中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊對(duì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松大鼠骨密度和骨形態(tài)計(jì)量的研究

胡伶平 洪曼杰 胡敏華 孫平

中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊對(duì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松大鼠骨密度和骨形態(tài)計(jì)量的研究

胡伶平 洪曼杰 胡敏華 孫平

目的探討中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨丟失的影響。方法3月齡SPF級(jí)雄性SD大鼠30只，平均分為3個(gè)組，激素組（Met）：皮下注射甲強(qiáng)龍(Met)5mg/kg/d，每周5次；中藥組(CH)：在Met組基礎(chǔ)上給予中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊(150mg/kg/d)灌胃，實(shí)驗(yàn)期12周，正常對(duì)照組給予一定量的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)期同樣為12周，測(cè)定大鼠的右側(cè)股骨時(shí)可用DXA進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行腰椎行骨密度(BMD)測(cè)定，而后對(duì)其進(jìn)行分析。結(jié)果Met組腰椎和股骨BMD顯著低于Nrm組；CH組腰椎和股骨BMD顯著高于Met組。Met組Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs顯著低于Nrm組，Tb.Sp、ES/BS顯著高于Nrm組；中藥組Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs顯著高于Met組，Tb.Sp，ES/BS顯著低于Met組。結(jié)論中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊具有促進(jìn)骨形成的作用，并能提高骨質(zhì)疏松的骨密度，具有預(yù)防骨質(zhì)疏松等特點(diǎn)，并在治療上也能起到一定的作用，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

骨質(zhì)疏松；糖皮質(zhì)激素；骨密度；骨形態(tài)計(jì)量學(xué)

糖皮質(zhì)激素是一種很好的抗炎藥物，并且也具有抗休克等作用，所以糖皮質(zhì)藥物在器官移植，腫瘤治療上比較常見[1]。有文獻(xiàn)指出糖皮質(zhì)藥物在對(duì)患者使用后，容易導(dǎo)致患者的骨質(zhì)疏松[2-5]。在祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，骨質(zhì)疏松屬于“骨萎”、“骨痹”、“骨枯”等范圍，腎為先天之本，藏精主骨生髓，骨髓的生長(zhǎng)發(fā)育，腎精充足則骨骼強(qiáng)健有力；反之則骨骼失養(yǎng)[6]。護(hù)骨膠囊，是由制何首烏、淫羊藿、熟地黃等多味中藥加工而成的復(fù)方膠囊制劑，本方根據(jù)中醫(yī)“腎主骨生髓”的理論，采用補(bǔ)肝腎，益精血，調(diào)理陰陽(yáng)的治則，輔以養(yǎng)血活血，祛風(fēng)除濕，強(qiáng)筋壯骨之法，兼止痛鎮(zhèn)靜組成的綜合作用的方劑，用于治療中醫(yī)辨證屬于腎精虧虛、筋骨失養(yǎng)證的骨質(zhì)疏松癥[7]。用雌性大鼠去勢(shì)建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型，探討護(hù)骨膠囊對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用，為護(hù)骨膠囊能得到進(jìn)一步的應(yīng)用提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 模型與分組實(shí)驗(yàn) 模型采用3個(gè)月左右的雄性SD大鼠30只，大鼠的體質(zhì)量為(206±19)g，對(duì)這30只大鼠進(jìn)行適應(yīng)喂養(yǎng)7d左右，而后將這30只大鼠隨機(jī)分激素組（Met）：注射甲強(qiáng)龍(Met)5mg/kg/d在大鼠的皮下，且每周對(duì)其注射5次；中藥組(CH)：在Met組基礎(chǔ)上給予中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊(150mg/kg/d)灌胃，實(shí)驗(yàn)期12周，正常對(duì)照組給予一定量的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)期同樣為12周。30只大鼠都在籠子中進(jìn)行了喂養(yǎng)，讓它們自由進(jìn)食，大鼠喝的水用平常的純凈水，實(shí)驗(yàn)期為12周。實(shí)驗(yàn)期過后采用氯胺酮對(duì)各組的大鼠進(jìn)行麻醉，而后用放血的方式將其處死，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要留取第5腰椎(L5)、右側(cè)股骨和脛骨。

1.2 股骨和L5骨密度測(cè)定 測(cè)定的儀器采用QDR4500A型雙能X線骨密度測(cè)定儀，而后將大鼠的第5腰椎與股骨放在儀器上，然后利用相關(guān)軟件對(duì)其進(jìn)行分析。QDR4500A型雙能X線骨密度測(cè)定儀的掃描速度為10mm/s，掃描間距0.5mm×0.5mm。

1.3 脛骨骨形態(tài)計(jì)量學(xué)分析 30只大鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前在其皮下注射鹽酸四環(huán)素和Calcein，可在13～14d進(jìn)行注射。取右側(cè)脛骨用低速鋸(Buehler，USA)將其切開暴露骨髓腔，將脛骨上段置于磷酸-福爾馬林緩沖液中，用乙醇對(duì)骨染色脫水，包埋后用切片機(jī)對(duì)包埋塊實(shí)施切片，切成4～9μm大小。用Masson-Goldner Trichrome對(duì)較薄的切片進(jìn)行染色，透明后封片，薄片刻用于測(cè)量破骨細(xì)胞及觀察骨小梁，較厚的切片不進(jìn)行染色，直接封片觀察，厚片用于骨形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量。采用圖像數(shù)字化分析儀對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)算參數(shù)之含義和計(jì)算公式見文獻(xiàn)[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)處理采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Ρ<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腰椎和股骨骨密度的變化 Met組L5和股骨BMD顯著低于Nrm組(P<0.01)；CH組L5和股骨BMD顯著高于Met組(P<0.01)，見表1。

表1 各組大鼠骨密度結(jié)果(g/cm2)(±s，n=8)

表1 各組大鼠骨密度結(jié)果(g/cm2)(±s，n=8)

注：aP<0.05,bP< 0.01vs Nrm,cP<0.01vs Met。

分組 L5股骨Nrm組 0.221±0.005 0.241±0.013 Met組 0.205±0.004b 0.213±0.008b CH組 0.212±0.005ac 0.229±0.007bc

2.2 脛骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)的變化 Met組的靜態(tài)學(xué)指標(biāo)均顯著降低(P<0.01)，CH組各指標(biāo)與Met組相比較顯著增加(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠脛骨干骺端(松質(zhì)骨)靜態(tài)指標(biāo)結(jié)果(±s,n=8)

表2 各組大鼠脛骨干骺端(松質(zhì)骨)靜態(tài)指標(biāo)結(jié)果(±s,n=8)

注：aP<0.01vs Nrm,bP<0.05,cP<0.01vs Met。

分組 %Tb.Ar(%) Tb.Th(μm) Tb.Sp(μm) Tb.N(#/mm)Nrm組 32.89±10.90 50.04±10.10 177.01±30.75 4.03±0.51 Met組 17.59±9.11a 36.22±8.37a 522.80±147.22a 2.16±0.93a CH組 25.15±8.74b 42.02±11.62b 400.42±70.19ac 3.12±0.83b

Met組動(dòng)態(tài)學(xué)指標(biāo)MS/BS、MAR和BFRs較Nrm組均顯著降低(P<0.001)，CH組各指標(biāo)較Met組顯著增加(P<0.05)；動(dòng)態(tài)學(xué)指標(biāo)ES/BS，Met組較Nrm組顯著增加(P<0.001)，CH組較Met組顯著降低(P<0.01)，見表3。

表3 各組大鼠脛骨干骺端(松質(zhì)骨)動(dòng)態(tài)指標(biāo)結(jié)果(±s，n=8)

表3 各組大鼠脛骨干骺端(松質(zhì)骨)動(dòng)態(tài)指標(biāo)結(jié)果(±s，n=8)

注：aP<0.05,bP<0.01vs Nrm,cP<0.05,dP<0.01vs Met。

分組 MS/BS(%) MAR(μm/d)BFRs(μm/d×100) ES/BS(%)Nrm組 10.89±1.78 1.55±0.20 11.98±3.05 6.04±1.31 Met組 3.70±0.78b 0.83±0.16b 2.98±0.98b 10.4±2.84b CH組 5.47±1.13bd 1.18±0.18bd 5.18±1.92ac 7.22±1.56d

3 討論

糖皮質(zhì)激素在哮喘及風(fēng)濕免疫性疾病中比較常用，有文獻(xiàn)指出長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素很容易導(dǎo)致人體的骨量丟失，引發(fā)繼發(fā)性骨質(zhì)疏松，所以給臨床使用造成了很大的障礙。有文獻(xiàn)報(bào)道[8]經(jīng)常使用糖皮質(zhì)激素的人群，有一半以上會(huì)出現(xiàn)骨量丟失，并且會(huì)因?yàn)殚L(zhǎng)期使用而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，且很容易引起骨折。有些病人在使用糖皮質(zhì)激素1～6月時(shí)，骨量的丟失是最快的，如果長(zhǎng)期使用會(huì)給患者的治療帶來(lái)很大的影響。經(jīng)調(diào)查，經(jīng)常使用糖皮質(zhì)激素人群的骨折率是正常人的1～3倍，因此如何有效地預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松已成為了目前亟待解決的問題[9]。

在我國(guó)的醫(yī)學(xué)界認(rèn)為，補(bǔ)腎益精類中藥方劑有增加成骨細(xì)胞活性、抑制破骨細(xì)胞活動(dòng)、防治異常骨丟失、調(diào)節(jié)骨代謝的作用[10]。護(hù)骨膠囊，是由制何首烏、淫羊藿、熟地黃、龜甲、巴戟天、杜仲、續(xù)斷、骨碎補(bǔ)、當(dāng)歸等多味中藥加工而成的復(fù)方膠囊制劑。本方根據(jù)中醫(yī)“腎主骨生髓”的理論，采用補(bǔ)肝腎，益精血，調(diào)理陰陽(yáng)的治則，輔以養(yǎng)血活血，祛風(fēng)除濕，強(qiáng)筋壯骨之法，兼止痛鎮(zhèn)靜組成的綜合作用的方劑，用于治療中醫(yī)辨證屬于腎精虧虛、筋骨失養(yǎng)證的骨質(zhì)疏松癥。在前期對(duì)護(hù)骨膠囊治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的臨床研究中，觀察到護(hù)骨膠囊通過激活成骨細(xì)胞的功能、促進(jìn)新骨的形成、增加骨密度、明顯改善骨痛等主要癥狀來(lái)治療骨質(zhì)疏松癥[11-12]。

對(duì)骨質(zhì)疏松患者進(jìn)行診斷時(shí)，可測(cè)定患者的骨密度，同時(shí)對(duì)骨密度的測(cè)定還能起到預(yù)防骨折發(fā)生的特點(diǎn)，同時(shí)也可作為對(duì)骨質(zhì)疏松患者的療效評(píng)價(jià)。本研究結(jié)果表明，中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊對(duì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松大鼠的股骨和腰椎BMD有顯著提高作用，能夠有效阻止激素誘導(dǎo)大鼠的骨量丟失。骨組織計(jì)量學(xué)能有效地研究藥物在患者體內(nèi)抗骨質(zhì)疏松的效果，還能研究骨組織的形態(tài)及骨組織的結(jié)構(gòu)。本研究表明，Met組動(dòng)態(tài)學(xué)指標(biāo)MS/BS、MAR和BFRs較Nrm組均顯著降低(P<0.001)，CH組各指標(biāo)較Met組顯著增加(P<0.05)，說明中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊對(duì)糖皮質(zhì)激素引發(fā)的骨質(zhì)疏松具有很好的預(yù)防作用，且能很好地改善骨顯微結(jié)構(gòu)。在骨吸收方面，中藥組能拮抗GC誘導(dǎo)破骨細(xì)胞骨吸收增強(qiáng)的作用，抑制骨吸收，維持骨量。

糖皮質(zhì)激素藥物在臨床上應(yīng)用很多，而長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素會(huì)造成骨質(zhì)疏松，為繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的首要病因，且目前治療手段有限。本研究首次報(bào)道了中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊對(duì)激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松大鼠有較好的防治作用，為其進(jìn)一步的臨床研究提供了科學(xué)依據(jù)。

[1] 許榮海，黃美虹，許幼仕.糖皮質(zhì)激素的合理應(yīng)用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010,16（10）：33-34.

[2] Gennari L,Bilezikian JP.Glucocorticoid-induced osteoporosis:hope on the HORIZON[J].Lancet,2009,373（9671）:1225-1226.

[3] Van Brussel MS,Bultink IE,Lems WF.Prevention of glucocorticoidinduced osteoporosis[J].Expert Opin Pharmacother,2009,10(6):997-1005.

[4] Silverman SL,Lane NE.Glucocorticoid-induced osteoporosis[J].Curr Osteoporos Rep,2009,7(1):23-26.

[5] Caplan L,Saag KG.Glucocorticoids and the risk of osteoporosis[J].Expert Opin Drug Saf,2009,8(1):33-47.

[6] Parfitt AM,Drezner MK,Glorieux FH,et al.Bone histomorphometry:standardization of nomenclature,symbols,and units.Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee[J].J Bone Miner Res,1987,2(6):595-610.

[7] Vestergaard P,Rejnmark L,Mosekilde L.Fraeture risk assoeiated with systemic and topical cortieosteroids[J].J Intern Med,2005,257(4):374-384.

[8] Kaji H,Yamauchi M,Chihara K,et al.The threshold of bone mineral density for Vertebral fracture in female patients with glucoeortieoid-induced osteoporosis[J].Endocr J,2006,53(1):27-34.

[9] Rehman Q,Lane NE.Effect of glucocorticoids on bone density[J].Med Pediatr On Col,2003,41(3):212-216.

[10] 丁桂芝,劉忠厚,周勇.中西醫(yī)結(jié)合防治骨質(zhì)疏松癥的基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展[J].中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志,1997,3(2):81.

[11] 洪曼杰,盧麗,王曉東,等.中藥復(fù)方護(hù)骨膠囊治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的臨床研究[J].中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志,2008,14(12):891-895.

[12] 王曉東,鄧偉民,洪曼杰,等.護(hù)骨膠囊治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松骨折的臨床研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2011,27(9):1662-1664.

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.22.014

510080 廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院骨科 （胡伶平 洪曼杰孫平） 保健科（胡敏華）