宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合DNA定量分析用于宮頸癌的篩查

許芙蓉

（江北區(qū)中醫(yī)院，重慶 400020）

宮頸癌是婦科高發(fā)的惡性腫瘤之一，因此早期篩查對(duì)防治宮頸癌尤為重要。目前推行最廣、最有成效，又簡便、可靠的防癌篩查方法就是宮頸細(xì)胞學(xué)檢查。近年來，我們采用宮頸刷取材，液基薄層制片，與全自動(dòng)DNA圖像分析系統(tǒng)相聯(lián)合，盡量使宮頸癌及癌前病變的漏診率減少到最低。本文主要探討用宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)合全自動(dòng)DNA圖像分析系統(tǒng)診斷宮頸癌及癌前病變。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2007年5月至2011年10月在我院婦科體檢的3365名婦女進(jìn)行宮頸癌篩查，年齡在28～50歲，平均年齡34歲。標(biāo)本采集由婦科執(zhí)業(yè)醫(yī)師完成。其中258例在陰道鏡指導(dǎo)下進(jìn)行活檢。

1.2 材料與設(shè)備

麥克奧迪（廈門）醫(yī)療有限公司提供宮頸癌篩查相關(guān)試劑及儀器，其中包括宮頸刷、細(xì)胞固定液、標(biāo)簽、申請(qǐng)單及Motic BA600全自動(dòng)DNA倍體定量分析系統(tǒng)。

1.3 標(biāo)本采集

婦科醫(yī)師在陰道窺器暴露宮頸后，將刷頭中央?yún)^(qū)較長的刷絲經(jīng)子宮頸外口插入子宮頸管內(nèi)，周邊區(qū)刷絲抵觸在宮頸黏膜面，順時(shí)或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈。取出宮頸刷，取下刷頭并將其浸泡在細(xì)胞固定液內(nèi)，旋轉(zhuǎn)管蓋后震蕩搖晃，貼標(biāo)簽，送至細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室制片。

1.4 液基薄層制片及染色

將裝有固定液和刷頭的標(biāo)本收集管，加入0.1%DDT消化液，放在振蕩器上震蕩2h。將標(biāo)本轉(zhuǎn)入試管離心（800轉(zhuǎn)/分，5min），棄上清液，加50%酒精分別清洗，離心兩次（800轉(zhuǎn)/分，5min）后，用固定液重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液制成2張薄層細(xì)胞學(xué)標(biāo)本片，其中1片進(jìn)行巴氏染色做常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷，另外1片進(jìn)行Feulgen染色做DNA體定量測定。

1.5 常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷

TBS根據(jù)Bethesda系統(tǒng)分為五級(jí)：①正常。②意義不明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞。③低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變。④高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變或原位癌。⑤鱗癌。

1.6 細(xì)胞DNA體定量分析

所有DNA染色片用全自動(dòng)DNA倍體定量分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描。每張玻片上對(duì)5000個(gè)以上細(xì)胞核進(jìn)行掃描測定，系統(tǒng)根據(jù)不同細(xì)胞所具有的不同特征參數(shù)完成自動(dòng)細(xì)胞分類和計(jì)數(shù)。出現(xiàn)3個(gè)以上細(xì)胞DNA指數(shù)（DI）＞2.5，或10%細(xì)胞數(shù)目處于2.5＞DI＞1.25為陽性。

1.7 診斷標(biāo)準(zhǔn)及活檢

常規(guī)細(xì)胞學(xué)以LSIL及以上病變或細(xì)胞DNA體定量分析結(jié)果為陽性的病例，建議宮頸陰道鏡檢查及活檢。每例標(biāo)本均由有經(jīng)驗(yàn)的病例醫(yī)師檢診。所有病例均采用雙盲法，最后綜合兩種檢測結(jié)果。病理診斷報(bào)告分別為：宮頸炎，CINⅠ、 CINⅡ、CINⅢ或原位癌及鱗癌。

2 結(jié) 果

2.1 常規(guī)細(xì)胞學(xué)與DNA倍體分析結(jié)果

3365例婦女中，常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查見正?；蛄夹?158例占93.85% ，ASCUS135例占4.01% ，LSIL 49例占1.46% ， HSIL 21例占0.62%，宮頸鱗癌（SCC）2例占0.06%；DNA倍體分析中3121例未見DNA倍體異常細(xì)胞，3個(gè)以上細(xì)胞DNA指數(shù)（DI）＞2.5者103例，占3.06%；10%細(xì)胞數(shù)目處于2.5＞DI＞1.25者141例占4.19%。

2.2 組織活檢結(jié)果

常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測陽性72例、細(xì)胞DNA定量分析陽性244例，若做聯(lián)合診斷，有258例被建議在陰道鏡下做了組織活檢。病理診斷報(bào)告宮頸炎151例，CINI56例，CINII 32例，CINⅢ 17例，宮頸鱗狀細(xì)胞癌2例。

2.3 常規(guī)細(xì)胞學(xué)、DNA倍體分析與病理診斷結(jié)果的比較

在得到證實(shí)的51例陽性病例中，DNA檢測可以準(zhǔn)確建議42例（82.35%）活檢，8例因建議復(fù)查而延長活檢時(shí)間，1例漏診（1.96%）。常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測建議51例陽性中35例活檢，8例建議復(fù)查，會(huì)漏診8例。值得大家特別重視的是56例CINI患者中有20例常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測未見異常，32例CINII患者中有6例常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測未見異常，CINⅢ 17例中有2例常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測未見異常。而52例陽性病例中均可見DNA 倍體異常細(xì)胞。

3 討 論

3.1 本篩查中對(duì)11例ASCUS并伴少量DNA倍體異?；颊哌M(jìn)行活檢，發(fā)現(xiàn)了7例CINI、2例CINII，說明臨床醫(yī)師應(yīng)該重視細(xì)胞學(xué)診斷為ASCUS并伴有異倍體細(xì)胞者，需及時(shí)進(jìn)行病理活檢，以避免漏診，當(dāng)然詢問病史，包括家庭史、遺傳史等，也是避免漏診的重要環(huán)節(jié)。凡遇到把握不準(zhǔn)時(shí)，借助陰道鏡檢查來進(jìn)一步判斷是否進(jìn)行活檢是十分必要的。

3.2 國內(nèi)有報(bào)道顯示大多浸潤性宮頸癌均有染色體異常改變，DNA異倍體的出現(xiàn)是染色體異常的表現(xiàn)，同時(shí)也是一種細(xì)胞癌變的特征指標(biāo)[1]。細(xì)胞DNA定量分析圖不僅能識(shí)別宮頸細(xì)胞涂片中的大量DNA異倍體，還能識(shí)別少量DNA異倍體細(xì)胞。本文中52例CIN II及CIN II以上的病例均可見細(xì)胞DNA倍體異常。病變級(jí)別越高，DNA倍體異常細(xì)胞出現(xiàn)的頻率越大。這與國外相關(guān)報(bào)道一致，即在大多數(shù)宮頸癌和HSIL病例中可出現(xiàn)DNA倍體異常細(xì)胞[2]。

3.3 總所周知正常體細(xì)胞其染色體為23對(duì)，只有在細(xì)胞增殖時(shí)，才會(huì)有染色體的復(fù)制與加倍，但這部分細(xì)胞的比例非常小。若出現(xiàn)DNA含量異常增高或是處于增殖的細(xì)胞數(shù)目異常增多，都可能是機(jī)體組織有惡性病變的重要生物學(xué)指征。而且DNA的變化先于形態(tài)學(xué)改變出現(xiàn)，因此細(xì)胞DNA倍體定量分析可實(shí)現(xiàn)癌前病變的早期診斷。且全自動(dòng)DNA體定量分析系統(tǒng)操作簡單、硬件性能穩(wěn)定、對(duì)操作人員技術(shù)要求不高，可充分緩解基層醫(yī)院有經(jīng)驗(yàn)的細(xì)胞學(xué)醫(yī)生缺乏的矛盾，適合基層大規(guī)模宮頸癌的篩查。從本文的資料可見DNA倍體分析與宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查相結(jié)合可提高宮頸癌及癌前病變的檢出率。

[1] 孫小蓉，汪鍵.DNA定量細(xì)胞學(xué)[M]//孫小蓉，汪鍵，車東媛，等.宮頸癌.武漢：湖北科學(xué)技術(shù)出版社，2006：26-84.

[2] Fahmy M，Skacel M，Brainard J，et a1.Chromosomal alterations in low-and high-grade squamous intraepithelial lesions(LSIL and HSIL)of the uterine cervix detected by muhicolor fl uorescence in situ hybridization(FISH)[J].Acta Cytol，2002，46(3)：928.