略論蟾蜍提取物工藝研究和實(shí)驗研究

苗延萍

吉林省吉林市吉林鹿王制藥股份有限公司，吉林 吉林 132013

蟾蜍俗稱癩蛤蟆，是中國東北地區(qū)常見的兩棲類動物。在我國主要為中華大蟾蜍與黑眶蟾蜍兩種，能夠吞噬害蟲，保護(hù)農(nóng)作物，也是傳統(tǒng)中藥的重要組成部分?！侗静輨e錄》認(rèn)為，蟾蜍味辛，性涼，有毒。它還是中藥六神丸的主要成分之一，但是盲目食用會發(fā)生生命危險。當(dāng)前雖然因為環(huán)境改變和污染等原因，導(dǎo)致蟾蜍數(shù)量大為減少，但是在一些偏遠(yuǎn)農(nóng)村依然大量存在。學(xué)術(shù)界一致認(rèn)為蟾蜍的毒液蟾酥對惡性腫瘤有很好的治療作用。根據(jù)蟾皮的一些特性，目前有效成分的提取主要是采用乙醇加熱回流方法。采用TLC和HPLC進(jìn)行定性鑒別和含量測定，操作簡便，迅速和靈敏度高，重現(xiàn)性也很好，明顯優(yōu)于其他的提取和檢測方法［1］。目前已經(jīng)有含有蟾蜍有效成分的藥物用來治療惡性腫瘤的報道。目前對蟾蜍提取物的研究比較多，對這一領(lǐng)域的開發(fā)利用還有很大前景。

1 蟾蜍提取物工藝研究

有報道顯示蟾皮優(yōu)化工藝為水煎煮2次，第1次加10倍量的水浸泡1 h，煎煮45 min，第2次加8倍量的水，煎煮45 min。結(jié)論:該工藝合理，蟾皮中吲哚類總生物堿的提取率較高，更適合于工業(yè)化大生產(chǎn)［2］。也有報道顯示超聲法提取蟾皮中蟾蜍噻嚀的最佳工藝條件為50%乙醇，pH值為4的酸性溶液，溫度50℃，固液比為1∶15，提取時間為60 min，功率100W。與傳統(tǒng)水加熱回流提取法相比，縮短了提取時間，降低成本，并有良好的蟾蜍噻嚀提取率［3］。也有報道用超高效高壓液相色譜－紫外檢測器進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)干蟾皮中蟾毒內(nèi)酯類成分的最佳提取工藝為以10倍量80%乙醇提取2次，每次2 h［4］。目前有報道利用近紅外透射光譜分析技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)蟾皮提取液濃縮過程中密度、含水率和吲哚類生物堿濃度這3個關(guān)鍵質(zhì)控指標(biāo)的同時快速檢測［5］。蟾蜍提取物蟾蜍噻嚀的含量很不穩(wěn)定，并有很大的差異，中華大蟾蜍人工飼養(yǎng)的皮中含有蟾蜍噻嚀，而野生的中華大蟾蜍皮研究發(fā)現(xiàn)不含蟾蜍噻嚀［6］。

2 蟾蜍提取物實(shí)驗研究

甘草苷與適量蟾酥內(nèi)酯等制成的蟾苷提取物，發(fā)現(xiàn)蟾苷提取物的抗病毒作用接近甚至強(qiáng)于黃芪及鹽酸胍，發(fā)現(xiàn)其體外抗病毒活性和體內(nèi)抗病毒活性都接近或強(qiáng)于對照藥物［7］。應(yīng)用一定濃度的蟾苷提取物作用于被腺病毒感染的細(xì)胞，以MTT法測定細(xì)胞存活率，顯示:用藥后的細(xì)胞存活率明顯高于病毒對照組，并能抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的繁殖［8］。中華大蟾蜍蟾酥、蟾皮、蟾衣脂溶性及水溶性提取物，均可抑制心肌細(xì)胞膜的Na+－K+－ATP酶、Ca2+－ATP酶和Mg2+－Ca2+－ATP酶活性，作用較強(qiáng)的有蟾皮水溶性成分和華蟾素［9］。有研究結(jié)果表明華蟾酥毒基在兔體內(nèi)代謝速度極快，可能由于草食性動物血漿中所含的特異酶有關(guān)，華蟾酥毒基在動物體內(nèi)迅速代謝為去乙?；A蟾，為其主要代謝產(chǎn)物，體內(nèi)代謝參數(shù)有待做進(jìn)一步的研究［10］。而有學(xué)者報道大蹼鈴蟾蛋白提取物對多個膀胱癌細(xì)胞株具有直接細(xì)胞殺傷作用，其作用機(jī)制不通過抑制端粒酶活性［11］。

3 小結(jié)

蟾蜍目前人工飼養(yǎng)的技術(shù)已經(jīng)成熟，可以為研究和制藥提供大量的產(chǎn)品。蟾蜍在我國中成藥的使用比較廣泛，含有蟾酥的中成藥有六神丸、喉癥丸等等。不當(dāng)使用導(dǎo)致中毒的表現(xiàn)為循環(huán)系統(tǒng)病變，臨床上心電檢測常顯示房室傳導(dǎo)阻滯等心電圖。嚴(yán)重時患者血壓下降和休克，甚至心跳驟停導(dǎo)致死亡，臨床醫(yī)生使用含蟾蜍提取物的中藥一定要小心謹(jǐn)慎，而患者更不可盲目服用。目前蟾蜍的各種提取分離方法很多，不同的技術(shù)方法得到的成分也不同。水煎煮是普遍的方法，技術(shù)和設(shè)備要求非常低，但是提取效果并不理想，基本上是包含各種成分的總提取物。而利用高科技手段提取有效成分應(yīng)當(dāng)是各級研究和制藥企業(yè)的工作重點(diǎn)，蟾蜍提取物的研究是新藥開發(fā)的重要方向之一。目前中藥研究手段日益多樣化，蟾蜍提取物的一些化學(xué)成分和臨床應(yīng)用效果是開發(fā)重點(diǎn)，但是要注意消除毒性提高藥效，一些蟾蜍提取物對疾病的治療機(jī)制并不明確，而不良反應(yīng)也不明確，還需要有責(zé)任心的研究人員更加深入研究。

［1］黃玉葉，宋霄宏．蟾皮的提取和含量測定及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展［J］．中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29(7):1636－1638．

［2］高波，黃雪艷．蟾皮提取工藝的研究［J］．安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，21(5):51－52．

［3］張國平，張曉萍，張曉嫚，等．蟾皮中蟾蜍噻嚀的超聲提取工藝研究［J］．時珍國醫(yī)國藥，2011，22(8):1904－1905．

［4］昝日增，胡萬楊，黃玉葉，等．干蟾皮中蟾毒內(nèi)酯類成分的提取工藝研究 ［J］．中草藥，2011，42(7):1330－1333．

［5］金葉，吳永江，劉雪松，等．蟾皮提取液濃縮過程中吲哚類生物堿等多指標(biāo)近紅外快速檢測研究［J］．中國藥學(xué)雜志，2012，47(9):712－717．

［6］楊立宏，金向群，張薇．中華大蟾蜍化學(xué)成分研究［J］．沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2000，17(4):292－295．

［7］曹悅?cè)海瑢O非，張淑芹，等．蟾苷提取物抗流感病毒的實(shí)驗研究［J］．吉林中醫(yī)藥，2003，23(9):47－48．

［8］張淑芹，曹悅?cè)?，孫非，等．蟾苷提取物抗腺病毒的實(shí)驗研究［J］．長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，19(4):43－44．

［9］陳才法，繆進(jìn)，李景輝，等．蟾酥、蟾皮、蟾衣提取物對心肌細(xì)胞膜ATP酶的影響［J］．四川動物，2008，27(3):393－395．

［10］劉冬，杜守穎，何秀峰，等．蟾酥提取物中2種蟾蜍甾烯類成分兔體內(nèi)藥代動力學(xué)研究［J］．中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志，2011，17(21):135－138．

［11］申吉泓，黃翔，李文輝，等．大蹼鈴蟾蛋白提取物對膀胱癌細(xì)胞株的抑制作用及對端粒酶的影響［J］．中國藥理學(xué)通報，2002，18(2):136－1388．