幾種抗菌素對(duì)雞大腸桿菌的抑菌試驗(yàn)

范國英,劉志科,李沖,張秋雨,耿中偉,陳桂香

（河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003）

雞大腸桿菌?。–olibosiscillo）是由大腸埃希氏桿菌的某些特定血清型引起的雞的一種傳染性疾病的總稱,其臨床特征主要包括大腸桿菌肉芽腫、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、氣囊炎、眼炎、卵黃性腹膜炎等.大腸桿菌為革蘭氏陰性菌,主要寄居在人和動(dòng)物腸道中,對(duì)營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長良好,并廣泛分布于水、土壤或腐敗物中.不同品種不同日齡的雞群均可發(fā)病,尤其對(duì)雛雞危害更大.一旦感染大腸桿菌病,輕者造成雞群生產(chǎn)性能下降,重者導(dǎo)致發(fā)病雞群死亡,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失.20世紀(jì)80年代以來,大腸桿菌在我國養(yǎng)禽業(yè)中的發(fā)生越來越普遍,越來越嚴(yán)重,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成極大的威脅[1-2].

通過臨床常用的幾種抗生素藥物對(duì)提取的發(fā)病雞大腸桿菌進(jìn)行分離培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn),進(jìn)一步說明雞大腸桿菌耐藥性的問題,為養(yǎng)殖戶對(duì)大腸桿菌的治療提供科學(xué)的依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物先鋒霉素、青霉素、強(qiáng)力霉素、氨芐西林、卡那霉素、四環(huán)素、復(fù)達(dá)欣、新霉素、紅霉素、頭孢噻呋、苯唑青霉素、氨芐青霉素、美滿霉素、先鋒霉素Ⅳ等藥敏片,營養(yǎng)瓊脂、蒸餾水、氯化鈉、氫氧化鈉、牛肉膏、蛋白胨等購于河南新鄉(xiāng)鼎盛醫(yī)療器械有限公司.各種培養(yǎng)基的配置均由河南科技學(xué)院動(dòng)科學(xué)院基礎(chǔ)獸醫(yī)教研室配置.

1.1.2 試驗(yàn)菌種從衛(wèi)輝市某雞場采集有腹瀉癥狀疑似大腸桿菌病病雞的糞便,共采集30例病料.

1.1.3 器械與試劑電子天平,購于河南新鄉(xiāng)鼎盛醫(yī)療器械有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱,電熱鼓風(fēng)干燥箱,蒸汽高壓滅菌鍋,微量加熱器等均購于上海博迅實(shí)業(yè)有限公司.

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備蛋白胨10 g,牛肉膏3 g,氯化鈉5 g,瓊脂20 g,蒸餾水1000 mL.將除瓊脂以外的各種成分溶于蒸餾水中,加熱煮沸,使溶液穩(wěn)定,過濾.加入15%氯化鈉溶液,調(diào)整pH值為6.8～7.0,加入瓊脂,攪拌使瓊脂溶化.分裝,121℃高壓滅菌15 min[3-4].

1.2.2 細(xì)菌的分離與鑒定無菌采取其肝臟、心血和肺臟的組織,分別劃線接種到有培養(yǎng)基的平板上,37℃培養(yǎng)20 h.培養(yǎng)后涂片進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢[5].

1.2.3 菌懸液的制備離心取上清接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置37℃恒溫箱中培養(yǎng),18 h后用無菌生理鹽水配制成含活菌數(shù)約為106個(gè)/mL的菌懸液,待用.

1.2.4 紙片擴(kuò)散法用接種環(huán)取菌液0.1 mL,均勻涂布于瓊脂平皿上,用無菌鑷子分別夾取滅菌紙片,貼在含菌平皿上,每平皿等距離放置藥敏片10片,蓋上平皿,置37℃培養(yǎng)24 h后取出,測量抑菌圈直徑（mm）,取其平均值,即為該藥對(duì)大腸桿菌的抑菌結(jié)果.判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑小于10 mm為低度敏感；抑菌圈直徑在10～18 mm之間為中度敏感；抑菌圈直徑大于18 mm為高度敏感[4].

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的分離鑒定結(jié)果

在營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)后,形成中等大小,圓形凸起,表面光滑濕潤,淺灰色半透明菌落.革蘭氏染色鏡檢,可見兩端鈍圓、多數(shù)散在排列的革蘭氏陰性短桿菌.

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表1.

表1 不同藥敏片對(duì)大腸桿菌的抑菌圈大小Tab.1 Bac teriostasis circle sizes bydiffent antibiotics ofEscherichia colimm

由表1可知,該大腸桿菌對(duì)青霉素、復(fù)達(dá)欣、頭孢復(fù)方、苯唑青霉素均不敏感,對(duì)卡那霉素、氨芐西林、新霉素、氨芐青霉素低敏,對(duì)先鋒霉素、四環(huán)素、先鋒霉素Ⅳ、紅霉素、美滿霉素中度敏感.本次藥敏試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)高度敏感的抗菌藥物.

本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,臨床上常用抗菌藥物中已有很多對(duì)大腸桿菌產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥性.禽類大腸桿菌病的多重耐藥菌株普遍存在,且日趨上升.禽類大腸桿菌病的耐藥性日益嚴(yán)重,其藥敏譜越來越窄,可選用的抗菌藥物也越來越少,隨著大腸桿菌多重耐藥性的逐漸增加,聯(lián)合用藥的效果也必然會(huì)越來越差[6].

3 討論與結(jié)論

不利的外界條件常是導(dǎo)致禽類大腸桿菌病爆發(fā)的主要原因.如飼養(yǎng)管理不當(dāng)、舍內(nèi)空氣不流通,不及時(shí)清理糞便造成的空氣中氨氣濃度過高,雞群飼養(yǎng)密度過大,舍內(nèi)溫度過低、濕度過大,以及由于更換飼料,注射疫苗,氣溫的變化等一些應(yīng)激因素或是禽類機(jī)體由于其他疾病等因素造成的抵抗力下降等都會(huì)引起禽類爆發(fā)大腸桿菌病.禽類大腸桿菌病的爆發(fā)一般具有：可感染不同日齡的禽類,且發(fā)病癥狀典型；發(fā)病率、死亡率以及復(fù)發(fā)率高；同時(shí)與其他疾病的混合感染率非常高；可經(jīng)呼吸道、消化道等途徑傳播,也可經(jīng)垂直傳播；由于藥物的耐藥性嚴(yán)重使得大腸桿菌病的治療相當(dāng)困難[6].

多年來,由于抗生素類藥物的濫用導(dǎo)致大腸桿菌病的耐藥菌株越來越多,耐藥譜也越來越廣.本試驗(yàn)已證明大腸桿菌對(duì)包括卡那霉素、青霉素、新霉素、氨芐西林、慶大霉素等藥物都有不同程度地產(chǎn)生了耐藥性,對(duì)四環(huán)素、先鋒霉素Ⅳ、強(qiáng)力霉素、紅霉素等中度敏感.試驗(yàn)中幾種抗生素類藥物均未對(duì)該種大腸桿菌菌株產(chǎn)生很好的敏感性.對(duì)于大腸桿菌病的治療僅靠某種藥物已很困難,必須采取綜合的防治措施.另外,由于發(fā)病雞飲食較差,一味的將藥物拌到飼料中飼喂的話,采食藥物的量達(dá)不到治療劑量而沒有使藥物發(fā)揮作用.將不溶于水的藥物制成水溶性或聯(lián)合用藥治療效果較好.孟志敏等用甲砜霉素可溶性粉末對(duì)雞大腸桿菌的治療試驗(yàn)取得了較好的效果,建議將不溶水的甲砜霉素制成可溶性的藥物用于飲水效果較好[7].馮善祥采用一種西藥復(fù)方制劑氟苯尼考-硫酸黏菌素可溶性粉對(duì)雞大腸桿菌病進(jìn)行治療試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)復(fù)方制劑對(duì)雞大腸桿菌病具有明顯的保護(hù)作用,可用于雞大腸桿菌病的防治[8].

在生產(chǎn)過程中長期使用某種抗生素類藥物或某類抗生素類藥物對(duì)疾病的治療和控制上,療效確切,但機(jī)體極易產(chǎn)生抗藥性,從而導(dǎo)致藥物的療效降低.對(duì)大腸桿菌曾有很好抑菌效果的氨芐西林和頭孢曲松在本試驗(yàn)中卻沒有表現(xiàn)出來很好的抗菌活性,可見大腸桿菌已對(duì)該藥產(chǎn)生了耐藥性.細(xì)菌耐藥性已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)之一.在這種情況下,人們開始更多的關(guān)注一些天然藥物.經(jīng)國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),某些天然植物具有良好的抗菌活性,并且與合成抗菌藥物聯(lián)合使用時(shí),能增強(qiáng)抗菌藥物的抗菌活性,同時(shí)可以抑制或者消除細(xì)菌的耐菌性.邵澤光等以黃連、黃芩、黃柏、黃芪等七種中藥復(fù)方制劑配合乳酸環(huán)丙沙星對(duì)發(fā)病雞進(jìn)行治療,治愈率達(dá)98%,有效率達(dá)100%,明顯優(yōu)于中藥組和乳酸環(huán)丙沙星組單獨(dú)用藥的治療效果[9].高迎春等用一種中藥提取制劑地錦草顆粒對(duì)雞大腸桿菌病進(jìn)行臨床療效試驗(yàn),其有效率治愈率分別達(dá)到了76.9%和69.2%,中藥提取制劑能明顯的消除大腸桿菌的多重耐藥性,對(duì)耐藥基因的擴(kuò)散有抑制作用[10].魯改儒采用不同的中藥復(fù)方制劑與慶大霉素等抗生素類藥物對(duì)肉仔雞大腸桿菌病進(jìn)行治療對(duì)比試驗(yàn),結(jié)果顯示中藥復(fù)方制劑的治療效果優(yōu)于抗生素治療效果[11].

由于不同養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)規(guī)模﹑飼養(yǎng)水平以及不同的用藥習(xí)慣,使得不同地區(qū)的大腸桿菌病的耐藥性差異很大.不同地區(qū)的大腸桿菌病都有其各自不同的藥敏譜,即使新一代的抗生素類藥物的治療效果也不見得就好.目前我國禽類大腸桿菌病的耐藥性越來越嚴(yán)重且非常復(fù)雜,幾乎所有的抗菌藥物即使是新一代的抗菌藥物也已產(chǎn)生了耐藥性.臨床上如不進(jìn)行藥敏試驗(yàn)很難找出高效適用的抗菌藥物.傳統(tǒng)的將抗生素類藥物作為保健藥物的飼養(yǎng)模式如不改變,只會(huì)使禽類大腸桿菌病的耐藥性越來越嚴(yán)重,使得我國的大腸桿菌病的防治工作也越來越困難.

本文通過對(duì)臨床常用的幾種抗生素藥物對(duì)提取的發(fā)病雞大腸桿菌進(jìn)行分離培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn),得出相關(guān)數(shù)據(jù),以期能為養(yǎng)殖戶對(duì)大腸桿菌的治療提供科學(xué)的依據(jù).

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