奶牛乳房炎診斷技術(shù)研究進(jìn)展

張慶林 林 源 何 敏

（1.寧夏石嘴山市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，石嘴山 753000；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)，楊凌 712100）

奶生乳房炎是一種常見(jiàn)多發(fā)病之一，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。分為臨床型和隱性型2種。其中，隱性乳房炎發(fā)病率較高。奶牛一旦患病后，不但產(chǎn)乳量和乳的品質(zhì)明顯下降，而且，還可能造成產(chǎn)后發(fā)情期和妊娠期延長(zhǎng)，甚至可能危及到人的健康。

1 癥狀

1.1 臨床型乳房炎

臨床型乳房炎癥狀明顯，輕者表現(xiàn)為乳房皮膚發(fā)紅、乳汁稀薄，有少量絮狀物，用手觸摸患牛乳房，患牛乳房疼痛不明顯。重者患牛表現(xiàn)為體溫升高，食欲減退，乳區(qū)腫脹、質(zhì)地硬，用手觸摸，患牛疼痛明顯，產(chǎn)奶量明顯下降，且乳汁內(nèi)混有大量絮狀物、血液或凝乳塊。因此，臨床型乳房炎根據(jù)臨床表現(xiàn)的癥狀，極易做出判斷。

1.2 隱性乳房炎

隱性乳房炎不表現(xiàn)臨床癥狀，乳汁也無(wú)肉眼可見(jiàn)的變化，只是產(chǎn)奶量下降，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)乳汁略偏堿性，體細(xì)胞數(shù)多達(dá)5×105U∕ml以上。

2 診斷

隱性乳房炎要早診斷、早治療，以降低養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失。

2.1 病原微生物檢查

乳房炎是乳腺受到物理、化學(xué)、微生物學(xué)等刺激所發(fā)生的一類(lèi)炎性變化。主要由多種非特定的病原微生物引起，如細(xì)菌、真菌、病毒等。較常見(jiàn)的有27種，其中細(xì)菌12種，霉形體2種，真菌和病毒7種。將奶牛乳汁樣品進(jìn)行病原微生物的分離培養(yǎng)和鑒定是實(shí)驗(yàn)室診斷奶牛乳房炎病原的一種主要方法。將無(wú)菌采集的新鮮奶樣接種于培養(yǎng)基，經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)、乳汁涂片、革蘭氏染色、鏡檢等反復(fù)純化病原菌。然后，對(duì)已經(jīng)純化的細(xì)菌用生化微量鑒定管進(jìn)行鑒定。如果能檢出乳汁中有病原微生物就可初步診斷為隱性乳房炎。但是，對(duì)于非特異性隱性乳房炎，乳房和乳汁不但沒(méi)有肉眼可見(jiàn)的變化，而且乳汁中檢測(cè)不到病原菌。有些病原菌雖然經(jīng)常存在于乳房?jī)?nèi)，但不一定引起發(fā)病。

乳汁的細(xì)菌培養(yǎng)法只能根據(jù)檢測(cè)出病原菌的種類(lèi)、數(shù)量大致進(jìn)行判斷，而且用生化鑒定管進(jìn)行鑒定至少需要 28 h 才能確診，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、檢測(cè)速度慢。

2.2 乳汁細(xì)胞學(xué)檢查

奶?；既榉垦缀螅橹畜w細(xì)胞數(shù)目，特別是白細(xì)胞數(shù)顯著增加。在乳腺感染細(xì)菌后，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)大量的多形核白細(xì)胞（PMN）進(jìn)入乳腺細(xì)胞。同時(shí)，損傷脫落的上皮細(xì)胞也進(jìn)入乳中，致使乳汁中的體細(xì)胞增加。因此，可以通過(guò)檢測(cè)乳汁中體細(xì)胞的多少來(lái)判斷奶牛是否患有隱性乳房炎，常用的有乳中體細(xì)胞直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。

2.2.1 乳中體細(xì)胞直接計(jì)數(shù)法

國(guó)外專(zhuān)家發(fā)明了直接顯微鏡計(jì)數(shù)法，明確規(guī)定乳汁中細(xì)胞數(shù)超過(guò)5×105/ml診斷為乳房炎。有人認(rèn)為超過(guò)2.5×105/ml即可診斷為乳房炎。但是，中國(guó)農(nóng)科院中獸醫(yī)研究所根據(jù)試驗(yàn)，提出治療乳房炎判定療效標(biāo)準(zhǔn)，每毫升乳汁中細(xì)胞數(shù)降至1×106/ml以下就可定為正常，國(guó)外也有類(lèi)似的報(bào)道。白細(xì)胞分類(lèi)記數(shù)的刻度管檢驗(yàn)法，這是一種根據(jù)噬中性分葉核白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的多少來(lái)判定乳房炎的方法。如果噬中性分葉核白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的12%～20%就定為可疑，20%以上定為乳房炎。另外，國(guó)外已研制的體細(xì)胞自動(dòng)記數(shù)儀，已在乳汁檢測(cè)中得到應(yīng)用。此外，還有熒光電子細(xì)胞計(jì)數(shù)法。

2.2.2 乳汁體細(xì)胞間接計(jì)數(shù)法

CMT（加州乳房炎測(cè)試法），在CMT試液的作用下，乳汁細(xì)胞中的脂類(lèi)物質(zhì)發(fā)生乳化，乳汁細(xì)胞被破壞，釋放出的DNA發(fā)生沉淀或凝塊，根據(jù)其量的多少來(lái)間接判定乳中細(xì)胞數(shù)的多少而達(dá)到診斷的目的方法。中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)以普通洗衣粉為主要成分配制的乳房炎簡(jiǎn)易診斷液，更方便于在牛場(chǎng)推廣使用。另外，東北農(nóng)學(xué)院潘軍等利用十二烷基磺酸鈉加以指示劑制成改進(jìn)CMT試液。這種方法使凝聚反應(yīng)易于判定，同時(shí)可檢出酸度高的乳汁來(lái)。歐陽(yáng)五慶等（1995）在現(xiàn)有各種診斷方法的比較試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采取各種不同新合成的國(guó)產(chǎn)表面活性劑組成多種配方進(jìn)行篩選，選定了SMT-Ⅰ，SMT-Ⅱ，SMT-Ⅲ3種隱性乳房炎診斷液。試驗(yàn)結(jié)果表明，SMT系列診斷液反應(yīng)敏感，尤其是SMT-Ⅰ試液，只需5 s即可顯示結(jié)果。其他間接檢驗(yàn)，有 2%苛性鈉凝乳法和過(guò)氧化氫酶法。過(guò)氧化氫酶法就是通過(guò)檢測(cè)乳中白細(xì)胞的過(guò)氧化氫酶，來(lái)推斷白細(xì)胞的含量。

2.3 乳汁pH檢驗(yàn)法

泌乳奶牛乳汁的正常pH在6.2～6.6之間，牛奶pH值的變化與體細(xì)胞和炎性細(xì)胞的含量呈正相關(guān)，因此可以通過(guò)檢測(cè)乳汁pH值的方法來(lái)檢測(cè)乳房炎。通常使用的方法有溴麝香草酚藍(lán)（BTB）法和乳房炎試紙法。

2.3.1 磨香草酚蘭檢驗(yàn)法（BTB法）

乳房炎發(fā)生時(shí)，乳汁中的pH值上升，通過(guò)測(cè)定乳汁pH值便可以達(dá)到判定目的。在檢驗(yàn)pH值的方法中，操作比較簡(jiǎn)單而且常用的是BTB法。BTB法有2種操作方法即試管法和玻片法。

2.3.2 試紙法

Joshis V等報(bào)道了用奶牛乳房炎試紙進(jìn)行隱性乳房炎現(xiàn)場(chǎng)診斷。現(xiàn)在這一方法已在美、德、法等多個(gè)國(guó)家作為檢測(cè)和控制隱性乳房炎的主要措施，受到牛場(chǎng)主的很大重視。在國(guó)內(nèi)，王林安等在1985年研制出奶牛乳房炎試紙并在我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)中應(yīng)用。日本早已研制出BPB濾紙片診斷乳房炎的方法。這種方法需要把乳汁中的乳清分離出來(lái)作為檢查病樣。張蔓茹等對(duì)BPB法進(jìn)行改進(jìn)，探討了全乳加醋酸和全乳不加醋酸處理的BPB濾紙片快速診斷法。結(jié)果表明，全乳BPB診斷法的準(zhǔn)確性可靠而且靈敏性較高。

2.4 乳汁導(dǎo)電性檢查法

乳腺感染后，血-乳屏障的滲透性改變，Na+、Cl-進(jìn)入乳汁，使乳汁電導(dǎo)率值升高。乳汁電導(dǎo)率法由于乳房炎乳汁理化性質(zhì)發(fā)生改變，可以通過(guò)檢測(cè)乳汁的電導(dǎo)率來(lái)監(jiān)測(cè)隱性乳房炎。祁克宗等（1996）研究表明，隱性乳房炎乳汁的電導(dǎo)率均高于正常值，但在不同的個(gè)體及不同的飼養(yǎng)管理狀況下，乳汁的電導(dǎo)率變化較大，因此，判斷隱性乳房炎的關(guān)鍵是確定不同牛群正常乳汁電導(dǎo)率的閾值。

從20世紀(jì)20年代開(kāi)始，人們就開(kāi)始研究利用隱性乳房炎乳汁的導(dǎo)電性增強(qiáng)的原理來(lái)檢測(cè)隱性乳房炎，但直到20世紀(jì)80年代才開(kāi)始走向?qū)嵱没?。日本首先生產(chǎn)出便攜式的袖珍電子診斷儀。1983年，山西農(nóng)業(yè)大學(xué)郝慶銘教授推出同類(lèi)產(chǎn)品SX-IE型乳牛乳房炎診斷儀。這種儀器不但能區(qū)分健康乳、可疑乳、隱性乳房炎輕度感染乳、中度乳、重度乳等五類(lèi)乳汁，還可初步測(cè)定出乳汁的營(yíng)養(yǎng)成分。隨之，他又研制出具有國(guó)際領(lǐng)先水平的ZRD（以前稱(chēng)CN）型乳牛乳腺炎電子檢測(cè)儀。這種儀器除了能區(qū)分上述五類(lèi)乳外，對(duì)健康乳還能區(qū)分為最佳健康乳、一般健康乳和次健康乳，它體積小，重量輕，可在牛棚旁進(jìn)行測(cè)定。西北農(nóng)林科技大學(xué)研制出的XND-A型奶檢儀，是以導(dǎo)電極為傳感器的便攜式奶檢儀，它體積小，能快速、綜合的檢出摻假奶、酸敗乳和乳房炎乳。

相信隨著科技的發(fā)展，畜牧科研人員一定能研究出診斷更為準(zhǔn)確，便于操作和掌握的新方法，為奶牛養(yǎng)殖戶做出貢獻(xiàn)。