大孔樹脂法測定平肝降脂膠囊中絞股藍總皂苷的含量方法研究

徐玥 丁青龍 李瑩 周其

大孔樹脂法測定平肝降脂膠囊中絞股藍總皂苷的含量方法研究

徐玥 丁青龍 李瑩 周其

目的研究平肝降脂膠囊中絞股藍總皂苷的大孔樹脂吸附最佳提取工藝。方法大孔樹脂吸附法及紫外分光光度測定法。結果樣品水溶液上AB28大孔吸附樹脂，上樣量為20ml靜置30min，以3BV水洗脫后，再以2BV70%乙醇洗脫可以達到理想的結果。(樣品水溶液:取裝量差異項下的本品內容物，研細，三批各取約12.5g，精密稱定，加蒸餾水適量使溶解，過濾，分別定容至500ml，按上述結果進行柱分離，收集洗脫液，過濾，蒸干，用甲醇定容至10ml，即得三份供試液，備用。結論采取該方法可以很好測定平肝降脂膠囊中的絞股藍總皂苷的含量。

平肝降脂膠囊;大孔樹脂吸附法;UV法

平肝降脂膠囊為解放軍第102醫(yī)院與南京中醫(yī)藥大學海洋藥物研究所制劑研究生聯合研制的中藥復方制劑，主要由白芍、丹參、絞股藍、鱉甲等藥組成，具有清熱利膽，平肝養(yǎng)血，降低血清谷丙轉氨酶;用于治療遷延性、慢性肝炎;我們對平肝降脂膠囊中絞股藍總皂苷進行含量測定控制，實驗及結果如下。

1 實驗方法［1-3］

1.1 儀器、材料 752型紫外可見分光光度計(上海儀器廠);10萬分之一電子天平(上海儀器廠);恒溫烘箱(沈陽利港凈化設備廠)。平肝降脂膠囊(解放軍第102醫(yī)院制劑中心，批號 070622、070702、070703);對照品人參皂苷 Rb1(中國藥品生物制品檢定所，批號:110704-200217);大孔吸附樹脂AB28(天津南開大學化工廠);甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、高氯酸、香草醛等均為分析純。

1.2 對照品試液的配制 精密稱取人參皂苷Rb1對照品2.04mg，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rb11.02mg的溶液，作為對照品溶液。

1.3 測定波長的確定 精密吸取供試液10μl，人參總皂苷對照品溶液50μl(1.02mg/m l)，分別置具塞試管中，在60℃水浴中蒸干，加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，密塞，于60℃水浴中加熱15min，取出立即用冰水冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，于400～800nm波長處掃描測定吸收度，結果均在550nm處有最大吸收波長，故選擇550nm為測定波長。

1.4 空白干擾試驗 精密吸取甲醇液60μl，置具塞試管中，在60℃水浴中蒸干，加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，密塞，于60℃水浴中加熱15min，取出立即用冰水冷卻，加冰醋酸5m l，搖勻，用以上試劑為空白在550nm波長處測定吸收度，結果顯示陰性無干擾，圖譜見附錄。

1.5 標準曲線的繪制 精密吸取人參皂苷Rb1對照品(1.02mg/ml)50、100、200、300、400、500μl置具塞試管中，操作方法同“三”步驟，于550nm處測定各A值，結果見表1。

表1 吸光度與對照品含量關系

以對照品含量為橫坐標，A值為縱坐標繪制標準曲線，曲線如下:

圖1 人參皂苷Rb1標準曲線

2 結果

人參皂苷Rb1對照品含量在51～510μg間與吸光度成線性關系，計算回歸方程為:A=0.0025C-0.0016;r=0.9998。

2.1 精密度試驗 取同一份對照品5份，分別在550nm處測其吸光度，結果RSD為1.12%，儀器精密度良好，數據見表2。

表2 精密度實驗結果

結論:儀器精密度良好。

3 工藝參數的考察和優(yōu)化［1，2］

3.1 大孔吸附樹脂的選擇及前處理 參考相關文獻［25］本實驗選用AB28型大孔吸附樹脂，以乙醇濕法裝柱，繼而用95%乙醇洗脫，不時檢測流出的乙醇，當流出的乙醇與水(1∶1)混合不呈白色混濁即可，然后用大量的蒸餾水洗至無醇味，稱取樹脂時以樹脂預處理后的質量(g)為單位備用。

3.2 上柱液的制備 取裝量差異項下的本品內容物(批號:070622)，研細，取約12.5g，精密稱定，加蒸餾水適量使溶解，過濾，定容至500ml。

3.3 洗脫溶酶的確定 考察不同體積分數的乙醇洗脫對絞股藍總皂苷提取效果的影響。將絞股藍總皂苷提取液通過樹脂柱(2cm×10cm)。洗脫時分別用4BV的20%、40%、60%、70%、80%、95%及無水乙醇洗脫皂苷類成分，將洗脫液分別蒸干，用甲醇溶解并定容，分別測定洗脫液中絞股藍總皂苷的含量。結果見圖2。

圖2 洗脫溶酶的考察結果

由以上結果可知，隨著乙醇含量的提高，皂苷的含量相應的提高。但是，70%、80%、95%、無水乙醇的差別不是很大，再從經濟角度考慮，選擇70%醇作為洗脫溶劑。

3.4 70 %乙醇洗脫量的確定 將絞股藍提取液約15ml通過樹脂柱(2cm×10cm)。靜置30min后，先用3BV蒸餾水洗至流出液Molish反應呈陰性，再用4BV70%乙醇依次洗脫，洗脫液流速1ml/min，以1BV為1份，共收集4份，按上述高氯酸-香草醛顯色方法測定絞股藍總皂苷的含量。結果見表3。

表3 不同用量70%乙醇洗脫后皂苷的含量

結果顯示，2BV洗脫溶媒絞股藍總皂苷的累計百分含量達96%?；鞠幢M，故確定洗脫溶媒為20ml。

3.5 最佳上柱量的確定 分別吸取絞股藍總皂苷提取液5、8、12、15、20、25、30m l上大孔吸附樹脂柱(2cm ×10cm)，過柱流出液重吸附3次，且靜置30min，依次用3BV蒸餾水、2BV70%乙醇溶液梯度洗脫，收集70%乙醇洗脫液，按上述高氯酸-香草醛顯色方法測定絞股藍總皂苷的含量。結果顯示，20ml上柱量為飽和上柱量，超過20ml即超過了樹脂的吸附容量，因此，20m l為最佳上柱量。

3.6 最佳吸附時間的確定 分別吸取絞股藍總皂苷提取液20ml上大孔吸附樹脂柱(2cm×10cm)，過柱流出液重吸附3次，分別靜置 5、15、30、60min，依次用 3BV 蒸餾水、2BV70%乙醇溶液梯度洗脫，收集70%乙醇洗脫液，按上述高氯酸-香草醛顯色方法測定絞股藍總皂苷的含量。結果顯示，靜置30min后洗脫最佳。

4 實驗結論

樣品水溶液上AB28大孔吸附樹脂，上樣量為20m l靜置30min，以3BV水洗脫后，再以2BV70%乙醇洗脫可以達到理想的結果。

按上述試驗結論，取裝量差異項下的本品內容物，研細，三批各取約12.5g，精密稱定，加蒸餾水適量使溶解，過濾，分別定容至500ml，按上述結果進行柱分離，收集洗脫液，過濾，蒸干，用甲醇定容至10m l，即得三份供試液，備用。

［1］ 林霞，郭偉．大孔吸附樹脂在天然藥物皂苷成分研究中的應用．衛(wèi)生職業(yè)教育，2006，19(3):79-80.

［2］ 田其學，唐正平．絞股藍口服液中絞股藍總皂苷的含量測定．湖南中醫(yī)雜志，17(3):52-53．

［3］ 宋小妹．超聲法提取絞股藍總皂苷的工藝研究．中成藥，1998，20(5):45．

215000 蘇州市中醫(yī)醫(yī)院(徐玥);南京中醫(yī)藥大學(丁青龍 李瑩 周其)