血凝試驗需要注意的問題

宋紅寶 徐建華 孔繁軍

（吉林大學(xué)第四醫(yī)院檢驗科，吉林 長春 130011）

1 患者狀態(tài)的影響

1.1 年齡

以年齡不同所確定的參考范圍解釋新生兒和嬰兒的止凝血試驗結(jié)果非常重要，很多學(xué)者報道了年齡與性別對血小板功能和凝血活性的影響。

1.2 ABO血型

O型血患者較其他血型患者血漿vWF和因子Ⅷ活性低。

1.3 季節(jié)變化

清晨血小板最易激活，心肌梗死的發(fā)病率最高；寒冷季節(jié)，血凝活性增加，使心肌梗死和猝死的發(fā)病率增加。

1.4 生活與飲食習(xí)慣

吸煙可使血漿纖維蛋白原、vWF和其他凝血因子水平增加，并可使凝血酶生成及血小板激活增加；紅葡萄酒有抗氧化和抗血栓的作用，中度酒（乙醇）的飲用，可抑制血小板的反應(yīng)性。

1.5 藥物

潘生丁、保泰松、阿司匹林等藥物能抑制血小板聚集，這些藥物本身有協(xié)同抗凝的作用或者是影響凝血機制的功能。

1.6 身體狀態(tài)，疾病

如肝炎患者，在干細(xì)胞受損，嚴(yán)重的為肝實質(zhì)受損，導(dǎo)致干細(xì)胞合成纖維蛋白原（FIB）受阻，這樣的結(jié)果是FIB減少，與此同時VK的合成不足或者是嚴(yán)重缺乏直接導(dǎo)致了凝血因子的合成，患者因為凝血因子的缺乏而處于低凝狀態(tài)，有出血傾向的表現(xiàn)，主要表現(xiàn)為患者的PT、APTT大量消耗和產(chǎn)生的FDP拮抗凝血酶的作用，使PT延長。

2 采血的影響

2.1 患者在采血前應(yīng)處于靜息狀態(tài)或抽血前有15～30min的休息。劇烈活動可激活血小板和凝血系統(tǒng)。

2.2 患者的體位在由仰臥變化至直立時，水分也由血管內(nèi)轉(zhuǎn)移至血管外，這樣血漿容量減少了12%，從而使細(xì)胞大分子與蛋白結(jié)合的小分子物質(zhì)濃度相對增加，結(jié)果是血小板及凝血因子的含量增加了，PT與APTT的時間縮短了。

2.3 采血建議使用定量真空采血管。采血后需要立即與抗凝劑混合，為防止產(chǎn)生泡沫、致使凝血蛋白變性應(yīng)當(dāng)上下顛倒至少四次至混勻，在此過程中注意不能用力震蕩以免產(chǎn)生氣泡。

2.4 采血的部位：應(yīng)避免采血部位外傷、炎癥、凍傷、燙傷，選擇血管明顯、易于穿刺的健康部位。

2.5 采血器具的影響：止凝血試驗采血應(yīng)使用真空采血系統(tǒng)并以特定量的枸櫞酸鈉作為抗凝。

2.6 抗凝劑選擇與濃度的影響：美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）的血凝實驗指南H21-A3推薦血凝試驗的抗凝劑為枸櫞酸鈉，配制濃度為3.13%（105mmol/L）或3.2%（109mmol/L）。血：抗凝劑（9∶1）。

3 標(biāo)本的運送和處理

標(biāo)本采集后應(yīng)減少運送環(huán)節(jié)并縮短轉(zhuǎn)運時間，標(biāo)本的傳送應(yīng)有經(jīng)過培訓(xùn)的專人負(fù)責(zé)且有制度約束。

3.1 凝血因子中，以因子Ⅴ和Ⅷ在離體后會隨時間的延長而變性失活，這種失活可隨溫度的升高而加速，其可導(dǎo)致標(biāo)本因從采集到分析時間延長而使PT和APTT時間延長。低溫會損傷血小板，活化因子Ⅶ、Ⅺ，使PT、APTT結(jié)果縮短。標(biāo)本采集后應(yīng)及時檢測，NCCLS推薦止凝血試驗應(yīng)在標(biāo)本采集和離心后4h內(nèi)完成，PT應(yīng)在24h內(nèi)完成。：凝血試驗應(yīng)采用乏血小板血漿，應(yīng)根據(jù)相對離心力、離心機有效離心半徑計算離心速度，一般采用1000rpm/20min、2000～2500rpm/30min或3000rpm/15mn。

3.2 標(biāo)本處理的注意事項

①標(biāo)本有可見的溶血時不應(yīng)采用，因為可能激活凝血因子，干擾終點測定。②使用光學(xué)原理的檢測儀器時，當(dāng)標(biāo)本有黃疸、脂血或影響光散射強度的干擾物質(zhì)時，可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，應(yīng)使用替代方法。③3每6個月或在離心機維修后，應(yīng)驗證離心力和離心時間，以確保離心后血漿血小板的數(shù)量在可接受范圍內(nèi)。

4 選擇試劑以及具體應(yīng)用

4.1 選擇試劑

在目前商品化試劑種類繁多的情形下，具體應(yīng)根據(jù)凝血儀性能的要求，選擇靈敏度高、重復(fù)性佳的三證齊全具備國家批準(zhǔn)文號的保準(zhǔn)化配套試劑，這樣以確保試驗的準(zhǔn)確性。報告方式易選擇INR形式便于根據(jù)試驗結(jié)果比較和估計抗凝劑的療效或者是進(jìn)行指導(dǎo)用藥。因此選擇的試劑應(yīng)標(biāo)有ISI值，ISI值的高低決定了INR的精度，在理論上ISI值越接近1.0效果越佳。

4.2 試劑的使用及保存

①試劑：試劑復(fù)溶一般用蒸餾水及pH 6.0～7.0去離子水，如復(fù)溶劑pH值增高會使凝固時間延長。復(fù)溶后的試劑不能反復(fù)凍融，試劑在不用的時候應(yīng)加蓋保存在2～8℃環(huán)境下，且所有的試劑均應(yīng)在有效期內(nèi)使用。②試劑使用中要注意污染的問題，尤其是試劑瓶蓋的錯蓋造成的交叉污染。

5 操作的因素

操作人員的技術(shù)水平與處理問題的能力對檢驗結(jié)果有很大的影響。因此在操作過程中檢測各種設(shè)置是否正常、試劑等是否合格等等。

另外，臨床標(biāo)本的不可預(yù)見性，可出現(xiàn)不同類型的黃疸、溶血、凝塊、高脂血標(biāo)本，如不排除干擾將影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，血凝試驗的結(jié)果受多種因素的影響，只有將影響因素掌握和了解了，才能盡可能將干擾因素和不利因素排除，真正給臨床以幫助[1,2]。

[1]常劍峰.大劑量β-內(nèi)酰胺類抗生素凝血實驗的干擾[J].臨床檢驗雜志,2000,18(4):211.

[2]徐淑云.臨床用藥指南[M].合肥;安徽科技出版社,1997:58.