HPLC法測定星宿菜中山柰酚的含量

付遠清，莫逢偉，廖厚知（.北海市衛(wèi)生學校附屬醫(yī)院藥劑科，廣西北海53600；.廣西匯科藥物研究所，南寧 530007）

星宿菜（Lysimachia fortunei Maxim.）為報春花科珍珠菜屬植物，又名紅根草、紅絲毛根、假辣蓼、紅氣根、黃鰍草、紅燈芯、紅筋仔、麻雀利、珍珠菜、定經(jīng)草、矮桃草、紅桿草等，以全株入藥，具有清熱利濕、涼血活血、解毒消腫之功，主治黃疸、瀉痢、目赤、吐血、血淋、白帶、崩漏、痛經(jīng)、閉經(jīng)、咽喉腫痛、癰瘡腫毒、流火、瘰疬、跌打、毒蛇咬傷等證[1]。星宿菜的主要化學成分為三萜、苯醌類色素和黃酮類等化合物[2～4]，山柰酚為其有效成分之一。因此，本試驗建立了以高效液相色譜（HPLC）法測定星宿菜中山柰酚含量的方法，旨在為其質(zhì)量標準的制定提供試驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC-2010 A HPLC儀、SPD-M10 Avp紫外檢測器、UV-2450分光光度計（日本島津制作所）；AB265-S分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

山柰酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：11086-200805）；乙腈為色譜純，鹽酸、磷酸均為分析純。星宿菜藥材由廣西匯科藥物研究所廖厚知工程師采集并鑒定為星宿菜L.fortunei Maxim.，以采集地點編號分別為廣西防城港（X1）、桂林（X2）、百色（X3）、欽州（X4）、柳州（X5）、河池（X6）、南寧（X7），標本保存于廣西匯科藥物研究所樣品留樣室。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：島津VP-ODS柱（150mm×4.6mm，5μm），保護柱：YWG C18（10 mm×4.6 mm，10μm）；流動相：乙腈-0.2%磷酸溶液（42∶58）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：室溫；檢測波長：370 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取山柰酚對照品適量，加甲醇適量制成每1 mL含30μg的對照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液 取本品粉末（過三號篩）1 g，精密稱定，置100mL圓底燒瓶中，加甲醇-2.5mol·L－1鹽酸溶液（4∶1）40 mL，水浴加熱回流60 min，放冷，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，殘渣用少量甲醇洗滌，洗液并入量瓶中，加甲醇定容，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各20μL，注入HPLC儀，按上述色譜條件測定。結(jié)果，供試品中山柰酚的理論板數(shù)為4089，分離度為5.2，與其他成分分離良好。色譜見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取山柰酚對照品10.31 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1、2、3、4、5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件分別進樣20 μL，測定。以峰面積積分值（Y）對山柰酚進樣量（X，μg）進行線性回歸，得回歸方程為Y＝975743 X－10450（r＝0.9998，n＝5）。結(jié)果表明，山柰酚進樣量在0.2062～1.0310 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取山柰酚對照品溶液（30.63 μg·mL－1）適量，按上述色譜條件依法操作，重復進樣6次，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.42%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一批供試品（X1）溶液20μL，于2、4、6、8、24、48、72 h進樣分析，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.82%（n＝7），表明供試品溶液在制備后72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品（X1）適量，共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進樣測定。結(jié)果，樣品平均含量為1.282 mg·g－1，RSD＝1.74%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知準確含量（1.282mg·g－1）的樣品（X1）6份，每份0.5 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入1 mL山柰酚對照品溶液（0.632 mg·mL－1），揮去甲醇，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定樣品含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

取7批星宿菜樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進樣測定，計算樣品中山奈酚的含量。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地星宿菜中山柰酚的含量在0.109%～0.207%之間，平均含量為0.141%，詳見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果Tab 2 Results of content determination of samples

3 討論

星宿菜作為廣西民間常用藥材，其相關(guān)文獻報道卻較少，目前尚無有關(guān)其質(zhì)量控制的報道。為此，筆者以星宿菜中山柰酚的含量作為測定指標，建立HPLC法，該方法準確、靈敏、重復性好，可為星宿菜的質(zhì)量控制提供含測依據(jù)。

試驗中，在星宿菜藥材的提取上曾采用甲醇-鹽酸回流提取30、60、90 min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)30 min未能提取完全，60 min與90 min的提取結(jié)果基本無差異，為節(jié)省試驗時間，故選擇提取60 min。

在流動相的選擇上，試用過乙腈-0.2%磷酸水溶液（37∶63）[5]，結(jié)果山柰酚出峰時間較久；而乙腈-0.2%磷酸水溶液（50∶50）與乙腈-0.2%磷酸水溶液（45∶55）的分離度結(jié)果不好。后將流動相改成乙腈-0.2%磷酸水溶液（42∶58），色譜圖各種參數(shù)均能達到要求。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（第6冊）[M].上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1999：103.

[2]黃新安，蔡佳仲，胡英杰，等.星宿菜化學成分研究[J].中國中藥雜志，2007，32（7）：596.

[3]方乍浦，張亞均，孫小芳.星宿菜脂溶性部分的化學成分研究[J].中國中藥雜志，1989，14（12）：35.

[4]K Yasukawa，H Sekine，M Takido.Two flavonol glycosides from Lysimachia fortunei[J].Phytochemistry，1989，28（8）：2215.

[5]李 捷，郭五保.HPLC法測定五靈脂中山柰酚的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2010，30（3）：86.