HPLC測(cè)定養(yǎng)血糖漿中芍藥苷的含量

★ 高華宏張升方永奇,3曾文雪,4**（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬三亞市中醫(yī)院 三亞57000；.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 廣州 510405；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心 廣州 510405；4.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌330006）

養(yǎng)血糖漿系由當(dāng)歸、白芍、川芎、黃芪等藥材加工提取制得的口服糖漿劑，具有補(bǔ)氣血、調(diào)經(jīng)的功效。目前主要用于月經(jīng)不調(diào)，行經(jīng)腹痛，貧血虛弱，產(chǎn)后體虛，萎黃肌瘦，產(chǎn)后血虛等癥狀。目前周堅(jiān)等對(duì)其當(dāng)歸、川芎及黃芪進(jìn)行了薄層色譜鑒別，并對(duì)總阿魏酸進(jìn)行了含量測(cè)定[1]，為控制該產(chǎn)品質(zhì)量提供了依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)為了進(jìn)一步完善其含量測(cè)定項(xiàng)目，對(duì)處方中的君藥白芍的主要有效成分芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（美國(guó)WATERS，515泵，2487紫外檢測(cè)器），電子天平（日本島津AUY120）。

芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736-200526），養(yǎng)血糖漿（四川省通園制藥有限公司，批號(hào)20110301-20110305），乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），Diamonsil C18預(yù)柱，流動(dòng)相0.1%磷酸溶液-乙腈（82：18），檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，溫度室溫，進(jìn)樣量10 μL，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品5.83 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得58.3 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取上述儲(chǔ)備液10 mL，加甲醇稀釋，作為對(duì)照品溶液。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10 mL，根據(jù)參考文獻(xiàn)的方法[3-4]和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，精密量取加8倍量體積的70%乙醇萃取，取上清液，然后水浴揮干，最后用甲醇稀釋至100 mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取不含白芍的陰性樣品，照2.2.2項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 干擾試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，按照2.1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。由圖可知，其他原輔料對(duì)芍藥苷的含量測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 養(yǎng)血糖漿高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5，1，2，10，25 mL，分別置于25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，記錄芍藥苷峰面積值，以峰面積積分值（A）對(duì)對(duì)照品濃度C（μg/ mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=1134C-146.73（r= 0.9998）。結(jié)果表明，芍藥苷對(duì)照品濃度在1.166-58.3μg/mL與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一批樣品制得的供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，記錄峰面積，RSD為1.04%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別稱取本品同一批號(hào)樣品6份，照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定芍藥苷含量。結(jié)果RSD=0.98%(n=6)，表明本法的重復(fù)性良好。

2.7 供試品穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)同一批樣品制得的供試品溶液，分別于第0，2，4，6，8，10 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為1.34%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知芍藥苷含量的高、中、低濃度的樣品各3份，共9份樣品，分別加入芍藥苷對(duì)照品98.0 μg，按照2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液，按照2.1項(xiàng)色譜條件，分別測(cè)定，計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定 取5批樣品，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試液。照上述色譜條件分別測(cè)定含量。結(jié)果如表2。

表2 樣品芍藥苷含量測(cè)定 /μg·mL-1

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 在試驗(yàn)過程中，曾采用甲醇-水（25：75）、乙腈-水（26：74）等多種流動(dòng)相，色譜峰分離效果均不理想，而未被采用。而以0.1%磷酸溶液-乙腈（82：18）為流動(dòng)相時(shí)，分離效果較好，無(wú)其它干擾的雜質(zhì)峰，峰形較好。

3.2 提取溶劑的選擇 在供試品制備時(shí)，參考文獻(xiàn)大多采用甲醇、不同濃度乙醇（70%、80%）作為提取溶媒[2-5]，通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)70%、80%乙醇萃取得到的樣品濃度大于甲醇，而70%、80%乙醇的提取效果差別不大，從節(jié)約溶劑的角度出發(fā)選擇70%的乙醇。結(jié)合文獻(xiàn)中加入量的考察，最終確定加入8倍量體積的70%乙醇。不僅無(wú)雜質(zhì)干擾，且含量高，穩(wěn)定可靠，而且操作方法簡(jiǎn)單有效。

[1].周堅(jiān),王宓.養(yǎng)血當(dāng)歸糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2003,23(1):61-62.

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