乙肝血清標(biāo)志物少見模式與乙肝病毒載量分析

王春暉 錢福初

(1.湖州市八里店鎮(zhèn)衛(wèi)生服務(wù)中心,浙江 湖州 313000;2.湖州市中心醫(yī)院,浙江 湖州 313000)

乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物是診斷乙肝病毒感染的常規(guī)免疫學(xué)檢測(cè)方法,但在日常檢驗(yàn)工作中往往會(huì)遇到一些異常的血清學(xué)模式,如HBsAg和HBsAb同時(shí)陽性,HBsAg陰性但 HBeAg陽性,僅 HBeAb強(qiáng)陽性,僅HBcAb強(qiáng)陽性等。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用熒光定量PCR方法對(duì)這些患者血清HBV進(jìn)行檢測(cè),了解乙肝血清標(biāo)志物少見模式患者乙肝病毒載量狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2009年10月～2011年5月在湖州市吳興區(qū)八里店鎮(zhèn)衛(wèi)生服務(wù)中心就診患者及湖州市中心醫(yī)院就診患者檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物樣本中收集的少見模式血清標(biāo)本270例(其中吳興區(qū)八里店鎮(zhèn)衛(wèi)生服務(wù)中心35例,湖州市中心醫(yī)院235例)診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合2005年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)和感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》[1],包括 HBsAg和 HBsAb同時(shí)陽性97例,男60例,女 37例,年齡 9～78歲,平均(42.6±15.8)歲;HBsAg陰性但 HBeAg陽性 8例,男 7例,女 1例,年齡22～68歲,平均(48.2±15.5)歲;僅 HBeAb強(qiáng)陽性60例,男 36例,女 24例,年齡 18～76歲,平均(53.2±14.5)歲;僅 HBcAb強(qiáng)陽性105例,男 60例,女45例,年齡19～81歲,平均(59.2±13.4)歲。血清標(biāo)本儲(chǔ)存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑和儀器 ELISA檢測(cè)試劑盒購自上?？迫A生物科技有限公司;HBV熒光定量PCR試劑盒購自深圳匹基生物工程股份有限公司;熒光定量PCR分析儀為Roche公司Light Cycler實(shí)時(shí)定量PCR儀。

1.3 血清乙肝標(biāo)志物檢測(cè) 采用ELISA方法檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物,按照試劑操作說明書進(jìn)行。檢測(cè)HBsAg、HBsAb、HBeAg時(shí)當(dāng)樣本OD值 S/CO ≥1.0,判斷為陽性;檢測(cè)HBeAg、HBcAb時(shí)當(dāng)樣本OD值S/CO≤1.0,判斷為陽性。

1.4 HBV-DNA定量檢測(cè) 采用HBV-DNA熒光定量PCR試劑盒檢測(cè)血清標(biāo)本HBV載量,反應(yīng)在Light Cycler實(shí)時(shí)定量PCR儀上完成,嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。該試劑檢測(cè)靈敏度為1×103copies/mL。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SSPS 11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用 t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 不同血清學(xué)模式HBV陽性檢出情況 幾種血清模式的 HBV檢出率見表1。HBsAg和 HBsAb同時(shí)陽性患者中 HBV-DNA陽性率較高,達(dá)50.5%。HBsAg陰性血清學(xué)模式的173例樣本中(包括 HBsAg陰性、HBeAg陽性8例,僅 HBeAb陽性60例,僅HBcAb陽性標(biāo)本105例)檢測(cè)到13(8+2+3)例 HBV-DNA陽性患者,占7.5%(13/173)。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表1 不同血清標(biāo)志物模式患者HBV-DNA檢出率

2.2 少見血清學(xué)模式HBV-DNA載量 HBsAg和HBsAb同時(shí)陽性患者中 HBV-DNA載 ≥1×105copies/mL的占51.0%(25/49),HBsAg陰性少見血清學(xué)模式的13例樣本(包括 HBsAg陰性、HBeAg陽性8例,僅HBeAb陽性2例和僅HBcAb陽性標(biāo)本3例)HBV-DNA含量≥1×105copies/mL很少,僅占7.7%(1/13),見表2。兩者率的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HBsAg陽性組和 HBsAg陰性組HBV-DNA載量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)見表3。

表2 不同少見模式患者HBV-DNA水平比較

表3 HBsAg陽性組和HBsAg陰性組HBV-DNA載量比較

表3 HBsAg陽性組和HBsAg陰性組HBV-DNA載量比較

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3 討 論

在實(shí)際的檢驗(yàn)診斷工作中乙肝免疫學(xué)標(biāo)志物并非“大三陽”“小三陽”如此簡(jiǎn)單,而往往會(huì)出現(xiàn)一些少見的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)對(duì)出現(xiàn)HBsAg和HBsAb同時(shí)陽性,HBsAg陰性但 HBeAg陽性,僅 HBeAb強(qiáng)陽性,僅HBcAb強(qiáng)陽性這幾種情況的HBV-DNA狀況進(jìn)行了分析。

一般認(rèn)為HBsAb是一種保護(hù)性抗體,可以中和HBsAg,清除乙肝病毒,往往在病程恢復(fù)期開始出現(xiàn)。但國內(nèi)外均有報(bào)道在檢測(cè)中出現(xiàn)抗原抗體同時(shí)存在的現(xiàn)象[2-4],并且在共陽性的患者中,確實(shí)有部分患者血清中存在HBV-DNA。本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在HBsAg和HBsAb同時(shí)陽性患者中,HBVDNA水平＞1×103copies/mL占到50.5%,病毒載量較高者＞1×105copies/mL的占25.8%,可見 HBsAb的出現(xiàn)并不能有效清除HBV感染,并不意味著病情的好轉(zhuǎn),需要臨床重視加強(qiáng)這部分患者的隨訪。對(duì)于這一現(xiàn)象許多研究認(rèn)為是S基因變異導(dǎo)致HBsAb與變異HBsAg結(jié)合力下降而形成[5-6];也可能是不同亞型HBV重疊感染使產(chǎn)生抗體的亞型與存在抗原的亞型不一致而引起[7],還有待進(jìn)一步研究探討。

HBsAg是診斷乙肝病毒感染的重要標(biāo)志物,也是我國獻(xiàn)血者篩查的規(guī)定項(xiàng)目,S基因突變影響抗原決定簇的識(shí)別是診斷失敗的重要原因;另外S基因突變可能影響抗原的合成、分泌、表達(dá),導(dǎo)致血中表面抗原的水平低于試劑檢測(cè)能力,而造成對(duì)HBV感染的漏檢。許多研究都顯示HBsAg陰性并不能完全排除HBV感染的可能性,這樣給輸血安全帶來極大的隱患。陳長(zhǎng)榮等[8]在9023例HBsAg陰性的無償獻(xiàn)血者中,發(fā)現(xiàn)17例HBV-DNA陽性;黃象艷等[9]研究表明在183例單獨(dú) HBcAb陽性的樣本中有3例HBV-DNA陽性。本實(shí)驗(yàn)在HBsAg陰性的幾個(gè)少見血清學(xué)模式的樣本中檢測(cè)到13例HBVDNA陽性患者,占7.5%(13/173),但所有的樣本的HBV-DNA載量均比較低,大多在103～105copies/mL,可能由于循環(huán)中的HBsAg較低而低于試劑盒檢測(cè)靈敏度而不能被檢出。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)HBsAg陰性但HBeAg陽性模式所有樣本均為HBV-DNA陽性,并且這8例患者的 HBcAb均為陽性,僅 HBcAb陽性的樣本中也有3例HBV-DNA陽性,所以HBsAg陰性而HBV-DNA陽性的患者中84.6%(8+3/13)為HBcAb陽性。因此對(duì)HBcAb陽性而HBsAg陰性的樣本有必要進(jìn)行核酸檢測(cè)進(jìn)行排除HBV感染。國外也有報(bào)道為了減少隱匿HBV感染的可能而對(duì)獻(xiàn)血者增加HBcAb的篩查[10],必要時(shí)間需進(jìn)行核酸檢測(cè)。

總之,臨床需對(duì)少見乙肝免疫學(xué)標(biāo)志物模式引起注意,可利用基因測(cè)序技術(shù)對(duì)其原因進(jìn)行進(jìn)一步分析,同時(shí)重視乙肝的核酸篩查防止臨床診斷失誤,特別是隱匿HBV感染引起的輸血安全隱患。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、感染病學(xué)分會(huì),慢性乙型肝炎防治指南,中華肝臟病雜志,2005,13(12)：881

[2] 錢福初,鄒偉華,王翔,等.血清乙肝表面抗原和表面抗體共陽性感染者特點(diǎn)分析.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(4)：815

[3] 王蕾,劉華,章勵(lì),等.乙型肝炎血清標(biāo)志物HBsAg和HBsAb同時(shí)陽性模式的相關(guān)研究.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,23(5)：530

[4] Colson,Borentain P,Motte A,et al.Clinical and virological significanceof the Co-existence of HBsAg and anti-HBs antibodies in hepatitis B chronic carriers.Virology,2007,367(1)：30

[5] Mesenas SJ,Chow WC,Zhao Y,et al.Wild-type and“a”epitope variants in chronic hepatitis B virus carriers positive for hepatitis B surface antigen and antibody J Gastroenterol Hepatol,2002;17：148

[6] Lada O,Benhamou Y,Poynard T,et al.Coexistence of hepatitis B surface antigen(HBs Ag)and anti-HBsantibodiesin chronic hepatitis B virus carriers：influence of“a”determinant variants J Virol,2006,80(6)：2968

[7] 駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社,2001：56,530

[8] 陳長(zhǎng)榮,袁權(quán),葛勝祥,等.無償獻(xiàn)血者中隱匿性乙型肝炎病毒感染及表面抗原突變分析.病毒學(xué)報(bào),2009,25(3)：178

[9] 黃象艷,李曉娣,黃象娟,等.抗-HBc單項(xiàng)陽性患者中的隱匿性HBV感染.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2010,24(3)：221

[10]Urbani S,Fagnoni F,Missale G,et al.The role of anti-core antibody response in the detection of occult hepatitis B virus infection.Clin Chem Lab Med,2010,48(1)：23