瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物的質(zhì)量控制及主要成分體外釋放率的測定

張瑞 張朋 王娜

[摘要] 目的：研究瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物體外釋放率，探討其質(zhì)量控制的方法。方法：采用氣相色譜法對瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物主要成分進(jìn)行體外釋放度的測定。結(jié)果：溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，冰片1、2、24 h的累積釋放率分別為36.79%、54.54%、96.12%，釋放時(shí)間達(dá)24 h。結(jié)論：該制劑方法設(shè)計(jì)合理，穩(wěn)定性良好，制備方法可行，所建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物；體外釋放率；氣相色譜法

[中圖分類號] R944.9[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1673-7210（2011）11（c）-040-03

Quality standard and study on the main ingredients release in vitro of Chuangyangling /Absorbable Gelatin Sponge Compound

ZHANG Rui1, ZHANG Peng2, WANG Na3

1.Department of Stomatology, Zhengzhou Center Hospital, He′nan Province, Zhengzhou 450007, China; 2.School of Stomatology, Zhengzhou University, He′nan Province, Zhengzhou 450052, China; 3.Department of Pharmaceutics, Zhengzhou Center Hospital, He′nan Province, Zhengzhou 450007, China

[Abstract] Objective: To study on the release of Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound and establish its quality standard. Methods: Gas chromatography was used to examine the release rate in vitro of the main ingredients of Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound. Results: The solution was stable within 24 h basically. The release rate of Borneol at 1, 2, 24 h was 36.79%, 54.54%, 96.12% respectively. Conclusion: The method of design is reasonable with well stability. The established quality standard is applicable for the quality control of Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound.

[Key words] Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound; Release rate in vitro; Gas chromatography

瘡瘍靈散是河南武警總隊(duì)醫(yī)院研制的純中藥外用制劑[批準(zhǔn)文號：武制字（2011）F14002]。該藥主要由冰片、珍珠、葛根等組成，具有消炎止疼、活血化瘀、去腐生肌、改善循環(huán)的作用，口腔科主要用于治療拔牙術(shù)后干槽癥的發(fā)生及各種原因所致的口腔黏膜潰瘍性疾病。近年來，國內(nèi)外利用生物粘附技術(shù)發(fā)展起來的黏膜粘附制劑發(fā)展迅速，由于口腔的特殊生理環(huán)境，現(xiàn)用于局部治療口腔黏膜疾病的普通制劑如散劑、涂劑、含片、普通膜劑等多數(shù)在口腔內(nèi)停留時(shí)間短，難以在病變部位達(dá)到持續(xù)有效的藥物濃度，而黏膜粘附制劑則很好地解決了該問題[1]。筆者利用生物粘附原理研制了瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物，并對其主要成分冰片進(jìn)行體外釋放度的研究，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器設(shè)備與試劑

儀器：島津GC-14B氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器，101型電熱鼓風(fēng)干燥箱。

試劑：水楊酸甲酯（中國藥品生物制品檢定所），聚乙二醇20 000（PEG-20M），冰片對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：094328902，龍腦、異龍腦合并計(jì)算，歸一化法測定結(jié)果為98.8%）。

1.2 瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物的制備

取冰片、葛根、珍珠等原藥按一定比例混合，經(jīng)低溫超微粉碎機(jī)在0℃條件下進(jìn)行超微粉碎，過120目篩混合均勻，制成干粉劑，60Co照射后4℃冷藏備用。

精密稱取400 g粉劑，加蒸餾水溶解定容至1 000 ml，充分混勻，配制成濃度為40%的瘡瘍靈原藥溶液，再加入明膠海綿，使其充分吸水膨脹并溶解，經(jīng)打泡、冷凍、干燥，分割成10 mm×10 mm×5 mm大小，制成每塊約含0.4 g藥物的瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物，環(huán)氧乙烷滅菌后保存?zhèn)溆谩?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以Chromosorb W-AW DMCS（60～80目）為擔(dān)體，涂布10% PEG-20M固定相的玻璃柱（3 mm×3 m）；柱溫：140℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；溫度：200℃；載氣（氮?dú)猓┝魉伲?5 ml/min，氫氣流速：45 ml/min，空氣流速：500 ml/min。在該色譜條件下，冰片與內(nèi)標(biāo)物水楊酸甲酯可得到基線分離的色譜圖。色譜柱理論塔板數(shù)按水楊酸甲酯計(jì)算，不低于1 900。取冰片的2種成分龍腦和異龍腦的峰面積之和計(jì)算含量，對照品色譜圖及陰性對照色譜圖，見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每毫升含5 mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取冰片對照品，加乙酸乙酯制成每毫升含5 mg的溶液，搖勻即得對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備取本品1塊，研碎，加乙酸乙酯適量，置10 ml容量瓶中，超聲提取10 min，精密加入內(nèi)標(biāo)液1 ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即得。

2.3 線性范圍考察

分別精密量取1、2、3、4、5 ml對照品溶液，置于10 ml量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)液1ml，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。分別吸取1 μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下操作。以對照品量/內(nèi)標(biāo)量為橫坐標(biāo)，對照品量/內(nèi)標(biāo)物量為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程：Y=1.037 3X+0.024 2，r=0.999 8，線性范圍為0.5～2.5 mg/ml，線性關(guān)系良好。具體數(shù)值見表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液2 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定，記錄峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果顯示，5次進(jìn)樣所得的峰面積值分別為157 526、157 085、157 072、159 427、159 759，平均為158 174，RSD=0.83%（n=5），說明本法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品依法測定5次，記錄峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果顯示，5次進(jìn)樣所得的峰面積值分別為158 276、157 946、156 356、159 461、159 391，平均為158 286，RSD=0.71%（n=5），說明本方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，室溫避光放置，分別于0、3、6、9、12、24 h進(jìn)行測定，記錄峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果顯示，5次進(jìn)樣所得的峰面積值分別為156 576、156 246、156 356、156 461、156 491、149 885，平均為155 336，RSD=1.72%，表明溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

分別取已知含量的供試品溶液共5份，每份2 ml，置10 ml容量瓶中，分別精密加入冰片對照品1 ml，加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，并按上述色譜條件測定，計(jì)算得平均回收率為97.31%（n=9），RSD=0.73%，加樣回收率結(jié)果良好。見表2。

2.8 釋放度測定

瘡瘍靈/海綿明膠復(fù)合物主要成分體外釋放度的測定，按《中國藥典》2010年版二部溶出度測定法第三法裝置，將溶出杯密封，溫度（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100 r/min，釋放介質(zhì)為去氣泡的純化水500 ml。分別于1、2、4、6、8、10、12、14、16、20、24 h取樣5 ml（同時(shí)補(bǔ)加5 ml同溫介質(zhì)），樣品經(jīng)0.8 μm的微孔濾膜過濾。精密吸取樣品溶液2 ml，精密加入水楊酸甲酯的乙酸乙酯溶液1 ml，渦旋混勻5 min，離心（5 000 r/min）10 min。吸取上清液1 μl進(jìn)行測定。測定峰面積，代入回歸方程，計(jì)算樣品含量，以樣品中實(shí)際含量為100％，計(jì)算冰片的累積釋放百分率，結(jié)果見表3。瘡瘍靈/海綿明膠復(fù)合物中冰片的釋放曲線，見圖3。

3 討論

瘡瘍靈散是嚴(yán)格按照中醫(yī)復(fù)方標(biāo)準(zhǔn)和中藥制劑要求，經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝加工制成的外用藥物，對臨床各種頑固性瘡瘍病如壓瘡、糖尿病性潰瘍、下肢潰瘍等均有良好的治療效果[2]?？谇粌?nèi)的瘡瘍性疾病如干槽癥及各種黏膜潰瘍?yōu)榭谇豢瞥Ｒ姴?，且以劇烈疼痛為特點(diǎn)，給患者帶來較大痛苦。譚燕等[3]研究證實(shí)瘡瘍靈用于治療干槽癥止痛效果好，且能促進(jìn)肉芽早期生成，尤其是瘡瘍靈中的主要成分冰片具有止痛理氣、改善循環(huán)的作用。

近年來，以西藥為原料的中藥緩釋、控釋劑型發(fā)展迅速[4]。中藥緩釋制劑劑型多樣，根據(jù)使用方式的不同，可分為外用、內(nèi)用及其他類型。除了對藥物的釋放速度進(jìn)行有效控制外，還出現(xiàn)了控制釋藥部位和控制釋藥時(shí)間的緩釋等控釋系統(tǒng)[5]。筆者在應(yīng)用瘡瘍靈散劑局部治療口腔瘡瘍感染性疾病取得一定療效的基礎(chǔ)上，選取明膠海綿作為支架材料，利用其多孔性結(jié)構(gòu)及生物粘附性特點(diǎn)，研制出瘡瘍靈/明膠海綿粘附緩釋制劑。該劑型的特點(diǎn)是可與口腔黏膜發(fā)生粘附作用，從而加強(qiáng)了藥物與黏膜接觸的緊密性和持續(xù)性，從而達(dá)到藥物的緩釋效果，臨床應(yīng)用于拔牙術(shù)后干槽癥的預(yù)防與治療，也取得了理想的治療效果[6]。

本試驗(yàn)為檢測瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物的藥物釋放情況，對其主要成分冰片進(jìn)行了體外釋放率測定，并對該中藥制劑的質(zhì)量控制進(jìn)行了研究。中成藥由于成分復(fù)雜，分離提取繁瑣，所以一直是藥品檢驗(yàn)的難點(diǎn)?！吨袊幍洹?000年版一部規(guī)定，中藥質(zhì)量控制試驗(yàn)的主要內(nèi)容包括提取條件的選定，檢測指標(biāo)的分離純化，檢測條件的選擇，空白對照試驗(yàn)，加樣回收率試驗(yàn)，精密度試驗(yàn)及穩(wěn)定性考察等。本試驗(yàn)中藥物精密度及重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明，所采用的方法精密度良好，重復(fù)性良好；穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，從而建立了瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物的質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，確保了臨床應(yīng)用的安全性和有效性。

氣相色譜法是《中國藥典》2010年版所收錄的測定中藥有效成分含量的常用方法之一，具有高效能、高選擇性、高靈敏度、速度快等優(yōu)點(diǎn)，特別適用組分較復(fù)雜的生物樣品中藥物的分離測定，所分析的物質(zhì)應(yīng)具有一定揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性。冰片為瘡瘍靈的主要成分，其結(jié)晶成分為右旋龍腦，具有揮發(fā)性，因此對瘡瘍靈/明膠海綿復(fù)合物主要成分冰片的體外釋放度測定選取了氣相色譜法。本試驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，冰片在最初的1 h內(nèi)即開始穩(wěn)定釋放，1 h和2 h的累積釋放率分別達(dá)到了36.79%和54.54%，觀察24 h的累積釋放率超過了90%，說明該制劑中冰片的釋放可以持續(xù)24 h以上。

綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)以冰片為指標(biāo)，采用氣相色譜法測定該制劑中冰片的溶出量，操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于瘡瘍靈/明膠海綿粘附緩釋物的溶出度測定及質(zhì)量控制。該粘附緩釋物實(shí)現(xiàn)了較長時(shí)間的維持治療濃度，達(dá)到了預(yù)期的緩釋效果。中藥現(xiàn)代化的目的之一是減少中藥復(fù)方制劑中的非藥效因素，提高制劑水平，由傳統(tǒng)的膏、丹、丸、散向現(xiàn)代化的劑型發(fā)展[7]。如何優(yōu)化復(fù)合物的配比處方，尋求充分反映藥物療效和安全性的指標(biāo)，是筆者今后研究的方向。

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（收稿日期：2011-09-15）