白背葉黃酮類化學(xué)成分研究

韋 松 曲 磊 鄭作文

（廣西中醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530001）

白背葉為大戟科野桐屬植物白背葉Mallotus apelta(Lour.)Muell.-Arg.的干燥葉［1］，又名白鶴葉、白面戟、白面風(fēng)、白桃葉、白膜樹(shù)。廣泛分布于廣西、河南、安徽、浙江、江西、湖南、廣東、海南等省區(qū)。味微苦、澀、平。白背葉的根、莖、葉入藥。白背葉的藥理作用主要表現(xiàn)為止血、抑菌、抗肝纖維化、抗癌等作用［2］。前期研究發(fā)現(xiàn)白背葉所含的總黃酮和洋芹素對(duì)人肝癌和人胃癌細(xì)胞的增殖均有顯著抑制作用［3-6］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)白背葉的黃酮類化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離，以期得到新的抗癌活性成分。

1 材料和儀器

XT4-100A型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正)，BRUKER TENSOR27 FT-IR；Finnigan Trace DSQ四級(jí)桿質(zhì)譜儀；BRUKER Drx-500MHz、BRUKER AV-400MHz核磁共振波譜儀；柱層析和薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)；聚酰胺粉為浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠生產(chǎn)；AB-8大孔吸附樹(shù)脂為天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所產(chǎn)品；反相硅膠C-18為YMC公司產(chǎn)品；Sephadex LH-20為通用公司產(chǎn)品；所用試劑均為分析純；所用藥材由廣西中醫(yī)學(xué)院藥用植物教研室韋松基教授鑒定。對(duì)照品由中藥化學(xué)教研室提供。

2 提取與分離

白背葉的葉陰干后粉碎得粉末5 kg，用三倍量70%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏275 g。將浸膏混懸分散于2000 mL水中，分別用石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分減壓濃縮，得到石油醚部位28 g，乙酸乙酯部位43 g，正丁醇部位46 g。

乙酸乙酯部位用硅膠柱分離，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)硅膠、聚酰胺、ODS和Sephadex LH-20等柱層析進(jìn)一步分離，得到化合物1～4。正丁醇部位進(jìn)行大孔樹(shù)脂柱層析，以水-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)硅膠、聚酰胺、ODS、Sephadex LH-20等柱層析進(jìn)一步分離，得到化合物5和化合物6。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:淡黃色粉末(MeOH)，mp 343～345℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。IR(KBr)cm－1:3300(OH)，1660(C=O)，1600，1500(芳環(huán))，820(芳香鄰二氫)。與洋芹素對(duì)照品共TLC，在3種展開(kāi)系統(tǒng)下其Rf值完全一致，且混合熔點(diǎn)不下降。Rf值和IR(KBr)vmax均與文獻(xiàn)［7］報(bào)道對(duì)照品Apigenin的數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物1為Apigenin即洋芹素。

化合物2:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，mp 226～228℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。IR(KBr)cm－1:3432(OH)，1652(C=O)，1612，1596，1502，1445(芳環(huán))。與洋芹苷對(duì)照品共TLC，在3種展開(kāi)系統(tǒng)下其Rf值完全一致，且混合熔點(diǎn)不下降。Rf值和IR(KBr)Vmax均與文獻(xiàn)［8］報(bào)道對(duì)照品 Apigenin-7-O-β-D-glucoside即洋芹苷的數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物2為洋芹苷。

化合物3:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。EI-MS m/z:270［M］+，為黃酮苷失去糖支鏈的相對(duì)分子質(zhì)量。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.95(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，H-6')，6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，H-5')，6.85(1H，S，H-3)，6.42(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，12.95(1H，brs，5-OH)，5.09 ～3.26為葡萄糖上的氫信號(hào)，2.15(3H，S，-CH3)。13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:164.3(C-2)，103.1(C-3)，182.0(C-4)，161.4(C-5)，99.6(C-6)，162.7(C-7)，94.8(C-8)，156.9(C-9)，105.2(C-10)，121.0(C-1')，128.6(C-2')，116.0(C-3')，161.1(C-4')，116.0(C-5')，128.6(C-6')，99.5(C-1″)，73.0(C-2″)，76.2(C-3″)，69.8(C-4″)，73.9(C-5″)，63.4(C-6″)。170.2(C=O)，20.6(-CO-CH3)(端甲基)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道 Apigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucoside一致，故鑒定化合物3為Apigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucosid 即芹菜素-7-O-β-D-(6″-O-乙?；?-葡萄糖苷。

化合物4:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。EI-MS m/z:414［M-p-coumaryl］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.94(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，H-6')，6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，H-5')，7.91(2H，d，J=8.3 Hz，H-2?，H-6?)，6.90(2H，d，J=8.3Hz，H-3?，H-5?)，6.80(1H，S，H-3)，6.40(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.76(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，13.00(1H，brs，5-OH)，7.45(1H，d，J=15.5 Hz，H-7?)，6.32(1H，d，J=15.5 Hz，H-8?)，4.48～3.14為葡萄糖上的氫信號(hào)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:162.7(C-2)，103.1(C-3)，182.0(C-4)，156.9(C-5)，99.4(C-6)，164.3(C-7)，94.7(C-8)，161.4(C-9)，105.4(C-10)，121.0(C-1')，128.6(C-2')，116.0(C-3')，161.2(C-4')，116.0(C-5')，128.6(C-6')，99.5(C-1″)，73.0(C-2″)，73.8(C-3″)，70.0(C-4″)，76.2(C-5″)，63.4(C-6″)，124.9(C-1?)，130.2(C-2?)，115.7(C-3?)，159.8(C-4?)，115.7(C-5?)，130.2(C-6?)，145.0(C-7?)，113.7(C-8?)，166.5(C-9?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道 Apigenin-7-O-β-D-(6″-p-coumaryl)-glucoside 即芹菜素-7-O-β-D-(6″-反式-對(duì)-香豆?；?-葡萄糖苷一致，故鑒定化合物4為芹菜素-7-O-β-D-(6″-反式-對(duì)-香豆?；?-葡萄糖苷。

化合物5:淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。ESI-MS m/z:594［M］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:8.00(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，H-6')，6.99(2H，d，J=8.6 Hz H-3'，H-5')，6.75(1H，S，H-3)，13.70(1H，brs，5-OH)；5.03～3.29為兩個(gè)葡萄糖上的氫信號(hào)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:164.1(C-2)，102.6(C-3)，182.3(C-4)，158.7(C-5)，107.6(C-6)，161.3(C-7)，105.3(C-8)，155.2(C-9)，103.7(C-10)，121.6(C-1')，129.1(C-2')，115.9(C-3')，161.2(C-4')，115.9(C-5')，129.1(C-6')，71.0(C-1″)，72.0(C-2″)，77.9(C-3″)，69.1(C-4″)，81.9(C-5″)，59.9(C-6″)，73.4(C-1?)，71.0(C-2?)，78.9(C-3?)，70.6(C-4?)，80.9(C-5?)，61.3(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道Vicenin 2一致，故鑒定化合物5為Vicenin 2。

化合物6 淡黃色粉末(MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色。ESIMS m/z:564［M］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:8.00(2H，d，J=8.5 Hz H-2'，H-6')，6.88(2H，d，J=8.5 Hz H-3'，H-5')，6.75(1H，S，H-3)，13.8(1H，brs，5-OH)，5.05 ～2.49為兩個(gè)糖上的氫信號(hào)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:163.6(C-2)，103.7(C-3)，182.0(C-4)，158.7(C-5)，108.3(C-6)，161.1(C-7)，103.7(C-8)，155.2(C-9)，103.7(C-10)，121.9(C-1')，129.1(C-2')，116.0(C-3')，161.1(C-4')，116.0(C-5')，129.1(C-6')，74.2(C-1″)，70.0(C-2″)，75.1(C-3″)，70.1(C-4″)，71.2(C-5″)，74.6(C-1?)，70.7(C-2?)，73.5(C-3?)，70.1(C-4?)，81.3(C-5?)，61.4(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道Corymboside一致，故鑒定化合物6為Corymboside。

［1］南京藥學(xué)院，《中草藥學(xué)》編寫組.中草藥學(xué)［M］.南京:江蘇人民出版社，1976:591.

［2］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海:上海人民出版社，1977:731.

［3］鄭作文，倫玉寧，毛 健，等.白背葉提取物A對(duì)人腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(12):3029-3030.

［4］夏 星，鄭作文，譚 為，等.白背葉提取物WF對(duì)2215細(xì)胞分泌HBsAg和HBeAg的影響研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(3):631-632.

［5］夏 星，鄭作文，譚 為，等.白背葉黃酮類化合物抗鴨乙型肝炎病毒活性研究［J］.中國(guó)藥房，2010，21(7):590-592.

［6］倫玉寧，鄭作文，鄒 靜，等.白背葉提取物A的體外抗腫瘤活性研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(1):30-31.

［7］王乃麗，向玉霞，凡崢嶸，等.蒙古山蘿卜活性成分的研究［J］.中草藥，1989，20(6):7.

［8］吳桂凡，韋 松，蘭樹(shù)彬，等.白背葉中一個(gè)新的異戊烯基二氫黃酮［J］.中草藥，2006，37(8):1126-1127.

［9］Redaelli C，F(xiàn)ormentini L，Santaniello E.Apigenin 7-glucoside and its 2″-and 6″-acetates from ligulate flowers of Matricaria chamomilla［J］.Phytochemistry，1980，19(5):985-986.

［10］Itokawa H，Suto K，Takeya K.Studies on a novel p-coumaroyl glucoside of apigenin and on other flavonoids isolated from patchouli(labiatae)［J］.Chem Pharmace Bull，1981，29(1):254-256.

［11］黃 瓊，陳麗芬，林翠梧，等.藥用植物戰(zhàn)骨中黃酮類化學(xué)成分及抗氧化作用研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(11):2707.

［12］Besson E，Dombris A，Raynaud J，et al.Corymboside，nouvelle di-C-gl ycosylflavone des Racines de carline corymbosa［J］.Phytochemistry，1979，18:1899-1900.