RP-HPLC法測(cè)定人血清中舒芬太尼的濃度

謝瑞祥，范芳，張蓮蓮，楊明華（.福建省腫瘤醫(yī)院藥理研究室，福州35004；.福建省腫瘤醫(yī)院麻醉科，福州 35004）

舒芬太尼（Sufentanil）是一種高選擇性阿片類受體激動(dòng)藥，鎮(zhèn)痛效能強(qiáng)、作用時(shí)間長(zhǎng)，近年來(lái)廣泛應(yīng)用于臨床麻醉[1]。筆者建立了一種反相高效液相色譜法測(cè)定人血清中舒芬太尼濃度的方法，具有簡(jiǎn)單、快速、專一性強(qiáng)、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GOLD系統(tǒng)高效液相色譜儀，包括125型泵和168型DAD紫外檢測(cè)器（美國(guó)Beckman公司）。

1.2 試藥

舒芬太尼對(duì)照品（湖北宜昌人福醫(yī)藥公司，批號(hào):D81201）；內(nèi)標(biāo):艾司唑侖對(duì)照品（江蘇濟(jì)州制藥有限公司，批號(hào):101112）；乙腈為色譜純，試驗(yàn)用水為雙重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Symmetry C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）及預(yù)柱；流動(dòng)相:乙腈-0.02 mol·L－1醋酸銨-鹽酸（pH4.3）（45∶55）；流速:1 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm；柱溫:室溫。在此色譜條件下，舒芬太尼、艾司唑侖峰位置無(wú)干擾且分離良好，峰形尖銳對(duì)稱。高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 試驗(yàn)溶液的配制

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.2.1 舒芬太尼標(biāo)準(zhǔn)貯備液:準(zhǔn)確稱取舒芬太尼對(duì)照品10.00 mg，用雙重蒸餾水溶解后定容至100 mL，即得100 μg·mL－1舒芬太尼標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液:準(zhǔn)確稱取艾司唑侖對(duì)照品10.00 mg，用10%甲醇溶解后定容至1 000 mL，即得10 μg·mL－1艾司唑侖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 樣品預(yù)處理

精密吸取500 μL血清樣本，依次加入10 μg·mL－1艾司唑侖標(biāo)準(zhǔn)溶液40 μL、0.1 mol·L－1的NaOH 0.2 mL、乙酸乙酯-石油醚（4∶1）2 mL，渦旋混合2 min，4 000 r·min－1離心2 min，取上層有機(jī)相于60℃水浴用氮?dú)獯蹈?，流?dòng)相100 μL溶解，取40 μ L進(jìn)樣，記錄色譜圖。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取100 μg·mL－1舒芬太尼標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.4 mL，用血清定容至10 mL，即得到4.000 μg·mL－1的舒芬太尼標(biāo)準(zhǔn)血清，依倍率稀釋法依次配制成 2.000、1.000、0.500、0.250、0.100、0.050、0.025 μg·mL－1的系列舒芬太尼標(biāo)準(zhǔn)血清，按“2.3”項(xiàng)下方法作樣品預(yù)處理并接“2.1”項(xiàng)色譜條件操作，測(cè)得舒芬太尼峰面積與內(nèi)標(biāo)艾司唑侖峰面積的比值（Y）與舒芬太尼濃度值（X）的回歸方程為:Y＝0.285 9X－0.000 2（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，舒芬太尼血藥濃度在0.025～4.000 μg·mL－1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果

按“2.3”、“2.4”項(xiàng)下方法，在同日內(nèi)測(cè)定5次和連續(xù)5 d每天測(cè)定1次濃度為0.100、0.500、2.000 μg·mL－1的血清樣品并計(jì)算含量，得出日內(nèi)、日間精密度和平均回收率，詳見(jiàn)表1。

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（±s， n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（s±s， n＝5）

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（±s， n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（s±s， n＝5）

已知濃度/μg·mL-1 2.000 0.500 0.100日內(nèi)精密度測(cè)定值/μg·mL-1 2.060±0.082 0.510±0.018 0.113±0.006 RSD/%3.98 3.49 4.51平均回收率/%103.01 101.92 112.80日間精密度測(cè)定值/μg·mL-1 2.037±0.122 0.499±0.029 0.107±0.005 RSD/%5.99 5.87 4.67平均回收率/%101.82 99.82 107.04

3 討論

按照文獻(xiàn)[2，3]，本試驗(yàn)曾采用過(guò)正己烷、正己烷-異丙醇作為提取劑，最終的提取物經(jīng)流動(dòng)相溶解后十分渾濁，后續(xù)操作極為不便。本文所采用的乙酸乙酯-石油醚（4∶1）作為提取劑，具有提取快、提取回收率高、不易乳化、易吹干、雜質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn)，大大簡(jiǎn)便了操作。

試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在提取過(guò)程中，樣品的堿化程度對(duì)提取效果影響較大。樣本堿度太低影響提取率，堿度太高則樣品的提取物經(jīng)流動(dòng)相溶解后較渾濁，色譜圖雜峰多。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，樣品中加入0.1 mol·L－1的NaOH 0.2 mL時(shí)，樣品提取率高、雜質(zhì)峰少，滿足測(cè)定要求。

本文所確立的提取條件和色譜條件，簡(jiǎn)單易行，可用于舒芬太尼的血藥濃度測(cè)定。

[1]舒芬太尼多中心研討小組.舒芬太尼多中心研討會(huì)紀(jì)要[J].臨床麻醉學(xué)雜志，2004，20（1）:668.

[2]戚思華，賀振秋，孫 波，等.HPLC法測(cè)定人血漿中的舒芬太尼濃度[J].藥物分析雜志，2008，28（4）:599.

[3]文欣榮，顧健騰，陶國(guó)才，等.肝移植無(wú)肝期舒芬太尼的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)[J].臨床麻醉學(xué)雜志，2006，22（10）:736.