天幕毛蟲(chóng)核型多角體病毒對(duì)黃褐天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)的毒力測(cè)定

胡春祥，陸蓓

(東北林業(yè)大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150040)

黃褐天幕毛蟲(chóng)Malacosoma neustria testacea Motschulsky屬鱗翅目Lepidoptera枯葉蛾科Lasiocampidae，又名天幕枯葉蛾［1］，是世界性的大害蟲(chóng)，也是我國(guó)森林、園林、果樹(shù)上的一大害蟲(chóng)［2］。核型多角體病毒(Nucleus Polyhedrosis Virus，簡(jiǎn)稱NPV)，是研究最早和最為詳細(xì)的一類昆蟲(chóng)病毒。全世界已發(fā)現(xiàn)感染這種病毒的昆蟲(chóng)超過(guò)380種，我國(guó)也發(fā)現(xiàn)60多種。近年來(lái)，我國(guó)已從47種不同昆蟲(chóng)體內(nèi)分離出了NPV，其中大部分具有經(jīng)濟(jì)意義，有的嚴(yán)重危害養(yǎng)蠶業(yè)，有的可以用來(lái)控制農(nóng)林害蟲(chóng)［3－4］。

在昆蟲(chóng)病毒中，NPV是研究最多、應(yīng)用最廣的。不同種的NPV對(duì)昆蟲(chóng)的感染力是不同的，同一種病毒，其殺蟲(chóng)活性因不同的品系或分離株而有所不同。昆蟲(chóng)感染NPV劑量愈大，死亡愈快，用棉鈴蟲(chóng)Heliothis armigera NPV感染2齡幼蟲(chóng)，感染劑量為160 PIB/頭和80 PIB/頭，致死中時(shí)(LT50)分別是5．6 d和7．1 d［5］。用油桐尺蠖核型多角體病毒防治油桐尺蠖 Buzura suppressaria Guenee、卷蛾屬昆蟲(chóng)達(dá)90%以上的感染率，并能使該蟲(chóng)在4 d之后降低取食量，18 d以后防治效果可達(dá)53.4% ～93%［6］。為了明確NPV對(duì)天幕毛蟲(chóng)的毒力，作者用不同濃度的NPV以胃毒方式對(duì)黃褐天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)進(jìn)行了毒力測(cè)定。

1 試驗(yàn)

1.1 材料 供試?yán)ハx(chóng)黃褐天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)于2012年5月采自東北林業(yè)大學(xué)哈爾濱林場(chǎng)，在溫度20～24℃，濕度60% ～80%條件下，室內(nèi)飼養(yǎng)。天幕毛蟲(chóng)NPV是將帶毒死蟲(chóng)研碎、離心獲得，帶病毒天幕毛蟲(chóng)死蟲(chóng)由東北林業(yè)大學(xué)生物防治教研室提供。

1.2 方法

1.2.1 病毒提純 將保存于0～4℃冰箱中的帶病毒死蟲(chóng)取出，加入無(wú)菌水，充分?jǐn)嚢?，?jīng)紗布過(guò)濾后，離心 4 次(800 r/min，10 min，常溫)，去雜質(zhì)，取上清液;再將上清液離心(7 000 r/min，8 min，常溫)4次，去除上清液取沉淀，得到天幕毛蟲(chóng) NPV［7－8］。

1.2.2 病毒懸液的制備 將得到的天幕毛蟲(chóng)NPV，在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)器進(jìn)行顆粒計(jì)數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)，算出每克制劑中的總數(shù)［9］。用記數(shù)后的病毒懸液為原液，以10倍遞增加水稀釋成不同濃度的懸浮液。

1.2.3 病毒濃度與幼蟲(chóng)死亡關(guān)系測(cè)定 用1.824×107，1.824 × 106，1.824 × 105，1.824 × 104，1.824×103，1.824×102PIB/mL 6種濃度的天幕毛蟲(chóng)NPV懸液涂抹新鮮的楊樹(shù)葉片接種，并以清水涂抹作為對(duì)照，在20～24℃室內(nèi)飼養(yǎng)幼蟲(chóng)。每24 h檢查幼蟲(chóng)的死亡情況;利用Excel軟件統(tǒng)計(jì)死亡率和校正死亡率;計(jì)算出劑量對(duì)數(shù)值;查出死亡機(jī)率值;求出濃度與死亡率的回歸直線方程及致死中濃度的置信區(qū)間。

1.2.4 感染病毒時(shí)間與幼蟲(chóng)死亡關(guān)系測(cè)定 用1.824×107，1.824 ×106，1.824 ×105PIB/mL 3 種濃度的天幕毛蟲(chóng)NPV懸液浸楊樹(shù)葉片接種，感染黃褐天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)，設(shè)清水對(duì)照，在20～24℃條件下飼養(yǎng)，每天更換新葉。定期檢查、統(tǒng)計(jì)幼蟲(chóng)死亡數(shù);計(jì)算出時(shí)間對(duì)數(shù)值;求出時(shí)間與死亡率的回歸直線方程及LT50。

2 結(jié)果與分析

2.1 天幕毛蟲(chóng)NPV濃度與幼蟲(chóng)死亡的關(guān)系 天幕毛蟲(chóng)NPV的濃度越大，幼蟲(chóng)死亡率越高。當(dāng)病毒濃度為 1.824×107PIB/mL時(shí)，校正死亡率高達(dá)94.57%(表1);隨著病毒濃度的增大，幼蟲(chóng)死亡機(jī)率值也相應(yīng)增大，二者為直線回歸(圖1);回歸方程為y=0.444 3x+3.223 5，天幕毛蟲(chóng)NPV致死中濃度LC50為1.096×104PIB/mL，95%置信空間上限為2.71×104，下限為3.731×103。

表1 天幕毛蟲(chóng)NPV濃度與幼蟲(chóng)死亡的關(guān)系

圖1 幼蟲(chóng)死亡機(jī)率值與濃度的回歸直線

2.1 感染時(shí)間與幼蟲(chóng)死亡率的關(guān)系 用1.824×107，1.824×106，1.824 ×105PIB/ml 3 種濃度的天幕毛蟲(chóng)NPV懸液感染黃褐天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)。感染時(shí)間越長(zhǎng)，幼蟲(chóng)死亡機(jī)率值越大(表2)。1.824×107，1.824×106，1.824×105PIB/mL濃度的時(shí)間與死亡機(jī)率值為直線回歸，回歸方程分別為y=0.013 1x+2.854 2，y=0.010 5x+2.932 9 和 y=0.015x+1.790 3，LT50分別為6.8，8.2 ，9.1 d(圖2 ～4)。方程式中x為時(shí)間，y為死亡機(jī)率值。

表2 不同濃度天幕毛蟲(chóng)NPV感染天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)的時(shí)間與死亡機(jī)率值

圖2 1．824×107PIB/mL濃度時(shí)間與死亡機(jī)率值回歸直線

圖3 1．824×106PIB/mL濃度時(shí)間與死亡機(jī)率值回歸直線

圖4 1．824×105PIB/mL濃度時(shí)間與死亡機(jī)率值回歸直線

3 討論

施用昆蟲(chóng)病毒殺蟲(chóng)劑是控制林木害蟲(chóng)的安全、有效生物措施，在一定生態(tài)體系中完全可以把害蟲(chóng)數(shù)量控制在經(jīng)濟(jì)上能夠接受的水平，達(dá)到防治目的，而且昆蟲(chóng)病毒作為害蟲(chóng)防治手段沒(méi)有化學(xué)農(nóng)藥所帶來(lái)的消極后果。首先，昆蟲(chóng)病毒本來(lái)就是自然界長(zhǎng)期存在的，特別如桿狀病毒(NPV、GV)只感染昆蟲(chóng)綱，對(duì)人畜魚(yú)蝦等安全無(wú)害，不會(huì)造成環(huán)境污染問(wèn)題。其次，病毒的宿主特異性高，人工撒布后可引起種群內(nèi)大流行，不會(huì)因殺滅害蟲(chóng)而造成主要害蟲(chóng)再猖獗和次要害蟲(chóng)大發(fā)生。第三，病毒制劑生產(chǎn)比較容易，使用方便，成本低廉。最后，昆蟲(chóng)病毒使用的后效作用比較明顯，因?yàn)椴∠x(chóng)本身就是繁殖病毒的“小工廠”，尸體成為新的傳染源，遇到合適條件，即可造成再次大流行［10－12］。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，天幕毛蟲(chóng)NPV對(duì)黃褐天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)具有較強(qiáng)的致病力。幼蟲(chóng)感染死亡率與病毒濃度成正比關(guān)系，1.824×107PIB/mL病毒濃度接種天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)后死亡率高達(dá)94.57%，對(duì)天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)的致死中濃度LC50為1.096×104PIB/mL。天幕毛蟲(chóng)NPV的潛伏期比較短，一般10 d左右。NPV病毒的濃度越高，天幕毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)開(kāi)始死亡的時(shí)間就越短，LT50也越小。濃度為1.824×107PIB/mL時(shí)，LT50=6.8 d;1.824×106PIB/mL時(shí)，LT50=8.2 d;濃度為1.824×105PIB/mL時(shí)，LT50=9.1 d。

為了更好地用天幕毛蟲(chóng)核型多角體病毒防治天幕毛蟲(chóng)，建議進(jìn)一步開(kāi)展病毒繁殖工藝、殺蟲(chóng)劑配制技術(shù)和林間應(yīng)用技術(shù)的研究。

志謝:東北林業(yè)大學(xué)森林保護(hù)學(xué)科生物防治教研室提供帶病毒蟲(chóng)體，特此致謝。

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