不同方法建立的人大細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物學(xué)特點(diǎn)

人肺癌裸鼠移植瘤模型是抗腫瘤藥研究的常用模型，更是抗血管生成類抗腫瘤藥的首選模型。保持腫瘤生物學(xué)特性的穩(wěn)定，盡可能地模擬癌癥患者臨床生理特征是評(píng)價(jià)一個(gè)裸鼠異種移植瘤模型成功和優(yōu)劣的關(guān)鍵［1］。目前國(guó)內(nèi)外已建立了多個(gè)傳代穩(wěn)定的肺癌裸鼠皮下移植瘤模型，應(yīng)用于小細(xì)胞肺癌、肺腺癌等的研究［2］。但建立人大細(xì)胞肺癌移植瘤模型的詳細(xì)報(bào)道甚少，對(duì)該移植瘤模型的生物學(xué)特征的研究更是空白。NCI-H460細(xì)胞來(lái)自男性大細(xì)胞肺癌患者的胸腔積液，為美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)收藏的人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株。本文參考三種常用的皮下移植瘤造模方法分別建立了人大細(xì)胞肺癌 NCI-H460裸鼠移植瘤模型，并比較了三種方法建立的腫瘤模型的生長(zhǎng)規(guī)律和生物學(xué)特性，其中對(duì)移植瘤裸鼠免疫功能的研究尚屬首次。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與瘤株

BALB/c-nu/nu裸鼠，SPF級(jí)，3～4周，雌性。購(gòu)于上海必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司［生產(chǎn)許可證：SCXK(滬)2008—0016］。飼養(yǎng)及無(wú)菌實(shí)驗(yàn)操作均在浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心屏障系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行［實(shí)驗(yàn)室許可證：SYXK(浙)2008—0115］。人大細(xì)胞肺癌NCI-H 460細(xì)胞、人白血病 K562細(xì)胞：購(gòu)于中科院上海細(xì)胞所。

1.2 主要儀器與試劑

Nikon eclipse 80i顯微鏡，Nikon公司；Forma 3111型細(xì)胞培養(yǎng)箱，Thermo公司；SW-CJ-2F超凈工作臺(tái)，蘇州凈化；BIO-RAD 680酶標(biāo)儀；Axiovert 200熒光倒置顯微鏡，ZEISS；全自動(dòng)生化分析儀，日本日立；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血糖(G1u)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)試劑盒，由上海申能德賽技術(shù)診斷有限公司提供。

1.3 模型制備

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)移植法造模［3］：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期NCI-H 460細(xì)胞消化后，調(diào)整至5×107/mL，每鼠頸背皮下接種0.2m L。細(xì)胞懸液放置于冰上，接種過(guò)程必須在細(xì)胞懸液制備后1h內(nèi)完成。

1.3.2 組織塊移植法造模［4］：取培養(yǎng)細(xì)胞初代移植瘤生長(zhǎng)至1cm3的荷瘤裸鼠4只，采用脊髓離斷法處死動(dòng)物，無(wú)菌剝離瘤體，除去包膜，用0.9%生理鹽水洗滌2次，取周?chē)~(yú)肉樣新鮮組織剪成(0.5×0.5×0.5)mm大小瘤塊，用套管針接種于裸鼠頸背部皮下。接種標(biāo)本在離體后5min之內(nèi)完成。

1.3.3 勻漿液移植法造模［5］：取培養(yǎng)細(xì)胞初代移植瘤生長(zhǎng)至1cm3的荷瘤裸鼠4只，采用脊髓離斷法處死動(dòng)物，無(wú)菌剝離瘤體，除去包膜，剪碎，加入生理鹽水，以200目銅網(wǎng)過(guò)濾，制備成單細(xì)胞懸液，臺(tái)盼藍(lán)拒染計(jì)數(shù)活細(xì)胞后調(diào)整細(xì)胞濃度至5×107/m L，接種于裸鼠頸背部皮下，每只接種0.2m L。

1.4 一般生物學(xué)特征觀察

1.4.1 移植瘤生長(zhǎng)曲線：自接種日起每周測(cè)量1次腫瘤長(zhǎng)徑(b)和短徑(a)，按公式V=1/2×a×b2計(jì)算腫瘤體積，待腫瘤生長(zhǎng)至100mm3后每3天測(cè)量1次，共觀察5周，繪制生長(zhǎng)曲線圖，根據(jù)生長(zhǎng)曲線計(jì)算各種方法的成瘤率、成瘤潛伏時(shí)間、腫瘤體積倍增時(shí)間。

1.4.2 組織形態(tài)觀察；于2周和5周后分別取荷瘤裸鼠，處死，剝離腫瘤組織，中性甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察腫瘤組織形態(tài)。

1.5 外周血生化和白細(xì)胞分類檢測(cè)

3種方法建立的人大細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤模型作為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別簡(jiǎn)稱為勻漿液組、細(xì)胞培養(yǎng)組和埋塊組。另取10只正常 BALB/c-nu/nu裸鼠作為對(duì)照組。于造模后2周、4周和5周分別經(jīng)眼叢靜脈取血，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)其丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血糖(G1u)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指標(biāo)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束取血，EDTA二鈉抗凝，血球分析儀檢測(cè)白細(xì)胞總數(shù)(WBC)并進(jìn)行分類(NEUT%、LY%、MO%、HGB、PLT等)。

1.6 免疫功能檢測(cè)

于造模后2周和5周分別取荷瘤裸鼠和正常BALB/c-nu/nu裸鼠各5只，檢測(cè)其非特異性免疫功能。

1.6.1 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性［6］：裸鼠腹腔內(nèi)注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.5m L，30m in后頸椎脫臼處死，仰臥固定。常規(guī)消毒腹部皮膚，腹腔注入2m L生理鹽水，輕揉腹部1min。吸取腹腔液1m L，分滴于2張清潔載玻片上，將玻片置于濕盒內(nèi)蓋好，于37℃培養(yǎng)箱30min，其間輕晃動(dòng)玻片2次。取出后在生理鹽水內(nèi)清洗載玻片2次，洗去未吸附的細(xì)胞。晾干，1：1丙酮-甲醇溶液固定，用姬姆薩染色液染色3m in，用蒸餾水漂洗，晾干后，用油鏡檢查。計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)。

1.6.2 NK細(xì)胞活性［7］：無(wú)菌取脾，常規(guī)制備脾細(xì)胞，調(diào)整效應(yīng)細(xì)胞濃度至1×107個(gè)/m L，取傳代培養(yǎng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人白血病K562細(xì)胞，調(diào)整靶細(xì)胞濃度至1×105個(gè)/mL。采用LDH法檢測(cè)NK細(xì)胞活性。

2 結(jié)果

2.1 移植瘤生長(zhǎng)規(guī)律

本實(shí)驗(yàn)三種方法分別取10只裸鼠接種NCI-H 460細(xì)胞株。細(xì)胞培養(yǎng)移植法和勻漿液移植法成瘤率達(dá)100%，潛伏期為3～5d，腫瘤組織在短期內(nèi)呈膨脹性生長(zhǎng)。觀察5周，腫瘤生長(zhǎng)曲線符合Gompertzian曲線，18～20d腫瘤體積即達(dá)到1500

mm3，之后生長(zhǎng)趨于穩(wěn)定，平臺(tái)期較長(zhǎng)，如圖所示(圖 1)。腫瘤組織體積倍增時(shí)間(tumor doubling time，TD)分別為(6.1±0.4)d和(5.8±1.2)d。組織塊移植法成瘤率為80%，潛伏期為5～9 d。觀察5周，腫瘤生長(zhǎng)Gompertzian曲線多處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，觀察期結(jié)束瘤體積剛好達(dá)到1500mm3。TD為(4.7±0.7)d。腫瘤為可觸結(jié)節(jié)狀，質(zhì)略軟，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，腫瘤體積逐漸增大，質(zhì)變硬，瘤體被覆不完整結(jié)締組織包膜，毛細(xì)血管清晰，細(xì)胞培養(yǎng)組和勻漿液組后期瘤塊頂部發(fā)黑，局部血管明顯擴(kuò)張，有的瘤塊頂部可出現(xiàn)壞死。解剖后，見(jiàn)瘤體有完整的包膜，呈結(jié)節(jié)狀生長(zhǎng)，中央多為豆腐渣樣壞死。三種造模方法在腫瘤形成過(guò)程中均未觀察到腫瘤自然消退者。

2.2 組織形態(tài)學(xué)

肉眼觀察見(jiàn)3種方法組的腫瘤均位于皮下，球形或橢圓形，少數(shù)呈分葉狀，勻漿液組和細(xì)胞培養(yǎng)組的瘤塊大小較為均勻，而組織塊移植法由于接種的組織塊大小很難均一，所以形成的腫瘤大小有一定的差異。HE染色結(jié)果(圖2，見(jiàn)彩插6)顯示典型的上皮癌特征，移植瘤細(xì)胞多為圓形或橢圓形，體積較大，密集成團(tuán)分布或呈巢狀排列，胞漿豐富、深染，核分裂相多，或可見(jiàn)2～3個(gè)核仁。各組無(wú)明顯差別。

2.3 生化指標(biāo)

全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)生化指標(biāo)結(jié)果見(jiàn)圖3。接種2周后，與正常對(duì)照組比較，三組荷瘤小鼠血液中ALT變化不明顯，AST升高，其中埋塊組差異有顯著性(P＜0.05)；BUN有降低趨勢(shì)，細(xì)胞培養(yǎng)組差異有顯著性(P＜0.01)。荷瘤小鼠血糖均顯著降低(P＜0.05；P＜0.01)。三種方法組之間進(jìn)行單因素方差分析比較，勻漿液組荷瘤小鼠血液中GLU顯著低于埋塊組(P＜0.01)。接種4周后，與正常對(duì)照組比較，勻漿液組和細(xì)胞培養(yǎng)組荷瘤小鼠肝功能指標(biāo)ALT、AST均顯著升高(P＜0.05；P＜0.01)，腎功能指標(biāo) BUN、CREA顯著降低(P＜0.01)。三種方法組之間進(jìn)行單因素方差分析比較，埋塊組ALT、AST顯著低于另兩個(gè)荷瘤組(P＜0.05；P＜0.01)，BUN、CREA高于另兩組但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。5周后，三組荷瘤小鼠ALT、AST均高于正常對(duì)照組，BUN、CREA顯著低于正常小鼠(P＜0.05；P＜0.01)。

圖3 荷瘤小鼠和正常小鼠血液生化指標(biāo)的比較。Fig.3 Blood biochemistry of the tumor-bearing mice and normal mice.注：*P＜0.05；＊＊P＜0.01與正常對(duì)照組比；△P＜0.05與勻漿液組比；▲P＜0.05；▲▲P＜0.01與細(xì)胞培養(yǎng)組比；#P＜0.05；##P＜0.01與埋塊組比。Note：*P＜0.05；＊＊P＜0.01，vs.the control group；△P＜0.05，vs.the homogenate group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，vs.the cultured cell group；#P＜0.05，##P＜0.01，vs.the tissue transplantation group.

2.4 血液中白細(xì)胞分類的變化

從表1可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，勻漿液組和細(xì)胞培養(yǎng)組的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT%、PLT均呈現(xiàn)顯著性升高(P＜0.05；P＜0.01)；埋塊組荷瘤小鼠WBC、PLT呈升高趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。三種方法組荷瘤小鼠血液中 LYM%、MN%、HGB則呈降低趨勢(shì)，其中勻漿液組和細(xì)胞培養(yǎng)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05；P＜0.01)。三種方法組間進(jìn)行單因素方差分析比較，勻漿液組和細(xì)胞培養(yǎng)組差異未見(jiàn)顯著性，埋塊組除PLT與細(xì)胞培養(yǎng)組差異未見(jiàn)顯著性外，其余指標(biāo)與其他兩組差異均呈現(xiàn)顯著性(P＜0.05；P＜0.01)。

2.5 非特異性免疫功能

2.5.1 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性：結(jié)果顯示，接種2周時(shí)，裸鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)均以勻漿液組＞埋塊組＞細(xì)胞培養(yǎng)組＞正常對(duì)照組，勻漿液組與對(duì)照組、細(xì)胞培養(yǎng)組比較差異均有顯著性(P＜0.05；P＜0.01)。隨著裸鼠周齡增長(zhǎng)，其免疫功能有所恢復(fù)，接種5周后，正常組裸鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性升高，三個(gè)荷瘤組吞噬百分率和吞噬指數(shù)均顯著低于正常組(P＜0.05；P＜0.01)，以埋塊組＜細(xì)胞培養(yǎng)組＜勻漿液組 ＜正常對(duì)照組，勻漿液組與另外兩個(gè)荷瘤組差異有顯著性(P＜0.05；P＜0.01)(表2)。

表1 三種方法荷瘤小鼠和正常小鼠血液中白細(xì)胞分類的比較(n=10，±s)Tab.1 Leukocyte differential count of the tumor-bearing mice in the mice of the three tumor groups and normal group(n=10，±s)

表1 三種方法荷瘤小鼠和正常小鼠血液中白細(xì)胞分類的比較(n=10，±s)Tab.1 Leukocyte differential count of the tumor-bearing mice in the mice of the three tumor groups and normal group(n=10，±s)

注：*P＜0.05，＊＊P＜0.0，與正常對(duì)照組比；▲P＜0.05；▲▲P＜0.01，與埋塊組比；Note：*P＜0.05，＊＊P＜0.01，vs.the control group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，vs.the tissue transplantation group.

組別Groups WBC(×103/) NEUT(%) LYM(%) MN(%) HGB(g/L)PLT正常對(duì)照組Normal control 2.8±1.0 57.3±8.9 33.3±8.8 1.6±0.5 163.2±6.4 1200.0±120.5勻漿液組 Homogenate group 15.6±6.2＊＊▲▲ 79.2±2.7＊＊▲▲ 11.1±1.5＊＊▲▲ 0.7±0.2＊▲ 126.8±8.2＊＊▲▲ 1910.4±281.8＊＊▲細(xì)胞培養(yǎng)組 Cell group 11.9±9.4＊▲ 75.1±13.1＊▲▲ 17.0±9.1＊＊▲▲ 0.7±0.3＊▲ 137.2±8.7＊＊▲▲ 1739.3±439.7*埋塊組Tissue transplantation group 5.0±2.7 55.3±12.8 32.9±11.5 1.3±0.9 154.0±11.4 1385.2±414.3

表2 三種方法荷瘤小鼠和正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性的比較(n=5，±s)Tab.2 Comparison of the phagocytosis activity index of the tumor-bearing mice in the three groups and normal mice(n=5，±s)

表2 三種方法荷瘤小鼠和正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性的比較(n=5，±s)Tab.2 Comparison of the phagocytosis activity index of the tumor-bearing mice in the three groups and normal mice(n=5，±s)

注：*P＜0.05，＊＊P＜0.01，與正常對(duì)照組比；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，與勻漿液組比。Noto：*P＜0.05，＊＊P＜0.01，vs.the control group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，vs.the homogenate group.

組別Groups 2周After 2weeks 5周After 5weeks吞噬百分率Phogocytosis(%)吞噬指數(shù)Phogocytosis index吞噬百分率Phogocytosis(%)吞噬指數(shù)Phogocytosis index正常對(duì)照組Normal control 20.90±5.26 0.34±0.11 48.00±9.67 0.96±0.27勻漿液組Homogenate group 31.10±9.46* 0.56±0.21* 39.50±7.14* 0.76±0.26*細(xì)胞培養(yǎng)組Cell group 22.42±1.60▲▲ 0.34±0.04▲▲ 31.83±4.64＊＊▲▲ 0.65±0.10＊＊▲埋塊組Tissue transplantation group 25.63±10.68 0.48±0.26 32.80±5.87＊＊▲▲ 0.59±0.12＊＊▲▲

2.5.2 NK活性：結(jié)果顯示，接種2周時(shí)，未接種裸鼠NK活性較低，荷瘤裸鼠NK活性顯著高于正常小鼠(P＜0.05；P＜0.01)，勻漿液組NK活性最高，與細(xì)胞培養(yǎng)組差異有顯著性(P＜0.01)。5周后隨著裸鼠周齡增長(zhǎng)，其NK活性逐漸增強(qiáng)，正常組裸鼠NK活性升高幅度最大，三組荷瘤裸鼠NK活性低于正常組，其中細(xì)胞培養(yǎng)組和埋塊組差異具有顯著性(P＜0.05；P＜0.01)；埋塊組顯著低于另外兩組荷瘤組(P＜0.05；P＜0.01)(表3)。

表3 三種方法荷瘤小鼠和正常小鼠NK活性的比較(n=5，±s，%)Tab.3 Comparison of the NK cell activity of tumor-bearing m ice in the three groups and normal mice(n=5，±s，%)

表3 三種方法荷瘤小鼠和正常小鼠NK活性的比較(n=5，±s，%)Tab.3 Comparison of the NK cell activity of tumor-bearing m ice in the three groups and normal mice(n=5，±s，%)

注：*P＜0.05，＊＊P＜0.01，與正常對(duì)照組比；△P＜0.05，與勻漿液組比；▲P＜0.05；▲▲P＜0.01，與埋塊組比。Note：*P＜0.05，＊＊P＜0.01，vs.the control group；△P＜0.05，vs.the homogenate group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，vs.the tissue group.

組別Groups 2周A fter 2weeks 5周After 5weeks正常對(duì)照組Normal control 23.31±7.42 85.89±17.10勻漿液組 Homogenate group 52.64±10.30＊＊ 73.60±8.39▲▲細(xì)胞培養(yǎng)組 Cell group 38.11±7.68＊△ 65.56±22.21＊▲埋塊組Tissue transplantation group 50.32±17.67＊＊ 52.26±22.45＊＊

3 討論

人體腫瘤的裸鼠異種移植模型對(duì)抗癌藥的反應(yīng)與臨床反映基本平行，比體外敏感性實(shí)驗(yàn)有更高的可靠性，是抗腫瘤藥物臨床前藥效學(xué)的主要評(píng)價(jià)依據(jù)。潛伏期短、移植瘤成活率高、生長(zhǎng)均勻、組織學(xué)和原始腫瘤基本符合、染色體核型和生化指標(biāo)穩(wěn)定的移植瘤模型在腫瘤研究和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域都至關(guān)重要［8］。故本文先以三種皮下移植方法成功建立了人大細(xì)胞肺癌移植瘤，HE染色結(jié)果顯示移植瘤組織形態(tài)呈現(xiàn)典型的上皮癌細(xì)胞特征，與大細(xì)胞肺癌臨床病理檢查結(jié)果相符。細(xì)胞培養(yǎng)和勻漿液移植法由于接種細(xì)胞數(shù)可控，腫瘤大小均勻，生長(zhǎng)曲線基本符合 Gompertzian曲線，由于接種量較大，接種后腫瘤組織在短期內(nèi)呈膨脹性生長(zhǎng)，平臺(tái)期較長(zhǎng)，多處于 Gompertzian曲線上段，腫瘤的生長(zhǎng)指數(shù)(grow th fraction，GF)值較低，較好地模擬了多數(shù)臨床可檢腫瘤的生長(zhǎng)特征，但是已知抗腫瘤藥的一大作用機(jī)制是干擾DNA合成及其功能，因此，GF值低、增殖較慢的腫瘤對(duì)這些藥物就不敏感，不適于抗腫瘤藥物的篩選［9］。尤其是目前廣泛應(yīng)用于抗腫瘤研究的中草藥，具有起效慢，療效緩，療程長(zhǎng)的特點(diǎn)。本文采用的組織塊移植法通過(guò)將組織塊體積由常用的1～2mm3縮小為0.5mm3，使腫瘤生長(zhǎng)Gompertzian曲線多處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，腫瘤的分裂指數(shù)升高，可以增加其對(duì)藥物的敏感，使其更有利于抗腫瘤中藥的藥效學(xué)研究。該方法由于接種的組織塊無(wú)法保證均一，所以對(duì)成瘤率和均勻性造成了影響。

當(dāng)前大量的研究集中于人腫瘤裸鼠移植瘤模型的構(gòu)建以及瘤組織生物學(xué)特性的研究，對(duì)荷瘤機(jī)體生理狀態(tài)和免疫功能的研究甚少，缺乏對(duì)腫瘤的整體認(rèn)識(shí)。血液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類以及生化指標(biāo)檢測(cè)是目前臨床上判斷人體健康狀況或疾病的最常用的診療手段之一。在許多異常情況下(包括炎癥、損傷等)都會(huì)出現(xiàn)血液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類以及生化指標(biāo)的改變。我們的研究發(fā)現(xiàn)，荷瘤裸鼠的ALT、AST顯著高于正常裸鼠，說(shuō)明伴隨著腫瘤生長(zhǎng)，荷瘤裸鼠的肝功能下降，肝損傷明顯，剖檢指標(biāo)升高最明顯的勻漿液組裸鼠發(fā)現(xiàn)肝臟有轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。提示大細(xì)胞肺癌在生長(zhǎng)后期發(fā)生了肝轉(zhuǎn)移［10］。荷瘤裸鼠BUN、CREA顯著降低，這與徐彩菊等［11］研究結(jié)果一致。臨床上BUN降低與肝功能衰竭有關(guān)，CREA的降低主要受貧血、營(yíng)養(yǎng)狀況的影響。本實(shí)驗(yàn)的3種方法中，埋塊組的BUN顯著高于另兩個(gè)荷瘤組，推測(cè)與其肝轉(zhuǎn)移程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其他兩組有關(guān)。此外，接種2周后，荷瘤裸鼠的Glu顯著低于正常裸鼠，勻漿液組的Glu降得最低，這可能與腫瘤在此階段膨脹性生長(zhǎng)過(guò)度利用葡萄糖有關(guān)［12］。白細(xì)胞分類檢測(cè)結(jié)果顯示，荷瘤小鼠血液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高，說(shuō)明腫瘤與炎癥存在著密不可分的聯(lián)系；血小板數(shù)升高，血紅蛋白含量下降，提示惡性腫瘤的血液高凝和貧血狀態(tài)；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的百分比下降提示腫瘤患者細(xì)胞免疫功能低下，與張奉梅等［13］研究結(jié)果一致。

眾所周知，裸鼠由于無(wú)胸腺，T細(xì)胞免疫功能缺陷，使得動(dòng)物模型不能確切反映人類免疫系統(tǒng)的特點(diǎn)，嚴(yán)重阻礙了腫瘤免疫學(xué)的發(fā)展。事實(shí)上，成年裸鼠(6～8周齡)較普通鼠有較高水平的天然殺傷(NK)細(xì)胞活性，但幼鼠(3～4周齡)的NK細(xì)胞活性低下［14］。NK細(xì)胞是非特異性細(xì)胞免疫系統(tǒng)的主要成員，其細(xì)胞毒作用可以通過(guò)Fas/FasL途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)。腫瘤發(fā)展與NK細(xì)胞水平下降及FasL表達(dá)水平降低有關(guān)。同時(shí)NK細(xì)胞與T細(xì)胞存在高度的同源性，能間接反應(yīng)特異性細(xì)胞免疫系統(tǒng)［15］。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，荷瘤裸鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性及NK細(xì)胞活性均表現(xiàn)為先升高，后降低。這與“腫瘤免疫監(jiān)視理論”一致［16］。該理論認(rèn)為，一旦腫瘤發(fā)生即產(chǎn)生針對(duì)外源性組織相容性復(fù)合體(MHC)抗原的免疫應(yīng)答。免疫系統(tǒng)能持續(xù)地監(jiān)視體內(nèi)存在的異常細(xì)胞，識(shí)別并摧毀他們。表現(xiàn)為腫瘤發(fā)生的早期機(jī)體免疫功能升高，隨著腫瘤的生長(zhǎng)，免疫功能下降。勻漿液組在接種的初期非特異性免疫功能增強(qiáng)明顯，可能與其接種的死細(xì)胞比例高產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)采用的三種方法，細(xì)胞培養(yǎng)和勻漿液移植法接種數(shù)量可控，腫瘤生長(zhǎng)均勻，適合建立不同實(shí)驗(yàn)需求的移植瘤模型。但是勻漿液移植法由于在制備勻漿懸液的過(guò)程中死細(xì)胞較多，接種后產(chǎn)生的炎癥應(yīng)答較強(qiáng)，動(dòng)物狀態(tài)差，容易繼發(fā)感染，不推薦使用。組織塊移植法在改良后非常適于建立中藥抗腫瘤篩選的動(dòng)物模型。裸鼠的生理生化狀態(tài)和免疫功能與腫瘤的生長(zhǎng)有密切的關(guān)系。提示從整體角度出發(fā)，選擇能更好地模擬臨床腫瘤的發(fā)生發(fā)展的動(dòng)物模型對(duì)開(kāi)展抗腫瘤藥作用機(jī)制的研究具有重要意義。

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