非小細(xì)胞肺癌組織中PEDF、VEGFR-2的表達(dá)*

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非小細(xì)胞肺癌組織中PEDF、VEGFR-2的表達(dá)*

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-03-19網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150319.0939.009.html

王世君， 黃莉， 謝婷婷， 夏曙華**

(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附院 臨檢科， 貴州 貴陽(yáng)550004)

[摘要]目的： 檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織標(biāo)本中色素上皮衍生因子(PEDF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR-2)的表達(dá)，探討PEDF在NSCLC血管新生中的作用及其與VEGFR-2之間關(guān)系。方法： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)28例NSCLC患者癌組織和遠(yuǎn)離癌組織的對(duì)照組織中PEDF和VEGFR-2的表達(dá)；通過(guò)標(biāo)記CD34計(jì)數(shù)微血管密度(MVD)，比較癌組織中PEDF和VEGFR-2陰陽(yáng)性表達(dá)時(shí)血管新生情況。結(jié)果： 癌組織中PEDF和VEGFR-2表達(dá)陽(yáng)性率分別為71.43%、64.29%，與對(duì)照組織不表達(dá)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PEDF和VEGFR-2的共表達(dá)率在癌組織和對(duì)照組織中分別為39.29%、0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；癌組織MVD(29.30±3.80)低于對(duì)照組織(98.86±18.87)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；癌組織中PEDF陽(yáng)性表達(dá)的MVD顯著低于陰性表達(dá)的MVD，VEGFR-2陽(yáng)性表達(dá)的MVD顯著高于其陰性表達(dá)的MVD，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論： NSCLC細(xì)胞PEDF和VEGFR-2陽(yáng)性表達(dá)百分率高；PEDF陽(yáng)性表達(dá)和VEGFR-2的陰性表達(dá)可能與組織MVD有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]癌,非小細(xì)胞肺； 色素上皮衍生因子； 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2； 新生血管化,病理性； 免疫組織化學(xué)

色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor，PEDF)是一種重要的內(nèi)源性血管生成抑制因子，在同一環(huán)境下PEDF和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，PEDF可通過(guò)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(vascular endothelial growth factor receptor-1， VEGFR-1)有效抑制VEGF誘導(dǎo)的血管生成[1-5]。而VEGF主要通過(guò)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(vascular endothelial growth factor receptor-2， VEGFR-2)結(jié)合，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)反應(yīng)[1-4]。多種實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴(lài)于血管新生，而腫瘤在其生長(zhǎng)、演進(jìn)過(guò)程中又分泌促血管生成的相關(guān)因子,誘導(dǎo)血管新生。目前多采用微血管密度(microvessel density，MVD)作為血管新生觀察指標(biāo)。本研究選取28例非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者的癌組織與遠(yuǎn)離癌組織的自身對(duì)照組織，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)PEDF與VEGFR-2的表達(dá)，探討PEDF在NSCLC血管新生中的作用及其與VEGFR-2之間的關(guān)系，報(bào)告如下。

1材料和方法

1.1　材料

1.1.1標(biāo)本臨床病理學(xué)確診為原發(fā)性NSCLC患者28例，經(jīng)手術(shù)切除獲得NSCLC標(biāo)本，自身對(duì)照組織取材于同一病例距離癌組織4 cm以上的遠(yuǎn)端組織。

1.1.2試劑兔抗人PEDF多克隆抗體和兔抗人VEGFR-2多克隆抗體購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司，鼠抗人CD34單克隆抗體購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2　方法

1.2.1染色應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定PEDF、VEGFR-2及CD34表達(dá)，通過(guò)CD34檢測(cè)反映微血管密度MVD，陽(yáng)性對(duì)照及陰性對(duì)照均由廠家提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.2.2評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)PEDF的陽(yáng)性表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)。VEGFR-2主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞漿及胞膜。陽(yáng)性細(xì)胞胞漿染成棕黃色，結(jié)合著色程度和陽(yáng)性著色范圍進(jìn)行評(píng)分，將未著色、淺黃色、黃棕色、深棕色分別定義為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)。在10×40倍視野下，每張切片至少觀察5個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)數(shù)不同染色級(jí)別細(xì)胞數(shù)， 0或Ⅰ級(jí)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)<25%，為陰性(-)；Ⅰ級(jí)及以上陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥25%，為陽(yáng)性(+)。CD34計(jì)數(shù)按照Weidner等方法并加以改進(jìn)。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1　PEDF、VEGFR-2和CD34表達(dá)及MVD

PEDF、VEGFR-2在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)分別為71.43%、64.29%，與對(duì)照組織中不表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2為31.11、26.53，P<0.01)。CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中，癌組織中MVD平均計(jì)數(shù)(29.30±3.80)低于正常組織(98.86±18.87)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.08，P<0.05)。

2.2　癌組織中PEDF、VEGFR-2表達(dá)與MVD的關(guān)系

癌組織中PEDF陽(yáng)性表達(dá)20例與陰性表達(dá)8例的平均MVD分別為26.29±8.92、36.83±9.91，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.61，P<0.05)；癌組織中VEGFR-2陽(yáng)性表達(dá)18例與陰性表達(dá)10例的平均MVD分別為33.41±9.96、21.90±5.75，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.88，P<0.05)；PEDF和VEGFR-2共表達(dá)在癌組織和對(duì)照組織分別為39.29%和不表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.72，P<0.01)。 癌組織中，PEDF、VEGFR-2共表達(dá)與非共表達(dá)間的MVD分別為30.36±9.18，28.61±11.10，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.45，P>0.05)。癌組織中，PEDF陽(yáng)性表達(dá)的VEGFR-2陽(yáng)性率為55%，陰性表達(dá)的VEGFR-2陽(yáng)性率為87.5%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織中PEDF陽(yáng)性表達(dá)的癌組織中MVD低，而PEDF陰性表達(dá)的癌組織中MVD較高，提示PEDF的表達(dá)可能與NSCLC組織的MVD有關(guān)，這與Mahtabifard等報(bào)道PEDF通過(guò)降低MVD，可以明顯抑制原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺癌的增長(zhǎng)并延長(zhǎng)小鼠的生存期的結(jié)果相一致。PEDF的抗血管生成作用是誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。Vo1peR等研究表明，VEGF等血管生成誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)Fas受體，當(dāng)被其配體Fasl激活時(shí)，即可啟動(dòng)1種caspase依賴(lài)的細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)，而VEGF等血管生成誘導(dǎo)因子對(duì)Fas受體表達(dá)的易受PEDF作用。現(xiàn)已證實(shí)VEGFR-2參與了大多數(shù)實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)，如乳癌、神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等，是判斷這些腫瘤預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)，提示VEGFR-2在腫瘤的血管生成方面起著重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織中VEGFR-2陽(yáng)性表達(dá)的癌組織中MVD高，而VEGFR-2陰性表達(dá)的癌組織中MVD較低，提示VEGFR-2的表達(dá)與NSCLC組織的MVD成正比。VEGFR-2在對(duì)照組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)，而在癌組織中高表達(dá)，不僅表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞，還表達(dá)在腫瘤細(xì)胞。

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGFR-2的陽(yáng)性率在PEDF陰陽(yáng)性表達(dá)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而PEDF與VEGFR-2共表達(dá)的MVD與非共表達(dá)的MVD無(wú)顯著性差異，提示PEDF和VEGFR-2之間無(wú)直接關(guān)系。Crawford等[10]證明雪旺氏細(xì)胞和分化的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞分泌的PEDF可抑制由堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)或VEGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的移動(dòng)，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PEDF能夠抑制VEGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞移行，且具有劑量依賴(lài)現(xiàn)象，其活性比血管抑素、內(nèi)皮抑素活性更高[11]，這可能是PEDF通過(guò)抑制VEGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞移行來(lái)抑制NSCLC新血管的形成，具體機(jī)制還在進(jìn)一步研究中。有學(xué)者指出PEDF抗血管生成的作用在一定程度上是通過(guò)與VEGFR-2的特異性結(jié)合而抑制VEGF實(shí)現(xiàn)的[12]，這與本研究中內(nèi)皮抑素和PEDF可能不是通過(guò)減少VEGFR-2的表達(dá)來(lái)抑制血管新生的觀點(diǎn)相一致。

本實(shí)驗(yàn)表明，NSCLC細(xì)胞中PEDF升高，VEGFR-2降低可能是抑制腫瘤血管新生的機(jī)制之一。

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(2014-12-20收稿，2015-02-05修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 趙毅

The Expression of PEDF and VEGFR-2 in Patients

with Non-small Cell Lung Cancer

WANG Shijun, HUANG Li, XIE Tingting, XIA Shuhua

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofGuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective:To investigate the expression of pigment epithelium derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR-2) in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), the function of PEDF in angiogenesis of non-small cell lung cancer and the relationship with VEGFR-2. Methods: The expressions of PEDF and VEGFR-2 were evaluated by immunohistochemical test in tumor tissues of 28 NSCLC patients and natural tissues. Comparing angiogenesis conditions of positive and negative expressions of PEDF and VEGFR-2 in cancer tissue by marking microvessel density (MVD) of CD34. Results: The positive rates of PEDF and VEGFR-2 were 71.43% and 64.29% respectively in tumor tissues, PEDF and VEGFR-2 didn't express in control group, there was statistical significance between the cancer group and control group(P<0.05); the synchronous expression rate of PEDF and VEGFR-2 in cancer group was markedly higher than that in natural tissue(39.29% and 0%), differences were statistically significant (P<0.01); MVD (29.30±3.80) in cancer group was lower than that of natural tissue group (98.86±18.87)，there was statistical significance(P<0.05); MVD in cancer tissue which positively expressed PEDF was remarkably lower than that of cancer tissue which negatively expressed PEDF, MVD in cancer tissue which positively expressed VEGFR-2 was remarkably higher than that of cancer tissue which negatively expressed VEGFR-2(P<0.05). Conclusions: The positive rate of PEDF and VEGFR-2 were high in NSCLC tissue, and there is a correlation of PEDF positive expression and VEGFR-2 negative expression with tissue MVD.

[Key words]carcinoma, non-small cell lung; pigment epithelium derived factor; vascular endothelial growth factor receptor 2; neovascularization, pathologic; immunohistochemistry

[中圖分類(lèi)號(hào)]R734.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2015)03-0234-03

通信作者**E-mail:xsh523@126.com

[基金項(xiàng)目]*高等學(xué)校特色專(zhuān)業(yè)建設(shè)點(diǎn)[教高函(2010)15]；貴州省高等學(xué)校教改重點(diǎn)項(xiàng)目[黔教高發(fā)(2010)208]；貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院科研基金(k2006-37)