野金柴化學(xué)成分的分離和研究

金弘昕，趙亞，賴小平，2，陳建南，2，黃松，2*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心，廣東廣州510006;2.東莞廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院，廣東東莞523808)

野金柴，來源于殼斗科櫟屬植物多穗石柯Lithocarpus polystachyusRehd的干燥葉［1］，又名多穗柯。多以野生狀態(tài)分布于長江以南各省區(qū)，而以江西、湖南、福建、廣西、安徽等省資源最為集中［2］。黃酮為其主要成分［3］，含有量高達(dá)9.0%～14.60%?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明［4］，野金柴具有清熱利尿、潤肺鎮(zhèn)咳、滋潤肝腎等功效，可用于防治溫?zé)崃〖?、癰疽惡瘡、皮膚瘙癢等癥，還有“三抗”、“三降”的作用。目前，野金柴在國內(nèi)有多方面的成分研究［5-7］，但其分離方法多較為繁瑣，且分離效果不佳。本實(shí)驗(yàn)介紹了分離野金柴化學(xué)成分的一種新的系統(tǒng)方法，最終分離得到7種化學(xué)成分，進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定后分別確定為胡蘿卜苷(1)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(2)，槲皮苷(3)，3-羥基根皮苷(4)，根皮苷(5)，山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(6)，齊墩果酸(7)。該分離方法不僅首次從野金柴中分離得到山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷，而且明顯改善了其它黃酮類成分的分離效果，尤其使低含有量的黃酮類成分的分離效率顯著提高，比如槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

1 儀器與材料

核磁共振波譜儀(BRUKER AV 300 MHz)，分析電子天平(佛山市華天力電子天平廠)，EYELA SB—1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)，SHZ—D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器廠)，HWS24型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)，ACO—001電磁式空氣泵(廣東日生集團(tuán)有限公司)，VGT—2013QTD超聲儀，DZF—6020型真空干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司醫(yī)療設(shè)備廠)，島津LC—8A制備型高效液相色譜儀，島津LC—20AT分析型高效液相儀。

100～200目聚酰胺層析粉(臺(tái)州路橋四甲生化塑料廠)，AA12S50型C18反相柱層析粉(北京金歐亞科技發(fā)展有限公司)，制備液相分離用色譜甲醇，其他所有試劑均為分析純。

野金柴藥材采集于湖南漣原縣，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心陳建南研究員鑒定為殼斗科植物L(fēng)ithocarpus polystachyusRehd的干燥葉，標(biāo)本存放于廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心。

2 提取分離

稱取500 g干燥野金柴爆破粉，加蒸餾水混合，70℃水浴加熱攪拌使其溶解完全。經(jīng)乙酸乙酯充分萃取3次，棄去水層，乙酸乙酯層合并，減壓濃縮回收溶劑，并用分析甲醇洗出，共得到樣品100 mL左右。

樣品先經(jīng)過C18反相色譜柱(20%，30%，40%甲醇水液梯度洗脫)分離，用聚酰胺薄層板展開劑乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸-水(15∶2∶1∶1)，2%氯化鋁乙醇溶液顯色檢驗(yàn)成分，再分別將20%甲醇洗脫部分和30%甲醇洗脫部分過聚酰胺色譜柱(條件均為20%，30%，40%乙醇水液梯度洗脫)，等分收集，同樣經(jīng)過聚酰胺薄層板的觀察，合并相同物，再通過高效液相色譜的檢驗(yàn)，選擇有效合并物。最后采用制備液相(固相種類為ODS，流動(dòng)相為40%色譜甲醇水溶液)逐一分離純化，最終得到單體化合物1(30 mg)，2(52 mg)，3(88 mg)，4(191 mg)，5(377 mg)，6(55 mg)，7(25 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色粉末，mp 293～294℃。紫外燈下無熒光，5%硫酸-乙醇顯色為紅色。其IR、Rf值與胡蘿卜苷對(duì)照品一致，與胡蘿卜苷對(duì)照品混合熔點(diǎn)不下降，故鑒定化合物1為胡蘿卜苷。

化合物2:淡黃色粉末，Mg-HCl反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:3.1～3.6(6H，m，H-2″-6″)，5.45(1H，d，H-1″)，6.19(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.84(1H，d，J=9 Hz，H-5')，7.57(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，7.59(1H，d，J=2.1 Hz，H-2');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:60.97(C-6″)，69.93(C-4″)，74.10(C-2″)，76.51(C-3″)，77.57(C-5″)，93.53(C-8)，98.7(C-6)，100.86(C-1″)，103.92(C-10)，115.21(C-5')，116.18(C-2')，121.16(C-1')，121.60(C-6')，133.30(C-3)，144.82(C-3')，148.48(C-4')，156.15(C-9)，156.4(C-2)，161.24(C-5)，164.3(C-7)，177.42(C-4)。綜合解析以上數(shù)據(jù)，文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，故確定該化合物為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3:黃色顆粒狀結(jié)晶(甲醇)，Mg-HCl反應(yīng)呈陽性，Molish反應(yīng)陽性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:0.81(3H，d，J=6.0 Hz，CH3)，3.1～3.9(4H，m，H-2″-5″)，5.26(1H，brs，H-1″)，6.20(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.25(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，7.30(1H，d，J=2.1 Hz，H-2');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:17.5(C-6″)，70.3(C-2″)，70.6(C-3″)，70.0(C-5″)，71.2(C-4″)，93.6(C-8)，98.7(C-6)，101.8(C-1″)，104.0(C-10)，115.4(C-2')，115.6(C-5')，120.7(C-1')，121.1(C-6')，134.2(C-3)，145.2(C-3')，148.4(C-4')，156.4(C-2)，157.3(C-9)，161.3(C-5)，164.3(C-7)，177.7(C-4)。綜合解析以上數(shù)據(jù)，和文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，故確定該化合物為槲皮苷。

化合物4:白色晶體，Molish反應(yīng)陽性。根據(jù)核磁共振波譜的解析，1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:2.77(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-β)，3.17～3.73(5H，m，H-2″-6″)，4.57(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-α)，4.92(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.92(1H，d，J=2.1 Hz，H-3')，6.12(1H，d，J=2.1 Hz，H-5')，6.47(1H，dd，J=7.2，1.8 Hz，H-6)，6.58(1H，d，J=1.8 Hz，H-5)，6.61(1H，d，J=7.2 Hz，H-2);13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:29.1(C-β)，44.9(C-α)，60.5(C-6″)，69.4(C-4″)，73.1(C-2″)，76.7(C-3″)，77.2(C-5″)，94.3(C-3')，96.8(C-5')，100.8(C-1″)，105.1(C-1')，115.3(C-5)，115.8(C-2)，118.8(C-6)，132.3(C-1)，143.1(C-3)，144.8(C-4)，160.8(C-2')，164.4(C-6')，165.3(C-4')，204.7(C=O)。綜合解析以上數(shù)據(jù)，和文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故鑒定該化合物為3－羥基根皮苷。

化合物5:白色針晶，mp 168～169℃，Molish反應(yīng)陽性。根據(jù)核磁共振波譜的解析，1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:2.81(2H，t，J=7.2，7.2Hz，H-β)，3.17-3.73(5H，m，H-2″-6″)，3.71(1H，d，J=11.1 Hz，H-5″)，4.57(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-α)，4.93(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.93(1H，d，J=2.1 Hz，H-3')，6.13(1H，d，J=2.1 Hz，H-5')，6.64(2H，dd，J=2.7，8.4 Hz，H-3，5)，7.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6);13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:29.0(C-β)，44.9(C-α)，60.5(C-6″)，69.4(C-4″)，73.2(C-2″)，76.7(C-3″)，77.3(C-5″)，94.4(C-3')，96.8(C-5')，100.8(C-1″)，105.1(C-1')，115.0(C-3，5)，129.2(C-2，6)，131.6(C-1)，155.3(C-4)，160.9(C-2')，164.6(C-6')，165.4(C-4')204.7(C=O)。綜合解析以上數(shù)據(jù)，和文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，故確定該化合物為根皮苷。

化合物6:黃色晶體，Mg-HCl反應(yīng)呈陽性，Molish反應(yīng)陽性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:0.78(3H，d，J=6.0Hz，CH3)，3.1-3.9(4H，m，H-2″-5″)，5.29(1H，s，H-1″)，6.19(1H，d，J=3.0 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=3Hz，H-8)，6.91(2H，d，J=9.0Hz，H-3'，5')，7.74(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:18.5(C-6″)，70.1(C-5″)，70.3(C-2″)，70.6(C-3″)，71.1(C-4″)，93.8(C-8)，98.9(C-6)，101.8(C-1″)，103.9(C-10)，115.4(C-3')，115.4(C-5')，120.5(C-1')，130.6(C-2')，130.6(C-6')，134.1(C-3)，156.5(C-2)，157.1(C-9)，160(C-4')，161.3(C-5)，164.9(C-7)，177.6(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故鑒定該化合物為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物7:白色針晶，mp 305～306℃。Liebermann Burchard反應(yīng)呈陽性。與齊墩果酸對(duì)照品混合，共熔點(diǎn)不下降，它們的IR、TLC的Rf值均為一致［13］，故鑒定該化合物為齊墩果酸。

［1］中科院植物研究所.中國高等植物圖鑒:第一冊(cè)［M］.北京:科學(xué)出版社，1972:434.

［2］楊勇，彭炳華，馬庭升，等.保健甜茶——多穗柯的研究與開發(fā)［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18(4):1014.

［3］于日為.湖南野生野金柴常量成分及色素穩(wěn)定性研究［J］.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，10(22):456.

［4］全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編:下冊(cè)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1987:256.

［5］肖坤福，廖曉峰.多穗柯黃酮類化合物的分離及鑒定［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2006，26(3):85-87.

［6］楊大堅(jiān)，鐘熾昌，肖倬殷.野金柴化學(xué)成分研究I.甜味成分［J］.中草藥，1991，22(3):99-101.

［7］廖曉峰，于榮，肖坤福.天然野生植物多穗柯野金柴的化學(xué)成分分析［J］.林產(chǎn)化工通訊，2003，37(6):32-34.

［8］李勝華.多穗柯中黃酮類成分研究［J］.中草藥，2010，41(12):1967-1969.

［9］李勝華.多穗柯化學(xué)成分研究［J］.中藥材，2010，33(4):549-551.

［10］Dong Huaqiang.Preparative separation and identification of the flavonoid phlorhizin from the crude extract ofLithocarpus PolystachyusRehd［J］.Molecules，2007，12(3):552-562.

［11］周文華.湖南野金柴的甜味成分研究［J］.食品科學(xué)，1992(4):17-19.

［12］沈進(jìn).星狀鳳毛菊的化學(xué)成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16(4):391-394.

［13］吳立軍，相婷，侯柏玲，等.女貞子化學(xué)成分的研究［J］.植物學(xué)報(bào)，1998，40(1):83-87.