溶藻弧菌對水產(chǎn)動物致病性及其防治的研究進展

苑淑賓，朱愛意

(浙江海洋學(xué)院海洋科學(xué)學(xué)院，浙江舟山 316004)

溶藻弧菌Vibrioalginolyticus是一種嗜鹽性革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢、莢膜[1]，隸屬于弧菌科Vibrionaceae、弧菌屬Vibrio，是一種常見的海洋致病菌，在世界各地海水及河口處廣泛分布[2]，并且其數(shù)量居海水類弧菌之首[3]。因其生物學(xué)性狀有許多與副溶血性弧菌相似，在《伯杰氏細菌鑒定手冊》第8版(1974)中將其列為副溶血性弧菌生物I型菌(副溶血弧菌為生物l型)?？蓪θ艘饌诟腥?、食物中毒[4]、中耳炎[5]等疾病。同時，它也是魚、蝦、貝等海水養(yǎng)殖動物的一種條件致病菌，當環(huán)境惡化時機體免疫機能下降，溶藻弧菌病容易爆發(fā)[6]，特別當水溫在25～32℃下容易流行[7]，因此養(yǎng)殖動物的溶藻弧菌病多發(fā)生在夏季，爆發(fā)時往往會造成水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)巨大經(jīng)濟損失[8]。

隨著科學(xué)技術(shù)的進步，有關(guān)溶藻弧菌致病性的研究越來越多，人們對其致病機理的認識也越來越詳細。本文主要針對溶藻弧菌的病原性、致病性及其防治的研究進展作了概述。

1 病原學(xué)特征

目前為止，溶藻弧菌能夠使其致病的已見報道的魚類有很多，黑鯛Sparus macrocephlus、大黃魚Pseudosciaena crocea等[9～20]感染溶藻弧菌病的主要癥狀表現(xiàn)為：表皮發(fā)生潰瘍、出血、常有黑斑，眼球凸起、充血，腹部充水腫脹，腎臟發(fā)白，脾臟腫大、常有小瘤伴生，肝臟充血、損傷；平鯛Rhabdosargus sarba、鮸狀黃姑魚Nibea miichthioides[21～23]等感染溶藻弧菌后導(dǎo)致潰瘍病，感染初期病魚體色變深，感染組織常發(fā)生充血、發(fā)炎等癥狀，嚴重時病魚鰭間組織逐漸散開、潰爛，鰭條潰爛，體表其他感染部位可能會發(fā)生損傷、潰爛，再嚴重可能最終導(dǎo)致死亡；溶藻弧菌還能引起日本對蝦Penaeus japonicus[24]、斑節(jié)對蝦Penaeus monodon等[25]的白斑病，主要癥狀表現(xiàn)為：甲殼有白斑；還會導(dǎo)致中國明對蝦Fenneropenaeus chinensis[26-27]黑鰓、褐斑綜合癥，也有人稱之為紅腿病，主要癥狀表現(xiàn)為：部分鰓絲呈深黑色，從甲殼外側(cè)可見頭胸甲殼內(nèi)部有黑色物質(zhì)附著，體表甲殼有黑斑。還可導(dǎo)致凡納濱對蝦Litopenaeus vannamei[28]會染上紅體病，整個蝦體變成紅色，肝胰臟有些腫脹，頭胸甲容易剝離。溶藻弧菌感染不同魚、蝦、貝類，導(dǎo)致的病癥略有不同。

2 致病機理

細菌生物膜(Biofilm，BF)，也可稱為生物被膜，主要是指附著于有生命或無生命物體表面被細菌胞外大分子包裹的有組織的細菌群體[29～32]。BF中存在各種主要的生物大分子，比如蛋白質(zhì)、多糖、DNA、RNA、肽聚糖、脂和磷脂等物質(zhì)。BF的多細胞結(jié)構(gòu)的形成包括細菌起始粘附、BF發(fā)展和成熟等階段，是一個動態(tài)過程。在不同階段，細菌的BF生理生化特性也不同?；【鷮俚募毦鷰缀醵寄苄纬删咦晕冶Ｗo功能的生物膜，使其更易入侵和感染生物體，而BF的存在可能與慢性疾病的產(chǎn)生和疾病的大流行有關(guān)[31]。

總體而言，BF細菌主要有兩種致病機制：

(1)抗免疫機制：對抗宿主機體免疫防御機制，BF細菌可利用多種方式，比如抑制中性粒細胞的趨化作用、減少宿主機體細胞因子(cytokine)的產(chǎn)生、酶解宿主細胞因子等。

(2)抗藥機制：BF的多細胞結(jié)構(gòu)決定了它的抗藥性。BF細菌對抗生素的抗性要超過浮游細菌10～1 000倍。BF抗宿主機體免疫防御的機制或抗藥往往是多個機制協(xié)同起作用。

溶藻弧菌是一種重要的伺機性病原體，在人體和養(yǎng)殖水產(chǎn)動物上能夠引起各種不同癥狀的弧菌病。同其他具生物膜的細菌一樣，溶藻弧菌的致病性由它與宿主細胞間的相互作用決定的，致病過程大致包括粘附、侵襲、體內(nèi)增殖及產(chǎn)生毒素等過程[29]。生物膜細菌主要是在侵襲宿主機體的和增殖的過程中損傷組織細胞，同時在宿主體內(nèi)產(chǎn)生毒素等一些代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物能夠通過破壞或者是干擾宿主的全身或局部的正常新陳代謝或機能，而并且最終引起宿主發(fā)生病變[30]。而致病菌引發(fā)宿主發(fā)生病變過程與其產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物有關(guān)。

2.1 致病因子

溶藻弧菌的致病因子有很多種，主要包括四個大部分，分別是粘附素、胞外產(chǎn)物(如堿性絲氨酸蛋白酶和膠原蛋白酶等)、外膜蛋白及攝鐵系統(tǒng)等。不同的致病因子在其感染宿主的不同時期起著不同的作用。

2.1.1 粘附素(Adhesin)

細菌感染的第一步是粘附，通過粘附，致病菌才有可能侵入宿主體內(nèi)，進而產(chǎn)生并毒素，并最終使宿主致病[31]。通過粘附病原菌在宿主易感細胞上獲得立足點，繁殖，然后通過釋放毒素和酶類損壞宿主組織或細胞，進而導(dǎo)致感染。而細菌的粘附作用主要依靠粘附素來完成，粘附素能夠特異性識別并結(jié)合到宿主細胞。宿主感染致病的一個必要條件就是細菌的粘附，粘附對于細菌侵入宿主并進一步有效發(fā)揮毒素等的作用具有重要意義[32]。

溶藻弧菌粘附素方面的研究不多國外的學(xué)者對溶藻弧菌粘附素作了一定的研究。BAFFONE等[33]研究了20株溶藻弧菌對Hep-2細胞的粘附情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有11株菌對Hep-2細胞有比較強的粘附作用。ZANETTI等[34]的研究發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌可粘附在上皮細胞上。BALEBONA等[35-36]研究表明，溶藻弧菌對鯉魚Cyprinus carpio上皮細胞、黑鯛紅細胞無粘附作用；但是對黑鯛的腸粘膜、鰓、表皮都有較強的粘附作用；但可粘附在大鱗大麻哈魚(King salmon)胚胎細胞上。

粘附一般需要具備兩個基本條件：粘附結(jié)構(gòu)和宿主細胞表面有特異性受體。除了這兩個基本條件之外，粘附還與細菌本身的一些生物學(xué)特性及環(huán)境因子有關(guān)系[28,37]。致病菌對真核細胞表面的粘附一般需要粘附素來介導(dǎo)，粘附素在真核細菌的感染過程中起著重要作用?；【恼掣剿乜梢苑譃楹芏喾N，總體上可分為菌毛粘附素和非菌毛粘附素兩大類，菌毛粘附素包括菌毛、纖毛等；外膜蛋白、脂多糖、胞外多糖等則屬于非菌毛粘附素[38]。

鞭毛在溶藻弧菌粘附宿主過程中起重要作用。MEADOWS[39]提出假設(shè)：細菌的鞭毛在細菌感染的粘附過程中有著無可替代的重要作用。DeBOER等[40]在MEADOWS研究的基礎(chǔ)上作出假設(shè)：周生鞭毛是使溶藻弧菌能夠粘附在宿主或環(huán)境中物體表面的一個重要因素。根據(jù)鞭毛的位置，可以分為兩種鞭毛類型：端鞭毛和周生鞭毛。但是條件不同時，兩種鞭毛的地位和作用也不同。在液態(tài)環(huán)境下以端鞭毛為主，而在固態(tài)環(huán)境下則以后者為主。BELAS等[41]對不同類型鞭毛的弧菌在甲殼質(zhì)上的吸附特性進行了研究，研究結(jié)果表明：當在適應(yīng)表達周生鞭毛的條件下，像溶藻弧菌這樣具有混合類型鞭毛的弧菌，它們在甲殼上的吸附情況符合“朗繆爾吸附等溫式”，但是當菌濃度達到一定程度時會出現(xiàn)吸附飽和的現(xiàn)象；而在適應(yīng)表達端鞭毛的條件下則不符合朗繆爾吸附等溫式”，也無飽和現(xiàn)象。研究結(jié)果也表明了：周生鞭毛菌相對端鞭毛菌對甲殼質(zhì)的親和力要強，而且周生鞭毛菌可以抑制端鞭毛菌的吸附。這些結(jié)果說明周生鞭毛有利于溶藻弧菌的吸附。BORDAS等[42]在BELAS等的基礎(chǔ)上展開了溶藻弧菌對黑鯛表皮粘液的粘附動力學(xué)研究，其研究結(jié)果與BELAS等的結(jié)果一致。SAKAMOTO等[43]對具有不同形態(tài)的2株突變體的運動能力進行比較分析，發(fā)現(xiàn)具有端鞭毛的YM4可以借助其端鞭毛進行運動，而無端鞭毛的NMB198菌株的溶藻弧菌不能運動。

2.1.2 脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)

組成細菌內(nèi)毒素的主要部分是脂多糖(LPS)，它由一條特異鏈、核心多糖和類脂A三部分組成，是革蘭氏陰性菌細胞壁中的主要成分之一。陳昌福等[44]對柱狀嗜纖維菌的研究結(jié)果表明脂多糖是柱狀嗜纖維菌重要的一種共同保護性抗原，如果以脂多糖作免疫抗原，可以顯著增強動物的免疫保護力。在病原弧菌中，鰻弧菌Vibrioanguillarum、創(chuàng)傷弧菌V.vulnificus、副溶血弧菌V.parahaemolyticus、海魚弧菌V.damsela、霍亂弧菌V.cholera、擬態(tài)弧菌V.mimicus等的脂多糖都已經(jīng)被證明與弧菌的致病過程有關(guān)，脂多糖是這些病原弧菌共有的一種重要致病因子[45]。1981年，HISATSUNE等[46]研究了溶藻弧菌的糖組分，發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌的脂多糖與一般的細菌不同，它的內(nèi)核骨架成分不是2-酮-3-脫氧-D-甘露糖型-辛酮糖酸(KDAO)，而是KDAO類似物。陳曉燕等[45,47]研究了點帶石斑魚Epinephelus coioides野生五帶豆娘魚Abudefduf vaigiensis人工感染溶藻弧菌后LPS在魚體組織內(nèi)的分布情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：溶藻弧菌的脂多糖可以被腎臟、脾臟、肝臟、小腸等內(nèi)臟組織吸附。鄢慶枇等[48]對溶藻弧菌脂多糖對大黃魚的毒性情況進行了研究，在對大黃魚肌肉注射劑量為0.2 cm3不同濃度脂多糖溶液的毒性試驗中，脂多糖注射濃度為0.5 mg/cm3時，5 d內(nèi)能引起大黃魚死亡；當脂多糖質(zhì)量濃度達到2.0 mg/cm3時，大黃魚的死亡率達到100%。以劑量為0.2 cm3濃度為9×108個/cm3的溶藻弧菌進行攻毒試驗，40%的大黃魚獲得免疫保護。

2.1.3 攝鐵系統(tǒng)(Ferric uptake system)

鐵攝取系統(tǒng)在溶藻弧菌的生存和致病性方面，都有重要的作用[49]。眾所周知，鐵是血紅蛋白結(jié)合氧原子的一個要素，機體感染溶藻弧菌后，弧菌的攝鐵系統(tǒng)從宿主血紅蛋白中奪取鐵，從而導(dǎo)致宿主機體供氧不足，貧血，甚至死亡。到現(xiàn)在為止，有關(guān)溶藻弧菌攝鐵系統(tǒng)方面的研究還比較少。BALEBONA等[50]研究發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌有能從宿主鐵螯合蛋白中獲得鐵離子的載鐵體。錢榮華等[37]通過對溶藻弧菌鐵調(diào)蛋白基因的克隆、表達及其特征分析研究，結(jié)果顯示：該基因序列全長為994 bp，當中包含開放讀碼框450 bp，編碼150個氨基酸殘基的蛋白，推導(dǎo)的相對分子量為16.78 kDa。確定了在編碼序列的上下游的RBS序列、-10序列、-35序列和2個潛在的轉(zhuǎn)錄終止子，但沒有發(fā)現(xiàn)存在于大腸桿菌fur基因中的“鐵盒子”。氨基酸序列中的高度保守區(qū)域為G46位至D104的位段，在這一位段中包括含組氨酸豐富鐵結(jié)合模型(H3-D-H-LV-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明，fur基因可在大腸桿菌中大量表達，Western-blot分析結(jié)果顯示，fur蛋白具有免疫反應(yīng)性。王蓬勃等[49]研究了海洋動物病原菌溶藻弧菌的鐵攝取機制，溶藻弧菌能夠在高濃度鐵螯合劑2′-2′二聯(lián)吡啶的培養(yǎng)基中存活，在限鐵環(huán)境中，溶藻弧菌生長受到抑制，補加鐵可以消除這種抑制作用。通過鐵載體定量檢測，發(fā)現(xiàn)分離于發(fā)病魚體的溶藻弧菌MVP01產(chǎn)鐵載體量大于分離于海水的菌株NO1111587?；パa實驗證明溶藻弧菌的鐵載體粗提物能夠被鐵載體合成缺陷的大腸桿菌突變株AN93利用，在鐵限制培養(yǎng)環(huán)境中，溶藻弧菌合成了約80 kD鐵調(diào)控外膜蛋白。

2.1.4 外膜蛋白(Outer membrane protein，OMP)

近幾年來，專家學(xué)者們較深入地研究了弧菌的OMP，研究發(fā)現(xiàn)OMP和細菌的粘附及攝鐵過程密切相關(guān)，它們相互起作用，OMP也是一種非常重要的致病因子[52]。一般弧菌具有多種OMP，目前已知弧菌最小分子量為39 kDa的OMP實際上是最小弧菌的血凝素，粘蛋白、胎球蛋白等糖蛋白能夠抑制它的血凝作用，而單糖類、二糖類以及N-乙酞糖類則不會抑制血凝作用，能介導(dǎo)最小弧菌近距離粘附在紅細胞上。研究發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)傷弧菌具有兩種分子量分別為72 kDa和77 kDa的OMP，它們受鐵離子調(diào)節(jié)，主要參與鐵的吸收過程[53]。在鰻弧菌775的攝鐵系統(tǒng)中有一個重要組成部分就是鰻弧菌775的外膜蛋白OM2，它的分子量大小為86 kDa。OMP作為鰻弧菌素與鐵離子復(fù)合物的受體而發(fā)揮作用，而最終使宿主致病。除了OM2之外，在鰻弧菌攝鐵的過程中還有另外一種外膜蛋白OM3也有參與，它的分子量大小為79 kDa。SIMON等[54]的研究認為鰻弧菌的主要外膜蛋白可能是鰻弧菌各個不同血清型的共同抗原。

2.1.5 胞外產(chǎn)物(Extracellular Products，ECP)

胞外產(chǎn)物也是一種重要的致病因子溶藻弧菌可以產(chǎn)生多種胞外產(chǎn)物，這些胞外產(chǎn)物大都與其致病性有關(guān)，比如蛋白酶類及外毒素，它們是導(dǎo)致宿主致病的主要毒力因子[37]。

a.ECPase

ECPase具有淀粉酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶和脂肪酶等4種酶活性，其中淀粉酶的活性最高，酪蛋白酶、脂肪酶活性次之，卵磷脂酶活性較低[56,58]。林業(yè)杰等[55]對溶藻弧菌致病性的研究結(jié)果表明：發(fā)現(xiàn)小鼠感染此菌后3 h即開始發(fā)病，至48 h全部死亡；有5.5%和22.5%的菌株分別產(chǎn)生ST和LT腸毒素。BALEBONA等[56]經(jīng)肌肉將ECPase注射魚體，6 h后觀察到注射部位有細胞溶解的現(xiàn)象，24～72 h就可引起死亡，由此推斷ECPase對魚類細胞有較強的毒性。LEE等[57]研究發(fā)現(xiàn)，溶藻弧菌ECP在對蝦的溶藻弧菌病中起著重要作用，能夠引起日本對蝦血漿中抗脂多糖因子消失、血藍蛋白減少。ECPase能溶解斷斑石鱸Pomadasys hasta、眼斑擬石首魚Sciaenops ocellatus和赤點石斑魚Epinephelus akaara的紅細胞，而不能溶解雞、羊和O型人的紅細胞；對小白鼠和石斑魚的LD50分別為0.08 mg/g和0.17 mg/g，95%可信限分別為0.06～0.12 mg/g和0.07～0.28 mg/g；50 mmol/L EDTA和 100 mmol/L苯甲基磺酰氟能使溶藻弧菌胞外蛋白酶(Extracellular proteinase，ECPase)的活性分別下降83.40%和51.32%；ECPase對熱穩(wěn)定性較差，堿性條件下活性較高，其最適溫度為50℃，最適pH為8.0。

b.溶血素(Helmolysin)

溶血素是一種能特異性地結(jié)合于紅細胞的抗原型的靈敏的、互補固定抗體，這種抗體可由該表面抗原刺激而產(chǎn)生，可導(dǎo)致紅細胞溶解釋放出血紅蛋白?，F(xiàn)已證明溶血素是鰻弧菌和副溶血弧菌重要的毒力因子[59]。BAFFONE等[60]研究了20株海域分離出的溶藻弧菌，其中有1株菌能夠產(chǎn)生腸毒素，并且進而導(dǎo)致小白鼠致病，但這20株溶藻弧菌都沒有溶血活性。權(quán)太淑等[61]從溶藻弧菌中檢出耐熱溶血素，神奈川實驗有86%的菌株呈現(xiàn)陽性。

c.堿性絲氨酸蛋白酶(Alkaline serine exoprotease，AspA)

堿性絲氨酸蛋白酶是一種蛋白酶，在動植物、真菌、病毒以及細菌中廣泛存在。AspA主要參與蛋白質(zhì)的翻譯后加工、組織降解、細胞分裂、病原體感染和細胞凋亡等多個過程。1981年，LONG等[62]首次報道了溶藻弧菌可以產(chǎn)生堿性絲氨酸蛋白酶。CHEN等[63-64]研究認為堿性絲氨酸蛋白酶是溶藻弧菌分泌的主要蛋白酶，能使對蝦致死，可被酶抑制劑苯甲基磺酸氟(PMSF)所抑制。HARE[65-66]和DEANE等[67]對溶藻弧菌能產(chǎn)生堿性絲氨酸蛋白酶的種類以及組氨酸調(diào)節(jié)堿性絲氨酸蛋白酶的產(chǎn)生機制作了研究，發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌能產(chǎn)生6種分子量不同的SDS抗性的堿性絲氨酸蛋白酶，堿性絲氨酸蛋白酶抑制劑可以抑制這些蛋白酶的活性，組氨酸(His)對這6種酶的活性沒有抑制作用，這6種蛋白酶的分子量都小于30 kDa。DEANE[68]用極限培養(yǎng)基或琥珀酸極限培養(yǎng)基得到了3種SDS抗性的堿性絲氨酸蛋白酶的ProA、B、C分子量。1989年，DEANE等[69]已經(jīng)測出了ProA的核苷酸序列。LEE等[70-71]有報道稱溶藻弧菌能產(chǎn)生一種堿性絲氨酸蛋白酶，這種酶的分子量大小為33 kDa。

d.其他胞外產(chǎn)物的研究

除以上介紹的幾種常見的毒素因子外，膠原酶也是研究較多的一種胞外產(chǎn)物。它是一種含鋅的金屬蛋白酶，但是這種酶只作用于膠原或其變性明膠[73-75]。膠原酶的三螺旋結(jié)構(gòu)完好時，不容易降解，必須在受到破壞在后才能降解。內(nèi)源性組織膠原酶雖然在增生性瘢痕中的含量比較高，但是它的活性作用受到TIMP的抑制，因此不能有效地發(fā)揮[76]。

總之，細菌體內(nèi)導(dǎo)致有機體致病的毒力因子可能有很多，一般情況下是多種毒力因子相互作用的結(jié)果。LEE等[51]報道，從死亡及瀕死的龍蝦的肝臟、胰腺和血淋巴中分離出一種弧菌，經(jīng)鑒定為溶藻弧菌，該菌的毒力因子主要為鐵轉(zhuǎn)運系統(tǒng)、細胞外溶血素及ECPase，尤其是細胞外產(chǎn)物起著主要作用。

3 溶藻弧菌病的防治

目前，國內(nèi)有關(guān)溶藻弧菌疫苗的研究相對國外較多，特別是滅活疫苗和亞單位疫苗，國內(nèi)現(xiàn)已有了較為詳細的研究。

免疫刺激是能夠增強魚體免疫力和疾病抵抗力的一種有效方式，因此溶藻弧菌的滅活疫苗能夠在一定程度上提高機體免疫能力。曹劍香等[78]用甲醛滅活溶藻弧菌，將滅活疫苗通過口服免疫凡納濱對蝦，從而獲得了較高的免疫保護率。王海芳等[77]用溶藻弧菌制備全細胞、全細胞-FCA、LPS 3種疫苗，經(jīng)免疫接種后，結(jié)果表明：免疫組的抗體效價及其他各免疫指標較對照組顯著要高，在攻毒之后，都表現(xiàn)出很好的免疫保護力，其中最高的屬全細胞-FCA組，免疫保護力高達85.7%。丁燏等[13]用福爾馬林滅活法溶藻弧菌，制備了溶藻弧菌的全菌疫苗，免疫接種后發(fā)現(xiàn)：滅活疫苗提高了黃鰭鯛Sparus latus的免疫功能，使得在攻毒時黃鰭鯛的死亡率大為減少。

KRUPESHA SHARMA等[31]研究了各種營養(yǎng)濃度和孵化時間條件下的溶藻弧菌生物膜的形成。結(jié)果表明：溶藻弧菌生物膜形成的最佳條件是在0.15%的胰酶解大豆酪蛋白肉湯中培育3 d，生物膜細胞在80℃條件下10 min或者浸在10%的福爾馬林中24 h完全滅活。與游離細胞相比，SDS-PAGE形成的生物膜細胞可以抑制4種蛋白質(zhì)、表達3種蛋白質(zhì)。初步的研究表明溶藻弧菌在刺激斑節(jié)對蝦的非特異性免疫在對熱和對化學(xué)物質(zhì)的抗性等方面生物膜細胞要優(yōu)于游離細胞。因此，只要控制環(huán)境也可以有效地避免溶藻弧菌的感染。

脂多糖作為革蘭氏陰性菌的一種致病因子，在病原菌的感染機制中起著不可替代的作用，但與此同時，脂多糖也可表現(xiàn)出顯著的有益作用，如在輕微的感染條件下，它不僅可以增強機體的非特異性抵抗力，還能夠抗腫瘤以及誘發(fā)機體產(chǎn)生特異性抗體[79]。雖然脂多糖是一種重要的疫苗材料，但是要想將LPS制成疫苗用于水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的病害預(yù)防，首先必需要解決兩個方面的問題：安全性和保護率。由于脂多糖對養(yǎng)殖魚類具有一定的毒性，高劑量時可能會引起養(yǎng)殖動物的死亡，即使在低劑量時，也可能會引起魚體器官的損傷，因此，需要對LPS進行一定的處理，盡可能地降低它的毒性，但同時又要保留它的抗原性。LPS抗體對動物體免疫保護率較低的原因是最主要由于脂多糖的抗原性較弱。只有在其不對機體造成損傷的前提下提高LPS的抗原性，才能提高LPS對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的免疫保護性。

外膜蛋白OMP也是革蘭氏陰性細菌外膜的最重要的一個部分，外膜蛋白與細菌的致病性和免疫保護性緊密相關(guān)，在致病過程中起著重要作用。外膜蛋白主要是在細菌細胞的生理過程中起關(guān)鍵作用，它是制備疫苗的一種重要原材料，具有重要的研究價值和廣闊的開發(fā)前景[80-81]。近年來，病原細菌OMPs的保護抗原性方面一直是外膜蛋白研究的重點內(nèi)容[52,82]。經(jīng)研究，OmpW是一種主要的抗原，它在細菌感染中起著非常重要的作用，現(xiàn)在在霍亂弧菌中已經(jīng)證明OmpW具有一定的免疫原性[83-84]。還有另外一種廣泛分別于弧菌和發(fā)光菌中的外膜蛋白OmpK，在副溶血弧菌中作為一種寬宿主性噬菌體KVP40的受體[85]。把溶藻弧菌外膜蛋白作為模式抗原制備出ISCOMs，經(jīng)免疫大黃魚、進行安全和免疫力試驗測定，試驗結(jié)果表明：溶藻弧菌外膜蛋白是較為安全、純凈的一種抗原；免疫組菌體凝集效價較對照組高，免疫組個體之間也有差異。而免疫組的血清ELISA抗體水平明顯高于對照組；攻毒試驗組存活率可達100%，對照組存活率為20%；試驗表明溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全，免疫大黃魚后可產(chǎn)生免疫保護力[86]。

黃志堅等[87]研究了溶藻弧菌外膜蛋白，結(jié)果表明：溶藻弧菌OMP的分子量為58 kDa，OMP的保護性效果比溶藻弧菌滅活菌苗和溶藻弧菌脂多糖好，因此可以證明溶藻弧菌OMP具有相對較強的免疫原性。楊智慧等[88]對溶藻弧菌、哈維氏弧菌V.harveyi、副溶血弧菌等19株海水魚類致病性弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列進行克隆和測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)OmpK基因核苷酸序列之間的相似度在72%～100%。另外，推測氨基酸序列的相似度71%～100%。該研究不僅在基因水平上證實了海水魚致病性弧菌中廣泛存在外膜蛋白OmpK，而且證明了它們之間具有較高的相似度。因此可以推測：外膜蛋白OmpK是溶藻弧菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌等致病性弧菌的一種共同抗原，具有一定的研究價值，同時也是一種較好的亞單位疫苗原材料，如果將之作為疫苗的話，有可能會使機體同時對幾種病原體產(chǎn)生抗性，為一苗多抗的可能性奠定了理論基礎(chǔ)。

將溶藻弧菌的外膜蛋白為模式抗原，制備出ISCOMs，以此免疫大黃魚，結(jié)果顯示：獲得較高的凝集抗體效價和的免疫保護力，溶藻弧菌的外膜蛋白ISCOMs安全性也較好[86]。這種免疫刺激復(fù)合物可以由皂苷將可溶性抗原成分組裝成，它的免疫功能較其它常規(guī)滅活苗效果顯著，已展現(xiàn)了其優(yōu)越的免疫學(xué)價值，為溶藻弧菌的防治開辟了一條新的道路。

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