連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)在參松養(yǎng)心膠囊中試生產(chǎn)中的應(yīng)用研究

于向紅，王曙賓，粘立軍

(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北石家莊050035)

參松養(yǎng)心膠囊(國藥準(zhǔn)字Z20103032，國家標(biāo)準(zhǔn)號:YBZ00952003-2006Z-2009)是中國工程院院士吳以嶺教授以中醫(yī)絡(luò)病理論為指導(dǎo)，根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)研制成功的創(chuàng)新性抗心律失常中藥，對治療心律失常有雙向調(diào)節(jié)的療效。該藥處方由黃連、山茱萸、五味子、甘松、赤芍、桑寄生、土鱉蟲等十二味中藥組成，原工藝中黃連、山茱萸、五味子、甘松四味藥材采用70%乙醇回流合提，赤芍、桑寄生等采用水煎煮合提，土鱉蟲采用粉碎加入，其中醇提工藝中乙醇用量大、生產(chǎn)成本高。

隨著現(xiàn)代提取技術(shù)的不斷發(fā)展，連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)逐漸被應(yīng)用到中藥生產(chǎn)中，連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)是一種增大傳質(zhì)推動(dòng)力、提高提取效率的提取新方法，與傳統(tǒng)的提取方法相比，具有節(jié)省溶劑用量，縮短提取時(shí)間，減少后續(xù)濃縮能耗等優(yōu)點(diǎn)［1-13］。

本次研究是在單位前期小試研究工作的基礎(chǔ)上，采用連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)對參松養(yǎng)心膠囊醇提工藝進(jìn)行中試放大實(shí)驗(yàn)，對影響產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)成本相關(guān)環(huán)節(jié)進(jìn)行考察，解決回流提取工藝中乙醇用量大、生產(chǎn)成本高等問題，從而降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率。

1 儀器與試藥

1.1 儀器連續(xù)逆流超聲提取成套設(shè)備(型號:GDC-TQ/3/C2N1，廠家:濟(jì)寧金百特生物機(jī)械有限公司，該設(shè)備超聲總功率70KW，超聲波頻率27kHz，超聲溫度40～60℃，進(jìn)料速度120kg/h，進(jìn)溶媒速度1 105 L/h)，Agilent 1200(廠家:安捷倫科技有限公司)，UV檢測器。METTLER TOLEDO AG135型電子天平，小型超聲儀(型號:KQ-250DB，廠家:昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(批號:110713-200208)，購于中國藥品生物制品檢定所;甲醇(色譜純);乙腈(色譜純);其它試劑均為分析純，山茱萸、五味子、黃連、甘松藥材購于安國藥材市場，經(jīng)本公司質(zhì)檢科范文成主任藥師鑒定，均符合《中國藥典》2010年版(一部)有關(guān)項(xiàng)下規(guī)定［14］。

2 方法及結(jié)果

2.1 參松養(yǎng)心膠囊醇提工藝中試試驗(yàn)方法

2.1.1 原回流提取工藝樣品的制備平行制備3批樣品，每批按處方量取山茱萸等四味藥共1 168.2 kg，加70%乙醇8倍量，回流提取3次，第1次3 h，第2次2 h，第3次1 h，合并提取液，減壓真空濃縮(蒸汽壓力≤0.1 MPa，溫度50～70℃，真空度0.04 MPa～0.085 MPa)，濃縮浸膏噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)口溫度160℃，出風(fēng)口溫度88℃，霧化器頻率45Hz)，得噴霧干燥粉末，稱質(zhì)量。

2.1.2 連續(xù)逆流超聲提取樣品的制備平行制備3批樣品，每批按處方量取山茱萸等四味藥共1 168.2 kg，加70%乙醇2 000 L，浸泡20 min，超聲波提取(超聲總功率70 KW，超聲波頻率27 kHz，超聲溫度40～60℃，超聲時(shí)間70 min，進(jìn)料速度120 kg/h，進(jìn)溶媒速度1 105 L/h)，超聲提取共用1.5 h，得提取液12 200 L，減壓真空濃縮(蒸汽壓力≤0.1 MPa，溫度50～70℃，真空度0.04 MPa～0.085 MPa)，濃縮浸膏噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)口溫度160℃，出風(fēng)口溫度88℃，霧化器頻率45 Hz)，得噴霧干燥粉末，稱質(zhì)量。

2.2 收粉率的測定方法取不同提取工藝下制備的噴霧干燥粉末，稱質(zhì)量，記錄收粉量，計(jì)算收粉率。

2.3 鹽酸小檗堿定量測定方法

2.3.1 色譜條件［15-17］:HPLC:Agilent 1200，UV檢測器，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣，在線脫氣;色譜柱:Agilent Zorbax SBC18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-磷酸三乙胺水溶液(23∶77)，磷酸-三乙胺-水溶液配比比例為(1∶2∶1 000);檢測波長為345 nm，體積流量:1 mL/min，柱溫:30℃，進(jìn)樣量:10 μL，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.3.2 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備稱取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品9.36 mg，置于50 m L量瓶中，加甲醇定容搖勻，用5 mL移液管移取5 mL上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于另一個(gè)10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成質(zhì)量濃度為93.6 μg/mL的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，搖勻，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備精密稱取參松養(yǎng)心膠囊醇提部分樣品粉末0.2 g，加甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取10 min，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.3.4 測定法精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計(jì)算鹽酸小檗堿的含有量。

2.3.5 線性關(guān)系考察取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣1、2、3、4、5、6、7、8 μL。測定峰面積，以鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=4 075.2x+34.773(R2=1)。結(jié)果表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在425.55～3 085.55 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.6 方法學(xué)考察精密度RSD為0.65%，重復(fù)性RSD為2.26%，穩(wěn)定性結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液常溫下放置24h不影響含有量測定，加樣回收率在99.13%～102.78%之間，平均加樣回收率為101.65%，RSD為1.60%，表明本方法具有較好的回收率。

2.4 提取溶媒用量及提取所用時(shí)間記錄不同提取工藝的提取溶媒消耗量及提取總時(shí)間。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同提取工藝對3批樣品出粉率、鹽酸小檗堿提取率、總提取時(shí)間及乙醇耗用量的測定結(jié)果，見表1。

表1 3批樣品各指標(biāo)測定結(jié)果(n=3)

3 討論

從測定結(jié)果可以看出，回流提取樣品的收粉率和鹽酸小檗堿的提取率均略高于連續(xù)逆流超聲提取，但從乙醇消耗量及提取時(shí)間來看，原工藝加熱回流提取，提取次數(shù)多，提取時(shí)間長達(dá)6～7 h，乙醇耗用量大，而采用超聲逆流提取技術(shù)后，藥材浸泡及提取總過程僅需要1.5 h，耗時(shí)為回流提取的1/4，且乙醇耗用量大大減少，節(jié)省溶劑用量近3/5，提取時(shí)間大幅縮短，溶劑用量大量減少，相應(yīng)的生產(chǎn)成本顯著降低，因此，連續(xù)逆流超聲提取工藝更節(jié)省成本，更經(jīng)濟(jì)。

但連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)畢竟是一種新興的提取技術(shù)，在大生產(chǎn)過程中發(fā)現(xiàn)其也存在一些缺點(diǎn)，比如對藥材飲片的粉碎粒度要求比較高，連續(xù)超聲時(shí)間不能過長、設(shè)備比較昂貴等，但隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，其性能參數(shù)也會(huì)越來越完善，應(yīng)用也會(huì)越來越廣泛。

本課題后續(xù)試驗(yàn)對連續(xù)逆流超聲提取工藝樣品指紋圖譜以及相應(yīng)的藥效學(xué)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)該工藝制備樣品與原工藝樣品相比指紋圖譜變化不大，藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該工藝制備的樣品能夠明顯抑制CaCl2、烏頭堿、心肌缺血再灌、哇巴因、急性心肌缺血所致心律失常的發(fā)生，與原工藝樣品相比，其抗心律失常效果沒有明顯差異。

綜上，本實(shí)驗(yàn)是在前期小試實(shí)驗(yàn)已確定工藝參數(shù)的基礎(chǔ)上，對小試實(shí)驗(yàn)?zāi)芊穹糯笊a(chǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，研究結(jié)果表明，連續(xù)逆流超聲提取技術(shù)應(yīng)用到參松養(yǎng)心膠囊中試生產(chǎn)中可大幅度降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率，該項(xiàng)提取技術(shù)是中藥提取未來發(fā)展的一個(gè)方向，具有廣闊的應(yīng)用前景，有望推廣到大生產(chǎn)應(yīng)用中。

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