鳳尾草化學(xué)成分研究Δ

舒積成，潘景行，張銳，任曉靜，劉建群（江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌330004）

鳳尾草為鳳尾蕨科植物鳳尾草Pteris multifida Poir.的全草或根，又名井欄邊草，廣泛分布于我國(guó)各省區(qū)。它性寒，味淡、微苦，歸大腸、肝、心經(jīng)；具有清熱利濕、消腫解毒、涼血止血之功效，用于治療肝炎、菌痢、淋濁、便血、癰腫瘡毒及濕疹等[1]。鳳尾草所含的化學(xué)成分主要有黃酮、倍半萜、二萜、酚酸和苯丙素等化合物[2～4]?，F(xiàn)代藥理研究表明，鳳尾草具有很好的抗氧化、抗誘變、抗菌及抗腫瘤作用[5～7]。本課題組發(fā)現(xiàn)鳳尾草對(duì)雷公藤甲素（治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎最有效中藥成分之一）具有減毒作用[8]。為尋找鳳尾草的活性成分，筆者對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離并鑒定出8個(gè)化合物，可為其活性的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Boetius熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度計(jì)未校正）（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；AV-500核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司）；1100 LC-MSD-Trap液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）。

Sephadex LH-20（瑞典法瑪西亞公司）；硅膠（青島海洋化工廠）；甲醇、正丁醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、石油醚均為分析純。鳳尾草采自江西南昌市，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院藥用植物研究室賴學(xué)文教授鑒定為鳳尾草P.multifida Poir.的全草或根，憑證標(biāo)本（NO.070901）保存于江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

取干燥鳳尾草15 kg，粉碎至約60目，用70%工業(yè)乙醇在室溫下浸泡12 h后回流提取3次，每次2 h，濾過(guò)并合并濾液，減壓回收乙醇得棕色黏狀提取物約1550 g，加適量蒸餾水捏溶后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收溶劑后得石油醚部位浸膏110 g、乙酸乙酯部位浸膏130 g、正丁醇部位浸膏310 g，水部位蒸干重約950 g。

取乙酸乙酯部位浸膏55 g，經(jīng)硅膠（200～300目，1.5 kg）柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脫，每份收集1000 mL，薄層色譜（TLC）檢測(cè)合并的流出液中成分，得12個(gè)組分（Fr.1～Fr.12）。其中，F(xiàn)r.2組分濃縮后析出白色針狀晶體化合物（7）80 mg。Fr.3組分濃縮后析出白色粉末，經(jīng)二氯甲烷-甲醇（1∶1）混合溶劑重結(jié)晶得化合物（8）26 mg；母液經(jīng)反復(fù)凝膠柱色譜分離（洗脫劑為二氯甲烷-甲醇（1∶1）），得化合物（6）7 mg。Fr.5組分經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（25∶1、20∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脫，其中二氯甲烷-甲醇（20∶1）洗脫流分26個(gè)（Fr.5.1～Fr.5.26），合并Fr.5.6～Fr.5.10，再反復(fù)經(jīng)凝膠柱色譜分離（洗脫劑為二氯甲烷-甲醇（1∶1）），得化合物（4）28 mg和化合物（5）9 mg。Fr.10組分經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（10∶1、8∶1、4∶1、1∶1）梯度洗脫，其中二氯甲烷-甲醇（4∶1）洗脫液中所含成分32個(gè)（Fr.10.1～Fr.10.32），合并Fr.10.4～Fr.10.6，再反復(fù)經(jīng)凝膠柱色譜分離（洗脫劑為甲醇），得化合物（3）12 mg；合并Fr.10.11～Fr.10.14，再經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（5∶1、3∶1、1∶1）梯度洗脫，將二氯甲烷-甲醇（3∶1）洗脫液合并后反復(fù)經(jīng)凝膠柱色譜分離（洗脫劑為甲醇），得化合物（1）9 mg；合并Fr.10.25～Fr.10.28，再反復(fù)經(jīng)凝膠柱色譜分離（洗脫劑為甲醇），得化合物（2）7 mg。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z：461[M-H]－。1H-NMR（500 MHz，MeOH-d4）δ：6.68～6.71（2 H，m，H-2，5），6.55（1 H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H-6），5.17（1 H，br.s，H-rha-1），4.31（1 H，d，J＝8.0Hz，H-glc-1），3.28～4.05（12 H，m，rha-2，3，4，5與H-8和glc-2，3，4，5，6），2.78（2 H，m，H-7），1.26（3 H，d，J＝6.5Hz，H-rha-6）。13C-NMR（125MHz，MeOH-d4）δ：Aglyco-ne：131.5（C-1），117.1（C-2），146.0（C-3），144.5（C-4），116.3（C-5），121.2（C-6），36.4（C-7），72.2（C-8）；glucose：104.1（C-1），75.5（C-2），84.4（C-3），70.0（C-4），77.7（C-5），62.6（C-6）；rhamnose：102.6（C-1），72.1（C-2），72.0（C-3），73.9（C-4），70.1（C-5），17.8（C-6）。對(duì)照文獻(xiàn)[9，10]，確認(rèn)為去咖啡酰基洋丁香苷（Decaffeoylactecoside）。

化合物 2：白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z：511[M+Na]+。1H-NMR（500MHz，MeOH-d4）δ：7.59（1 H，d，J＝16.0Hz，H-7′），7.07（1 H，br.s，H-2′），6.96（1 H，d，J＝8.0 Hz，H-6′），6.78（1 H，d，J＝8.0Hz，H-5′），6.25（1 H，d，J＝16.0Hz，H-8′），5.14（1 H，br.s，H-rha-1），4.85（1 H，overlapped），3.28～4.08（10 H，m，rha-2，3，4，5和 glc-2，3，4，5，6），1.09（3 H，d，J＝6.5Hz，H-rha-6）。13C-NMR（125MHz，MeOH-d4）δ：Caffeoyl：127.68/127.65（C-1），115.27（C-2），147.96/147.85（C-3），149.67/149.63（C-4），116.52（C-5），123.17（C-6），146.72（C-7），115.85/114.72（C-8），168.32/168.42（C-9）；glucose：98.09/93.98（C-1），74.66/71.18（C-2），81.69/79.16（C-3），70.80/70.70（C-4），77.32/76.04（C-5），62.45/62.33（C-6）；rhamnose：103.00/102.93（C-1），71.40/71.00（C-2），72.27/72.20（C-3），73.80/73.76（C-4），70.36/70.31（C-5），18.40（C-6）。 對(duì) 照 文 獻(xiàn)[11]，確 認(rèn) 為 肉 叢 蓉 苷 F（Cistanoside F）。

化合物3：白色粉末（甲醇），F(xiàn)eCl3及α-萘酚試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)；硫酸-乙醇反應(yīng)顯橙色。ESI-MS m/z：625[M+H]+。1H-NMR（500MHz，MeOH-d4）：δH：7.60（1 H，d，J＝15.5Hz，H-7′），7.06（1 H，d，J＝2.0Hz，H-2′），6.96（1 H，dd，J＝2.0，8.5 Hz，H-6′），6.77（1 H，d，J＝8.5Hz，H-5′），6.71（1 H，d，J＝2.0 Hz，H-2），6.69（1 H，d，J＝8.0Hz，H-5），6.56（1 H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H-6），6.27（1 H，d，J＝15.5Hz，H-8′），5.19（1 H，br.s，H-rha-1），4.38（1 H，d，J＝8.0Hz，H-glc-1），3.27～4.07（12 H，m，rha-2，3，4，5與H-8和glc-2，3，4，5，6），2.80（2 H，m，H-7），1.09（3 H，d，J＝6.5Hz，H-rha-6）。13C-NMR（125MHz，Me-OH-d4）：δC：Caffeoyl：127.8（C-1），114.9（C-2），149.9（C-3），148.2（C-4），116.7（C-5），123.4（C-6），146.3（C-7），116.5（C-8），168.4（C-9）；Aglycone：131.5（C-1），115.4（C-2），146.9（C-3），144.8（C-4），117.3（C-5），121.3（C-6），36.7（C-7），72.4（C-8）；glucose：104.4（C-1），76.3（C-2），81.7（C-3），70.5（C-4），76.3（C-5），62.5（C-6）；rhamnose：103.1（C-1），72.3（C-2），72.4（C-3），73.9（C-4），70.7（C-5），18.6（C-6）。對(duì)照文獻(xiàn)[12]，確認(rèn)為洋丁香苷（Acteoside）。

化合物4：無(wú)色針晶，mp 246～247℃。ESI-MS m/z 321[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500MHz）δH：5.01（1 H，s，H-17 a），4.96（1 H，s，H-17 b），3.94（1 H，s，H-14），3.62（1 H，m，H-2），3.61（1 H，s，H-15），0.99（3 H，s，H-20），0.88（3 H，s，H-19），0.81（3 H，s，H-18）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δC：51.0（C-1），65.5（C-2），53.7（C-3），35.8（C-4），57.6（C-5），19.7（C-6），29.3（C-7），53，9（C-8），57.6（C-9），41.6（C-10），18.8（C-11），33.6（C-12），51.9（C-13），76.7（C-14），83.3（C-15），159.5（C-16），109.4（C-17），35.0（C-18），24.4（C-19），19.7（C-20）。對(duì)照文獻(xiàn)[13]，確認(rèn)為 2 β，14 β，15 α-trihydroxy-ent-kaur-16-ene。

化合物5：無(wú)色針晶，mp 258～259℃。ESI-MS m/z 337[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500MHz）δH：5.20（1 H，s，H-17 a），5.13（1 H，s，H-17 b），3.96（1 H，s，H-14），3.72（1 H，m，H-2），1.00（3 H，s，H-20），0.85（3 H，s，H-19），0.79（3 H，s，H-18）。13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δC：51.1（C-1），65.3（C-2），53.8（C-3），35.1（C-4），57.4（C-5），19.9（C-6），29.4（C-7），51.0（C-8），56.3（C-9），41.5（C-10），19.7（C-11），40.0（C-12），81.3（C-13），79.7（C-14），82.7（C-15），161.6（C-16），110.4（C-17），35.8（C-18），24.4（C-19），19.5（C-20）。對(duì)照文獻(xiàn)[13]，確認(rèn)為2 β，13 β，14 β，15 α-tetrahydroxy-ent-kaur-16-ene。

化合物6：黃色粉末，mp 222～223℃。ESI-MS m/z 163[M+H]+。1H-NMR（CH3COCH3-d6，500MHz）δH：7.93（1 H，d，J＝9.5 Hz，H-4），7.78（1 H，d，J＝8.0 Hz，H-5），7.02（1 H，dd，J＝2.5，8.0 Hz，H-6），6.92（1 H，d，J＝2.5 Hz，H-8），6.27（1 H，d，J＝9.5 Hz，H-3）。對(duì)照文獻(xiàn)[14]，確認(rèn)為7-羥基香豆素（7-Hydroxy coumarin）。

化合物7：白色針狀結(jié)晶，mp 146～147℃。Libermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，硫酸-乙醇反應(yīng)顯紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS m/z 415[M+H]+，分子式為C29H50O。與β-谷甾醇對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，在多種溶劑系統(tǒng)中經(jīng)TLC檢查，兩者Rf值一致，且混合熔點(diǎn)不下降，確認(rèn)為β-谷甾醇（β-Sitosterol）。

化合物8：白色粉末，Libermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，硫酸-乙醇反應(yīng)顯紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS m/z 577[M+H]+，分子式為C35H60O6。與胡蘿卜苷對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，在多種溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行TLC檢查，兩者Rf值一致，確認(rèn)為胡蘿卜苷（Daucosterol）。

3 討論

本文采用色譜和光譜法，從鳳尾草中分離并鑒定出3個(gè)苯乙醇苷、2個(gè)貝殼杉烷型二萜、2個(gè)甾體及1個(gè)香豆素類化合物，其中化合物1～6為首次從該植物中分離得到，化合物1、2、3、6為首次從該屬中分離得到。本結(jié)果可為鳳尾草活性的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

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