了MCF-7/ADM的mdr-1和P-gp。

1.8 白藜蘆醇 馮磊等[15]將白藜蘆醇作用MCF-7/ADM 72 h之后，發(fā)現(xiàn)細胞增殖明顯下降并呈劑量依賴關系，使MCF-7/ADM細胞阻滯于G0/G1期。結(jié)果提示白藜蘆醇可能是一種細胞周期蛋白依賴性激酶(Cdk2)的抑制劑，同時通過作用于細胞的骨架結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)來干擾細胞的有絲分裂過程，使細胞周期延長從而抑制MCF-7/ADM的增殖。

1.9 防己水煮液 現(xiàn)代藥理研究[16]發(fā)現(xiàn)防己提取物中是一類高效、低毒的MDR逆轉(zhuǎn)劑。李冬梅等[17]觀察了防己水煮液對MCF-7/ADM多藥耐藥細胞的逆轉(zhuǎn)作用，并對其有效成分作初步分析，結(jié)果提示0.25 g/mL阿霉素為防己水煮液逆轉(zhuǎn) MCF-7/ADM多藥耐藥細胞的敏感濃度點；對 MCF-7/ADM多藥耐藥細胞起逆轉(zhuǎn)作用的有效成分大部分集中在經(jīng)正丁醇萃取所得相和水相中，而極性低的有機溶劑相中基本不含可以逆轉(zhuǎn) MCF-7/ADM多藥耐藥細胞的有效組分。

2 中藥復方

2.1 溫下方 溫下方為山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑，歐陽兵等[18]研究發(fā)現(xiàn)溫下方含藥血清可提高MCF-7/ADM對化療藥的敏感性，增加胞內(nèi)化療藥物濃度，使P-gp表達下降，P53表達增高，胞內(nèi)鈣濃度及線粒體膜電位均降低，結(jié)果提示溫下方可部分逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADM耐藥，其逆轉(zhuǎn)機制可能與誘導耐藥細胞凋亡密切相關。

2.2 槐耳顆粒 槐耳是一種藥用真菌，槐耳顆粒是從槐耳菌質(zhì)中提取并作為國家中藥一類新藥，可促進腫瘤細胞凋亡和增強免疫力，也能逆轉(zhuǎn)肺癌耐藥細胞株的耐藥性[19]。李戎等[20]研究發(fā)現(xiàn)非細胞毒性劑量(0.01 mg/mL)的槐耳顆粒能顯著降低ADM對MCF-7/ADM的IC50，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為 5.1倍；0.01 mg/mL的槐耳顆粒使MCF-7/ADM細胞的耐藥基因mdr-1、mdr-1的mRNA以及相應的P-gp、MRP蛋白的表達水平均明顯下調(diào)。結(jié)果提示非細胞毒性劑量槐耳顆粒可逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADM的耐藥性，逆轉(zhuǎn)機制和其耐藥基因mdr-1、mdr-1的mRNA以及相應的P-gp、MRP蛋白的表達水平下調(diào)相關。

2.3 復康靈膠囊 陳前軍等[21]觀察了復康靈膠囊對新輔助化療乳腺癌近期療效以及對耐藥基因p170、GST-π的調(diào)控，結(jié)果:治療組腫瘤完全緩解率及部分緩解率，與對照組比較，具有統(tǒng)計學意義。治療組p170陽性率，與對照組比較，具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果提示扶正解毒中藥可以增強化療效果，而調(diào)控耐藥基因的表達是其作用機制之一。

3 展望

乳腺癌耐藥是乳腺癌治療的一大難題，目前研究主要集中在對耐藥基因和耐藥蛋白的調(diào)控研究等方面。隨著中醫(yī)藥對乳腺癌化療的減毒增效及逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性研究的深入，開發(fā)逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的高效、低毒中藥在中醫(yī)腫瘤研究方面有重要意義。目前中藥逆轉(zhuǎn)MDR尚處于實驗階段，仍需進行大樣本、多中心的隨機臨床試驗進一步證實中藥在逆轉(zhuǎn)MDR方面的作用。

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