急性心肌缺血犬心肌超微結(jié)構(gòu)的變化及龍牙蔥木皂苷的保護(hù)作用

王晶波 呂銘洋 崔新明 祁 樂 楊 煜 謝 宇 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院病理科，吉林 長春 00)

急性心肌缺血犬心肌超微結(jié)構(gòu)的變化及龍牙蔥木皂苷的保護(hù)作用

王晶波 呂銘洋1崔新明2祁 樂3楊 煜2謝 宇4(吉林大學(xué)第一醫(yī)院病理科，吉林 長春 130021)

目的 觀察犬急性心肌缺血時(shí)心肌超微結(jié)構(gòu)的變化及龍牙蔥木皂苷的保護(hù)作用。方法 取雜種犬24只，隨機(jī)分為模型組、陽性藥(地奧心血康膠囊)組，龍牙蔥木皂苷30.0和60.0 mg/kg劑量組;結(jié)扎麻醉開胸犬左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)建立急性心肌缺血模型，觀察龍牙蔥木皂苷對(duì)心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果 與模型組比較，龍牙蔥木皂苷能夠明顯改善急性心肌缺血所致的心肌光鏡及電鏡下細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損傷程度。結(jié)論 龍牙蔥木皂苷對(duì)犬急性心肌缺血損傷時(shí)的心肌細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用。

龍牙蔥木皂苷;心肌缺血;超微結(jié)構(gòu)

龍牙蔥木即遼東蔥木(Araliamandshurica Rupr.et Maxim)別名刺龍芽、刺老芽，系五加科藥用植物，其提取物的主要成分為皂苷〔1〕。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，龍牙蔥木皂甙(As)具有抗炎及抗缺氧作用〔2，3〕，可降低心肌缺血犬的梗死面積，降低肌酸激酶(CPK)、乳酸脫氫酶(LDH)的活性，降低游離脂肪酸(FFA)、脂質(zhì)過氧化物酶(LPO)含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性，對(duì)微量元素銅、鋅、鈣有明顯作用〔4〕。為進(jìn)一步研究As抗心肌缺血作用，本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎犬左冠狀動(dòng)脈前降支建立心肌缺血模型，從心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)方面研究As對(duì)急性心肌缺血犬的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 As由吉林大學(xué)第一醫(yī)院提供。地奧心血康(DK)由成都地奧制藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):0806080。健康成年雜種犬，雌雄兼用，體重12～16 kg，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。SC-3型電動(dòng)呼吸機(jī)，上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn);JEM-1200EX型透射電子顯微鏡(日本電子公司);日產(chǎn)Olympus BX50顯微鏡。

1.2 方法 雜種犬24只，隨機(jī)分為模型組、陽性藥組(地奧心血康膠囊，50.0 mg/kg)、As小劑量組(30.0 mg/kg)、As大劑量組(60.0 mg/kg)，每組6只。均采用十二指腸給藥方式。各組雜種犬經(jīng)戊巴比妥鈉(30.0 mg/kg)靜脈注射麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，切開頸部皮膚，氣管插管，連接人工呼吸機(jī)。于左側(cè)第四肋間施開胸術(shù)，暴露心臟，剪開心包，分離冠狀動(dòng)脈左前降支主干中下1/3交界處，穿線以備結(jié)扎制備急性心肌梗死模型。剪去腹部正中毛發(fā)，沿腹白線切開上腹部皮膚肌肉，暴露十二指腸，穿線以備給藥。術(shù)畢，穩(wěn)定20 min，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，建立實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗死模型，十二指腸給予受試藥物。觀察6 h后，處死動(dòng)物，取1×1×2 mm3大小梗死區(qū)心肌組織，4%戊二醛前固定，1%鋨酸后固定，乙醇系列脫水，Epon812包埋，LKBⅢ型超薄切片機(jī)半薄切片定位后，超薄切片(70 nm)，雙重電子染色。JEM-1200EX型透射電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)并攝片。取心肌組織，置10%甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡觀察〔5〕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 As對(duì)急性心肌缺血犬心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響 模型組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變明顯:肌膜破損，細(xì)胞核消失;肌原纖維水腫、間隙增寬;可見大量肌絲溶解、斷裂、紊亂;一些線粒體腫脹，嵴斷裂，局部空冷化，一些線粒體體積縮小呈凝聚狀，肌漿網(wǎng)腫脹。陽性藥組線粒體排列整齊，嵴不完全清晰，肌絲排列比較整齊，肌節(jié)各帶清晰可見。As小劑量組肌絲有些斷裂溶解，線粒體腫脹，排列不規(guī)則。As大劑量組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變呈明顯好轉(zhuǎn)趨勢(shì)，肌膜完整;肌絲排列整齊，肌節(jié)各帶清晰可見;線粒體結(jié)構(gòu)基本正常，整齊地排列在肌原纖維之間，表明As對(duì)急性心肌梗死心肌結(jié)構(gòu)具有減輕作用。見圖1。

2.2 As對(duì)急性心肌缺血犬心肌細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)的影響 模型組:可見較大灶狀心肌纖維胞漿嗜伊紅濃染，胞核濃縮，其中少數(shù)心肌纖維出現(xiàn)溶解、破壞，但局部浸潤炎細(xì)胞較少，部分病灶內(nèi)可見間質(zhì)出血;這種心肌病變主要位于心室壁的內(nèi)、中層，而外層少見，與其周圍正常心肌有一定界限。陽性藥對(duì)照組:可見心肌間質(zhì)水腫灶，但其范圍較模型組明顯縮小;在間質(zhì)水腫灶內(nèi)可見少量肌纖維胞質(zhì)呈嗜伊紅濃染，胞核濃縮，但未見明顯肌纖維溶解破壞，心肌間質(zhì)水腫灶與其周邊的正常心肌分界明顯。As小劑量組:心室壁內(nèi)可見數(shù)個(gè)較大心肌間質(zhì)水腫區(qū)，其面積較陽性藥組稍小，心肌間質(zhì)水腫灶多呈灶狀，與周圍正常心肌纖維有一定分界，并可見較大灶的心肌纖維嗜伊紅濃染區(qū)，病變主要位于室壁的內(nèi)層和中層。As大劑量組:心室壁內(nèi)心肌間質(zhì)水腫灶的數(shù)量和范圍較低劑量組及陽性藥組明顯減少，間質(zhì)水腫程度明顯減輕，可見少數(shù)心肌纖維呈嗜伊紅濃染，表明As對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用。見圖2。

圖1 As對(duì)急性心肌缺血犬心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響(透射電鏡)

圖2 As對(duì)急性心肌缺血犬心肌病理形態(tài)學(xué)的影響(×200)

3 討論

用電鏡和光鏡做組織學(xué)切片是檢測(cè)心肌缺血最直接可靠的方法。心肌缺血缺氧，可引起心肌細(xì)胞功能與代謝異常，進(jìn)而導(dǎo)致心肌形態(tài)結(jié)構(gòu)損害，心肌超微結(jié)構(gòu)的改變能夠反映心肌缺血缺氧早期病理變化。線粒體是細(xì)胞進(jìn)行有氧氧化和氧化磷酸化的場(chǎng)所，是細(xì)胞的供能站，當(dāng)細(xì)胞缺氧時(shí)，線粒體首先發(fā)生變化。線粒體的結(jié)構(gòu)正常對(duì)于維持心肌細(xì)胞功能十分重要，而肌絲與肌節(jié)結(jié)構(gòu)完整是心肌舒縮功能的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)〔6〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組心肌超微結(jié)構(gòu)的病理改變顯著，線粒體腫脹、體積縮小呈凝聚狀，肌絲溶解、斷裂、紊亂;而As能夠減輕自由基的損害;促進(jìn)能量代謝恢復(fù)，減輕心肌梗死時(shí)的心肌損害;抑制線粒體內(nèi)自由基的增加，減輕心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷;同時(shí)，病理形態(tài)學(xué)觀察到模型組少數(shù)心肌纖維出現(xiàn)溶解、破壞，部分病灶內(nèi)可見間質(zhì)出血，心肌纖維胞質(zhì)嗜伊紅濃染，而As各劑量組心肌間質(zhì)水腫比模型組明顯縮小，間質(zhì)水腫程度減輕，心肌纖維胞質(zhì)嗜伊紅濃染消失，表明As能夠保護(hù)缺血引起的細(xì)胞損傷。

1 Kuang HX，Sun H，Zhang N，et al.Two new saponins，congmuyenosides A and B，from the leaves of Aralia elate collected in Heilongjiang，China〔J〕.Chem Pharm bull Tokyo，1996;44(11):2183-5.

2 周重楚，孫曉波，劉 威.龍牙蔥木總甙的抗炎作用〔J〕.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，1991;5(1):30-3.

3 周重楚，姜 平，師海波，等.龍牙蔥木總甙的抗缺氧作用〔J〕.中草藥，1991;22(3):114-6.

4 石 毅，王曉明，呂文偉，等.龍牙蔥木皂苷對(duì)犬急性心肌缺血的保護(hù)作用〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2006;26(9):1215-6.

5 徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:921.

6 金 輝，呂文偉，溫富春，等.舒心貼膏對(duì)急性心肌缺血犬心外膜電圖及心肌病理形態(tài)學(xué)的影響〔J〕.中草藥，2006;37(1):96-8.

R54

A

1005-9202(2012)16-3460-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.052

1 吉林大學(xué)珠海學(xué)院化學(xué)與藥學(xué)系2008屆生物制藥專業(yè)

2 吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院 3 吉林大學(xué)第三臨床學(xué)院2006級(jí)

4 吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院

楊 煜(1966-)，女，實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要從事免疫學(xué)研究。

王晶波(1960-)，男，主管技師，主要從事臨床病理實(shí)驗(yàn)研究。

〔2011-08-22收稿 2012-06-19修回〕

(編輯 袁左鳴)