馬·鼻·疽·研·究·進(jìn)·展

陳 琦，夏爐明，劉佩紅，李維功，盧 軍，孫泉云

（上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 長寧 201103）

馬鼻疽是由鼻疽伯氏菌引起的馬、驢和騾等馬屬動(dòng)物的一種接觸性傳染性致死性傳染病。該病主要在成年馬的皮膚、淋巴系統(tǒng)和呼吸道發(fā)生，其臨床特征是在鼻腔或皮膚形成特異性的鼻疽結(jié)節(jié)、潰瘍，或在肺臟、淋巴結(jié)等臟器出現(xiàn)結(jié)節(jié)。亞里斯多德在公元前330年第一次確切的描述了該病在馬匹中的發(fā)生情況，并命名為惡性病［1］。有文獻(xiàn)報(bào)道了人感染馬鼻疽的病例，這些人都有與感染馬匹的接觸史，特別是臨床獸醫(yī)。本文就馬鼻疽的研究進(jìn)展做一綜述。

1 病原學(xué)

馬鼻疽是由鼻疽伯氏菌（Burkholderiamallei）所引起，該菌的名稱由鼻疽假單胞菌（Pseudomonas mallei）改來，曾被分類歸屬于斐弗菌屬、呂弗勒菌屬、鼻疽桿菌屬或放線桿菌屬等［2］。目前，根據(jù)16S rRNA序列、DNA之間的同源性、細(xì)胞脂質(zhì)和脂肪酸成分以及表型特性，該菌歸屬于伯氏菌科（Burkholderiaceae）、伯氏菌屬（Burkholderia）［3］。

鼻疽伯氏菌是中等大小的桿菌，兩端圓形，無芽孢，無莢膜，無運(yùn)動(dòng)性，革蘭染色陰性。本菌為微需氧菌，在馬鈴薯培養(yǎng)基上能形成棕色黏性、小圓形的、透明或半透明的菌落，該菌對外界因素的抵抗力不強(qiáng)。豚鼠對本菌有高度的易感性，常用公豚鼠檢驗(yàn)可疑病料，經(jīng)腹腔注射后，可引起豚鼠特異性的Strauss反應(yīng)（睪丸炎）［2］。

2 流行病學(xué)

感染病馬是本病的主要傳染源。馬、騾、驢等單蹄馬屬動(dòng)物對本病易感，馬匹通常是慢性感染，騾、驢感染后常呈急性經(jīng)過?？祻?fù)的動(dòng)物一般持續(xù)帶菌。駱駝、狗、貓等家畜有感染本病的報(bào)道。野生或動(dòng)物園內(nèi)的貓科動(dòng)物如虎、獅及狼、山羊和綿羊等動(dòng)物也可感染，肉食動(dòng)物可能采食了感染的動(dòng)物而感染，牛和豬對本菌有一定的抵抗力。豚鼠和大鼠高度易感，接種大劑量后，24h內(nèi)死亡，接種小劑量后，3周內(nèi)死亡［4］。

該病在中東、印度、巴基斯坦、越南、非洲部分國家和蒙古等國家一直存在。英國于1928年，美國于19世紀(jì)40年代消滅了馬鼻疽［1，4］。

通常認(rèn)為馬鼻疽最可能的傳播途徑是通過采食。根據(jù)Hutyra等報(bào)道，污染的食物、水和工具能夠傳播該疾病。研究表明，水源污染后可能將病原從動(dòng)物傳播到人類，并保持感染能力達(dá)幾個(gè)星期［5］。該病菌也可以從動(dòng)物的糞便和破損的皮膚中分離到。

該病的傳播風(fēng)險(xiǎn)因素包括污染和擁擠的圈舍條件。污染的動(dòng)物分泌物可以從一個(gè)動(dòng)物傳染到另一個(gè)動(dòng)物，或間接使用同一個(gè)美容器具。當(dāng)飼養(yǎng)條件擁擠和不衛(wèi)生時(shí)，馬鼻疽可能出現(xiàn)流行，所有品種和性別的馬匹都可能感染，但兩歲以上的更可能出現(xiàn)皮膚鼻疽。盡管該病能在任何季節(jié)發(fā)生，但其最高的發(fā)生率是在非常寒冷的天氣下，而馬匹營養(yǎng)不良，飼養(yǎng)環(huán)境較差將更導(dǎo)致易感。當(dāng)健康的馬匹與病馬在一起飼喂，且身體上有損傷時(shí)，馬蠅也可傳播該病。

3 發(fā)病機(jī)理

小動(dòng)物的感染模型可用來評價(jià)鼻疽伯氏菌的毒力大小。研究結(jié)果顯示，低毒力的毒株將導(dǎo)致大鼠亞急性或慢性感染，中等毒力毒株將導(dǎo)致大鼠和雪貂急性暴發(fā)感染，導(dǎo)致豚鼠亞急性或慢性感染，強(qiáng)毒株將導(dǎo)致大鼠和豚鼠急性暴發(fā)感染。靜脈內(nèi)或睪丸內(nèi)接種鼻疽伯氏菌，將導(dǎo)致山羊和綿羊出現(xiàn)急性的毒血癥和死亡。皮下注射也將導(dǎo)致綿羊和山羊的死亡，但感染不是急性的。研究表明，采食是主要的感染途徑，這可能可以解釋出現(xiàn)的內(nèi)在器官的結(jié)節(jié)損傷和引起的睪丸炎［6］。肺部和上呼吸道是病菌偏好的定植位點(diǎn)。病原通過采食、吸入或穿透皮膚傷口進(jìn)入血液、淋巴系統(tǒng)或體循環(huán)，停留在肺部，擴(kuò)張到鼻腔。與其他細(xì)菌感染一樣，該菌感染馬匹后能導(dǎo)致嗜中性粒細(xì)胞增多，同時(shí)能引起嚴(yán)重的貧血癥，這是由于骨髓紅細(xì)胞的生成受到了抑制。

4 臨床癥狀

根據(jù)馬鼻疽的臨床癥狀，一般可分為4種形式：鼻腔型、皮膚型、肺臟型、無癥狀攜帶者。前3種類型一般可以互相轉(zhuǎn)化，且鼻腔型和皮膚型常呈開放性，持續(xù)向外排菌。

4.1 鼻腔型 鼻腔型馬鼻疽主要癥狀是鼻黏膜潮紅，鼻炎，鼻孔流出漿液性或黏液性鼻液，上呼吸道出現(xiàn)結(jié)節(jié)或潰瘍。潰瘍通常出現(xiàn)在鼻甲骨的下端，鼻中隔軟骨之上，結(jié)節(jié)壞死后崩潰，形成潰瘍，邊緣不整而稍隆起，底部凹陷，潰瘍面呈灰白色或黃白色，破潰后流出帶血的、黏性、膿性分泌物。

4.2 皮膚型 皮膚型馬鼻疽主要發(fā)生于四肢、胸側(cè)及腹下，以后肢較多見，主要是皮膚形成結(jié)節(jié)、膿皰、潰瘍。結(jié)節(jié)通常沿著淋巴管呈鏈狀分布，形成串珠樣水腫，病肢發(fā)生浮腫、變粗，形成橡皮腿。最初，局部皮膚發(fā)生熱、痛的炎性腫脹，而后腫脹中心出現(xiàn)結(jié)節(jié)，然后破潰，形成深陷的坑狀潰瘍，邊緣不整，如火山口狀，底部呈現(xiàn)黃白色肥肉樣，不易愈合，并有濃厚、黃色、黏性、膿性黏液流出，且含有大量病菌。

4.3 肺臟型 肺臟型馬鼻疽是該病最常見的臨床表現(xiàn)形式。臨床上出現(xiàn)鼻出血或咳出帶血黏液，干性無力短咳，呼吸次數(shù)增加，肺部啰音。剖檢特征是在肺組織中形成圓的、灰色的、堅(jiān)硬的、膠囊狀的結(jié)節(jié)包埋，或出現(xiàn)不連續(xù)的、顆粒狀肉芽腫結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)中心壞死，嗜中性粒細(xì)胞退化。咳嗽和高熱則說明支氣管肺炎的發(fā)生，是急性病例的特征。

4.4 無癥狀的攜帶者（隱性感染） 病畜在馬鼻疽發(fā)展幾個(gè)月后無顯著的臨床癥狀出現(xiàn)。感染的馬從外觀上看，完全健康，但是持續(xù)帶菌，但鼻疽菌素試驗(yàn)為陽性，無可見的明顯皮膚損傷和結(jié)節(jié)出現(xiàn)。

5 實(shí)驗(yàn)室診斷

開放性馬鼻疽可根據(jù)臨床癥狀來診斷，一般采取實(shí)驗(yàn)室方法如鼻疽菌素試驗(yàn)、細(xì)菌分離鑒定和血清學(xué)試驗(yàn)來進(jìn)行診斷。

5.1 鼻疽菌素（mallein，馬來因）試驗(yàn) 馬來因試驗(yàn)是一種檢查鼻疽的敏感而特異的臨床試驗(yàn)。鼻疽菌素點(diǎn)眼反應(yīng)操作簡便易行，特異性及檢出率均較高，適合于大批集中檢疫。對于急性、開放性或慢性鼻疽馬都有較高的診斷價(jià)值，特別是以5～6d的間隔反復(fù)點(diǎn)眼檢疫時(shí)，檢出率更高。陽性反應(yīng)的特征是眼瞼明顯腫脹，從內(nèi)眼角或結(jié)膜流出膿性分泌物，同時(shí)伴有體溫升高。陰性反應(yīng)通常為不出現(xiàn)變化或下眼瞼輕微腫脹［5］。馬來因試驗(yàn)對急性和慢性病例動(dòng)物陽性準(zhǔn)確率達(dá)92%，對老年病例的陰性結(jié)果的準(zhǔn)確率為96%。但在臨床老年病例中，其假陽性反應(yīng)可能與鏈球菌等感染有關(guān)。

馬來因試驗(yàn)也可采用眼瞼皮內(nèi)注射法。在靠近下部眼瞼的皮膚內(nèi)注射0.1mL鼻疽菌素，陽性反應(yīng)通常在24～48h內(nèi)出現(xiàn)，特征是眼瞼顯著的水腫，眼瞼痙攣，嚴(yán)重的膿性結(jié)膜炎。該方法是檢查單蹄獸感染的一種最敏感、可靠和特異性的試驗(yàn)［5］。

5.2 病原分離和鑒定 從未破潰的皮膚結(jié)節(jié)、淋巴結(jié)或肺臟結(jié)節(jié)中分離培養(yǎng)鼻疽伯氏菌具有診斷價(jià)值。許多培養(yǎng)基上都可以生長該菌，腦心浸潤瓊脂添加3%甘油，用來大量培養(yǎng)鼻疽伯氏菌。膿性分泌物拭子接種甘油瓊脂后，會(huì)出現(xiàn)小的、圓形、無定型的、半透明的菌落。通過革蘭染色、形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)活性、雄性豚鼠接種試驗(yàn)?zāi)軌蜩b定該菌［7］。對雄性豚鼠腹腔內(nèi)注射疑似的感染物質(zhì)，可以引起典型的睪丸炎，稱為Strauss（施特勞斯）反應(yīng)。

聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和熒光PCR可直接從全血白細(xì)胞層、病變組織和結(jié)節(jié)中檢出細(xì)菌。PCR采用特異性的引物對細(xì)菌的部分基因組進(jìn)行擴(kuò)增，以鑒別區(qū)分馬鼻疽、類鼻疽或其他病原。采用16S rRNA基因序列可快速鑒別馬鼻疽、類鼻疽等病原［8－9］。

5.3 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫試驗(yàn) 一種體外進(jìn)行的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫試驗(yàn)是淋巴細(xì)胞刺激試驗(yàn)。將淋巴細(xì)胞增生試驗(yàn)、CF和病原菌的培養(yǎng)結(jié)合起來可以使馬鼻疽的診斷具有較高的敏感性和特異性［10］。

5.4 血清學(xué)試驗(yàn) 血清學(xué)檢測是應(yīng)用最廣的流行病學(xué)調(diào)查方法。盡管病原能通過不同的方法分離到，但分離到病原比血清學(xué)檢測困難和復(fù)雜得多［11－13］。

5.4.1 瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID） AGID已成功的用來進(jìn)行馬鼻疽的診斷的篩選試驗(yàn)。該試驗(yàn)的主要缺點(diǎn)是必須有大量的抗體以產(chǎn)生可見的沉淀線。該試驗(yàn)可快速、便宜、準(zhǔn)確的診斷臨床馬鼻疽病例，其結(jié)果可在48h內(nèi)產(chǎn)生。

5.4.2 反向免疫電泳試驗(yàn)（CIE） CIE根據(jù)免疫擴(kuò)散的原理，通過抗原、抗體在電泳中相互靠近移動(dòng)來實(shí)現(xiàn)。本試驗(yàn)?zāi)壳坝脕頇z測感染馬匹的血清中的抗體。本試驗(yàn)快速、簡單、經(jīng)濟(jì)，適合用來做大量的血清中的篩查。

5.4.3 熒光抗體試驗(yàn)（IFA） 熒光抗體檢測技術(shù)用來進(jìn)行臨床病料的馬鼻疽診斷。該方法可快速、簡單的針對馬鼻疽。同時(shí)，IFA的方法可以區(qū)分鼻疽伯氏菌和其他細(xì)菌的抗原，而這些菌在CF的方法中容易混淆。

5.4.4 間接血凝試驗(yàn)（HA） 間接血凝試驗(yàn)可以用來對畜群進(jìn)行診斷和流行病學(xué)調(diào)查。滴度≥1∶80認(rèn)為是陽性，而在印度，滴度≥1∶640認(rèn)為是陽性。

5.4.5 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF） 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是診斷馬鼻疽的可靠方法，但其敏感性低于馬來因試驗(yàn)，滴度1∶32判為陽性。通常認(rèn)為，CFT優(yōu)于其他血清學(xué)診斷方法。然而，瘦弱的馬未感染馬鼻疽時(shí)，采用CFT檢測可能與馬腺疫、馬流感等有陽性交叉反應(yīng)出現(xiàn)。

5.4.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 對ELISA、CF、AGID和HA等方法進(jìn)行比較的結(jié)果顯示，ELISA與臨床馬鼻疽確診病例符合率達(dá)到100%，而其他試驗(yàn)僅有90.9%的符合率。因此，ELISA能夠作為馬鼻疽常規(guī)采用的高靈敏度診斷方法。

6 鑒別診斷

馬鼻疽從臨床診斷可能與類鼻疽、流行性淋巴管炎、潰瘍性淋巴管炎、馬腺疫等疫病相混淆，應(yīng)進(jìn)行鑒別診斷。

類鼻疽是由偽鼻疽伯氏菌（Burkholderia pseudomallei）所引起的。盡管馬鼻疽和類鼻疽流行病學(xué)不同，但是它們引起的病理變化相似。類鼻疽主要出現(xiàn)在熱帶，在東南亞呈地方流行性，如菲律賓、印度尼西亞和其他熱帶地區(qū)。該病在泰國分布較廣，在一個(gè)調(diào)查中，19%的膿血癥和40%的死亡是該病引起。人類和其他易感動(dòng)物可傳播感染該病。該病病原廣泛存在于熱帶的土壤和水源中。該病通過直接接觸污染源或吸入污染的空氣和灰塵而感染人類。

流行性淋巴管炎是皮疽組織胞漿菌（Histoplasmafarciminosum）引起的一種慢性肉芽腫和化膿性的真菌感染性疾病。該病主要是在皮膚淋巴、皮下、黏膜或結(jié)締組織形成結(jié)節(jié)。該菌可通過直接涂板培養(yǎng)進(jìn)行鑒別診斷。

潰瘍性淋巴管炎是由假結(jié)核棒狀桿菌所引起馬和羊等多種動(dòng)物感染的一種細(xì)菌性疾病。該病的特征是在皮下組織間隙生產(chǎn)繁殖，并沿淋巴管形成結(jié)節(jié)，特別是在蹄球關(guān)節(jié)附近。

馬腺疫是由馬鏈球菌所引起的一種嚴(yán)重的細(xì)菌性疾病。其特征為出現(xiàn)上呼吸道炎癥，頜下淋巴結(jié)膿腫等癥狀。該病用青霉素等抗生素治療效果較好。

7 公共衛(wèi)生

馬鼻疽是人畜共患病，但人發(fā)病的報(bào)道較少。人感染馬鼻疽的病例是在獸醫(yī)、屠宰人員、馬匹管理者（與馬匹密切接觸的飼喂者，美容師、教練等）以及實(shí)驗(yàn)室人員中，因此人員必須做好防護(hù)工作。所有感染性的或潛在感染性的材料，必須在符合處理3級病原要求的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。該病的傳播是通過皮膚或黏膜直接與感染動(dòng)物的組織接觸造成。第一次世界大戰(zhàn)期間，德國和前蘇聯(lián)都曾用作生物武器，且有人感染的報(bào)道。人感染慢性馬鼻疽是由一個(gè)英國獸醫(yī)在印度發(fā)現(xiàn)的。盡管美國在19世紀(jì)40年代就已經(jīng)消滅了馬鼻疽，但曾出現(xiàn)了一個(gè)實(shí)驗(yàn)室人員感染的病例［14］。人感染鼻疽的特征為急性發(fā)熱，局部皮膚或淋巴管等處發(fā)生腫脹、壞死、潰瘍或結(jié)節(jié)膿腫，有時(shí)呈慢性經(jīng)過。

8 防治

目前尚無有效馬鼻疽菌苗。為消滅、控制該病，必須做好檢測和消滅傳染源這一主要環(huán)節(jié)，防控的主要工作是定期對所有馬匹進(jìn)行馬來因（鼻疽菌素）試驗(yàn)，撲殺所有感染的馬匹，以及加強(qiáng)消毒。通常不對任何證實(shí)感染馬鼻疽的馬屬動(dòng)物進(jìn)行治療。在對感染豚鼠的治療中，氨芐西林、磺胺類藥物、慶大霉素等大劑量使用有一定效果。

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