姜黃素對(duì)大鼠急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

鄭啟會(huì) 張相斌

（重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院，重慶 402260）

胃黏膜損傷是指胃黏膜在受到一定程度的損傷刺激后，胃黏膜的保護(hù)機(jī)制受損，從而產(chǎn)生以炎性或萎縮性病變?yōu)橹鞯牟±砩磉^(guò)程，胃黏膜損傷是急慢性胃炎、消化性潰瘍重要的發(fā)病機(jī)制。近年研究報(bào)道姜黃素具有抗感染、抗炎、抗氧化等藥理作用，對(duì)胃腸道、肝臟、心血管系統(tǒng)［1］及呼吸系統(tǒng)［2］等均有顯著的保護(hù)作用，本研究中通過(guò)建立急性胃黏膜損傷大鼠模型，觀察姜黃素對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，共40只，雌雄各半，體質(zhì)量160～200 g，購(gòu)自湖南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)室溫度（24±1）℃，相對(duì)濕度55%～65%，12 h明暗交替。自由攝食及飲水，普通飼料喂養(yǎng)。

1.2 藥物及試劑 姜黃素粉劑，1 g/包（南京澤朗生物制藥有限公司）。鹽酸雷尼替丁膠囊，規(guī)格0.15 g（廣州星群（藥業(yè)）股份有限公司）。乙酸、生理鹽水均由本院檢驗(yàn)科提供。大鼠白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子 α（TNF-α）、白細(xì)胞介素 4（IL-4）試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物有限公司。

1.3 分組及造模 40只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法完全隨機(jī)分為正常組、模型組、姜黃素組、雷尼替丁組，每組10只。適應(yīng)喂養(yǎng)1周后，采用改良Okabe乙酸涂抹法［3］制作胃黏膜損傷模型：以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（40 mg/kg）后，打開(kāi)腹腔，游離出胃，以直徑5 mm的濾紙浸過(guò)95%乙酸黏貼在胃前壁胃小彎角切跡下方約5 mm處的漿膜面上，持續(xù)30 s，2次后縫合腹壁，關(guān)閉腹腔。術(shù)后當(dāng)日給予飲水，次日起自由飲食。姜黃素組大鼠給予姜黃素20 mg/（kg·d）灌胃，雷尼替丁組給予雷尼替丁藥液30 mg/（kg·d）灌胃，正常組和模型組均給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥7 d。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) 連續(xù)給藥7 d后，禁食禁水12 h后處死。剪開(kāi)腹腔采用一次性負(fù)壓采血針采集腹主動(dòng)脈血后，迅速取出胃，沿胃大彎剖開(kāi)，用冰生理鹽水沖洗，平展于濾紙上按GUTH法計(jì)算胃黏膜損傷指數(shù)。動(dòng)脈血靜置30 min后，-4℃低溫離心，3000 r/min，離心15 min，收集血清-20℃冰箱保存待測(cè)。 （1）胃黏膜損傷指數(shù)：按照 GUTH 法［4］進(jìn)行。 （2）血清 IL-6、TNF-α、IL-4水平：酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清IL-6、TN-α、IL-4水平。

1.5 一般情況觀察 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，如飲食量、生長(zhǎng)體態(tài)、糞便性狀、精神狀態(tài)、被毛色澤、活動(dòng)狀態(tài)等。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)以（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，方差齊用LSD法，方差不齊用 Dunnett T3，檢驗(yàn)水平 α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 造模大鼠均出現(xiàn)食欲不振，嗜臥，便溏，精神萎靡，生長(zhǎng)遲緩，較正常組明顯滯后。開(kāi)始給藥后，雷尼替丁組、姜黃素組與模型組比較，精神均逐漸有所好轉(zhuǎn)，食量增加，毛色光澤，大便性狀逐漸正常。但模型組大鼠食欲雖逐漸有所增加，但明顯不及雷尼替丁組和姜黃素組，毛色晦暗，皮膚松弛。

2.2 各組胃黏膜損傷指數(shù)比較 見(jiàn)表1。與正常組比較，模型組胃黏膜損傷指數(shù)顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，雷尼替丁組與姜黃素組的損傷指數(shù)均顯著低于模型組（P＜0.05或0.01）。姜黃素組損傷指數(shù)與正常組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表1 各組胃黏膜損傷指數(shù)比較（±s）

表1 各組胃黏膜損傷指數(shù)比較（±s）

與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01；與雷尼替丁組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

組 別 n 胃黏膜損傷指數(shù)正常組 10 10.26±5.21模型組 10 28.79±6.38△△雷尼替丁組 10 21.56±6.41△△▲姜黃素組 10 12.87±5.73▲▲**

2.3 各組血清IL-6、TNF-α、IL-4水平的比較 見(jiàn)表2。模型組大鼠與正常組相比，IL-6、TNF-α 水平顯著升高（P＜0.01），IL-4水平顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，姜黃素組IL-6、TNF-α水平顯著降低（P＜0.01），IL-4 水平顯著升高（P＜0.01），雷尼替丁組 IL-6水平顯著降低，IL-4水平顯著升高 （P＜0.01），而TNF-α無(wú)顯著變化（P＞0.05）。姜黃素組IL-6、TNF-α水平較雷尼替丁組更低（P＜0.05或 0.01），而 IL-4水平更高（P＜0.05）。

表 2 各組血清 IL-6、TNF-α、IL-4 水平比較（pg/mL，±s）

表 2 各組血清 IL-6、TNF-α、IL-4 水平比較（pg/mL，±s）

組 別 n IL-6 TNF-α IL-4正常組 10模型組 10雷尼替丁組 10 15.39±2.51 16.28±2.49 4.41±0.4725.82±3.16△△ 20.21±2.36△△ 4.05±0.23△17.91±3.25△▲▲ 18.82±2.33△ 4.48±0.46▲▲姜黃素組 1014.87±3.84▲▲* 16.13±2.15▲▲**4.91±0.35△▲▲*

3 討 論

機(jī)體在正常狀態(tài)下，胃黏膜的保護(hù)/損傷機(jī)制處于動(dòng)態(tài)平衡，然而，當(dāng)受到一定程度的損傷刺激后，胃黏膜的保護(hù)機(jī)制受損，從而使保護(hù)/損傷機(jī)制失衡［5］，產(chǎn)生以炎性或萎縮性病變?yōu)橹鞯囊幌盗胁±砩磉^(guò)程，最終導(dǎo)致胃黏膜的損傷。胃黏膜的保護(hù)機(jī)制包括黏液-碳酸氫鹽的屏障作用、NO及前列腺素 （PGs）的抗氧化作用及三葉因子（TFFs）的黏膜修復(fù)作用等。損傷機(jī)制包括胃酸及胃蛋白酶的侵蝕、細(xì)胞的氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)。其中炎癥反應(yīng)在胃黏膜損傷機(jī)制中有重要作用［6］。TNF-α、IL-6、IL-10、IL-4是重要的炎癥細(xì)胞因子。其中，TNF-α可以上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，增加白細(xì)胞的炎性滲出。激活單核-吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，增強(qiáng)吞噬殺傷功能，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放。而IL-6可參與淋巴細(xì)胞的增殖分化、炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)功能，IL-4是機(jī)體重要的抗炎因子，由Th2細(xì)胞分泌，可單獨(dú)維持Th2細(xì)胞及B細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，并可通過(guò)負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制抑制Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)而發(fā)揮抗炎作用。因此，當(dāng)胃黏膜受到外界刺激或應(yīng)激時(shí)，TNF-α、IL-6等促炎因子大量釋放，而IL-4的抗炎作用受到抑制，從而表現(xiàn)為組織的炎癥反應(yīng)，因此，通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)狀態(tài)對(duì)胃黏膜損傷可能起到治療作用。

姜黃素是從姜科植物姜黃中提取的一種黃色酸性酚類物質(zhì)，是姜黃的主要藥理活性成分。現(xiàn)代藥理研究表明，姜黃素具有抗腫瘤、護(hù)肝、調(diào)節(jié)免疫、降脂及心血管保護(hù)作用。宋衛(wèi)兵［7］報(bào)道姜黃素可以改善大鼠小腸炎模型腸黏膜的通透性，下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，抑制 iNOS、COX-2活性，從而減輕腸黏膜的脂質(zhì)氧化。而對(duì)大鼠食管癌模型的促發(fā)階段及發(fā)展階段，姜黃素亦有顯著的抑制作用［8］。蔣麗軍等［4］研究姜黃素可有效抑制胃潰瘍模型大鼠胃壁細(xì)胞H+-K+-ATP酶活性和mRNA基因表達(dá)，減少胃酸分泌，減輕胃黏膜損傷。

本研究中，重點(diǎn)研究了姜黃素對(duì)急性胃黏膜損傷中炎癥反應(yīng)的影響。結(jié)果顯示，經(jīng)干預(yù)后，模型組大鼠的胃黏膜損傷指數(shù)顯著升高，IL-6、TNF-α 水平顯著升高（P＜0.01），而 IL-4 水平顯著降低，說(shuō)明，模型組大鼠胃黏膜損傷部位存在較嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體促炎因子水平的升高，抗炎因子水平的下降，保護(hù)/損傷（抗炎/促炎）機(jī)制失衡，導(dǎo)致造模大鼠一系列的體征表現(xiàn)。而正常組的胃黏膜損傷指數(shù)的存在可能與灌胃操作有關(guān)。干預(yù)結(jié)束后，姜黃素組與陽(yáng)性對(duì)照藥雷尼替丁組相比，IL-6、TNF-α水平更低，IL-4水平更高，說(shuō)明，姜黃素對(duì)機(jī)體炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用更加顯著，而姜黃素組大鼠的胃黏膜損傷指數(shù)較雷尼替丁組更低，可能與姜黃素更加顯著的抗炎作用相關(guān)。

綜上，姜黃素對(duì)大鼠的急性胃黏膜損傷有良好的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制IL-6、TNF-α的釋放，增加IL-4水平有關(guān)。

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