HPLC測定克霉唑乳膏含量的不確定度評估

[摘要] 目的 建立HPLC法測定克霉唑乳膏含量的不確定度分析方法。方法 通過建立HPLC含量測定法的數(shù)學(xué)模型，找出影響不確定度的因素并對各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評定。結(jié)果 計(jì)算各分量的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度，由此計(jì)算合成不確定度和擴(kuò)展不確定度，從結(jié)果可看出對照品帶來的不確定性較大。結(jié)論 測量不確定度可用于對克霉唑乳膏含量測定結(jié)果的評定。

[關(guān)鍵詞] 克霉唑乳膏；含量；HPLC法；測量不確定度

[中圖分類號] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）36-78-02

Uncertainty Analysis on Assay for Clotrimazole Cream by HPLC

WANG Zhengyu

Suzhou Institute for Drug Control in Anhui Province，Suzhou 234000，China

[Abstract] Objective To establish an uncertainty analysis method for Clotrimazole cream by HPLC. Methods The mathematic model was established by HPLC identified the influence factors impact uncertainty and each component of uncertainty was also evaluated. Results Each component of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters in the procedure，the combined uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained. The results showed the control brought greater uncertainty. Conclusion The mathematic model of uncertainty is establish for applicable to evaluate the accuracy of assay of Clotrimazole cream.

[Key words] Clotrimazole cream；Content；HPLC；Uncertainty of measurement

克霉唑?qū)龠量╊惪拐婢帲瑢Π啄钪榫鷦t可抑制其自芽孢轉(zhuǎn)變?yōu)榍忠u性菌絲的過程；其含量大小直接影響到藥品的治療效果，而在含量的測定過程中存在著許多不確定因素，由于測量誤差的客觀存在，我們對被測量值的不能肯定的程度稱為不確定度。本文依據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行含量測定，并按照測量不確定度評定與表示方法[1]的方法對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行不確定度進(jìn)行分析和評價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與方法

1.1 儀器與試藥

Waters2695-2489型高效液相色譜儀（美國沃特斯公司）；梅特勒XP205型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）（d=0.01mg/0.1mg）；經(jīng)標(biāo)定的A級100mL、50mL單標(biāo)容量瓶。哌拉西林對照品（中國生物制品檢定所提供，批號：100037-200306，含量100%，干燥后使用）；克霉唑乳膏（蕪湖三益制藥有限公司，批號：100204，標(biāo)示量為10g/支，含量0.1g）；甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為重蒸餾水。

1.2 色譜條件

色譜柱：日本島津ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；填充劑：用十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：磷酸鹽溶液-甲醇（25：75）流速1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL；檢測波長：254nm。

1.3 測定法

對照品溶液的制備：取對照品適量（對照品1：11.80mg；對照品2：11.52mg），置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中約含克霉唑0.5mg的溶液。供試品溶液的制備：取本品5支內(nèi)容物混勻，精密稱取適量（供試品1：1.3351g；供試品2：1.3325g），置25mL量瓶中，加甲醇15mL，置50℃水浴中振搖使克霉唑溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置2h，立即濾過，取續(xù)濾液放置室溫，即得。按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測定，結(jié)果計(jì)算出克霉唑的含量為90.3%。

2 結(jié)果

2.1 數(shù)學(xué)模型[2]

本品哌拉西林峰面積按外標(biāo)法計(jì)算，克霉唑含量計(jì)算公式如下：

式中：Y-克霉唑乳膏百分含量，W0-對照品取樣量，Wx-供試品取樣量，AO-對照品中克霉唑的峰面積，S-對照品純度100%，Ax-供試品中克霉唑的峰面積，-克霉唑乳膏的平均裝量，f0-對照品稀釋倍數(shù)，fx-供試品稀釋倍數(shù)?？梢缘贸龇讲睿?/p>

2.2 各分量的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.2.1 對照品純度的相對準(zhǔn)確不確定度 克霉唑?qū)φ掌芳兌葹?00%，對照品純度所引入的不確定度u（S）屬于B類不確定度。參照相關(guān)文獻(xiàn)[3]，按均勻分布換算：u（S）=0.25%/■=0.14%（暫假定其分散區(qū)間的半寬度a=0.25％），故：urel（S）=■=1.4×10-4。

2.2.2 對照品的稱量過程中引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度 （1）天平示值所引起的不確定度：本實(shí)驗(yàn)用天平經(jīng)過專業(yè)機(jī)構(gòu)鑒定合格，電子天平的鑒定證書給出的最大允差為±0.03mg，按矩形分布計(jì)算：u（W01）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）稱量重復(fù)性所引起的不確定度：鑒定證書給出的重復(fù)性誤差為0mg，故u（W02）=0mg對照品采取的是減重法稱量，本實(shí)驗(yàn)共稱取兩份對照品，每份共稱量了兩次（WO1=11.80mg，WO2=11.25mg），故每份對照品稱量的不確定度分別為：■，

所以對照品稱量相對準(zhǔn)確不確定度為

2.2.3 玻璃儀器引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度 ①溫度：容量瓶的校準(zhǔn)是在室溫為20℃下進(jìn)行，本次實(shí)驗(yàn)溫度也保持在20℃，所以由溫度引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度可以忽略不計(jì)。②校準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)過程中用到一個(gè)A級25mL容量瓶，其容量允差為±0.03mL，按均勻分布計(jì)算，由容量允差所引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：u（25）a=0.03/■=1.732×10-2mL。

2.2.4 供試品和對照品稀釋相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度 供試品溶液稀釋和對照品溶液稀釋過程中都用到25mL容量瓶1個(gè)，故由稀釋所引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：urel（f0）=u（25）a/25=1.732×10-2/25=6.928 ×10-4，urel（fx）=6.928×10-4。

2.2.5 供試品稱量引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度 （1）天平示值引起的不確定度：u（Wx2）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）天平稱量重復(fù)性引起的不確定度：u（Wx1）=0/■=0mg。

平行稱量供試品兩份，取樣量分別為：樣品1：1.3351g，樣品2：1.3325g。供試品1的urel（Wx-01）=■=2.599×10-4，供試品2的urel（Wx-02）=■=2.604×10-4。

所以，供試品稱量的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.2.6 對照品峰面積引起的相對不確定度 （1）實(shí)驗(yàn)過程中，第一份對照品共進(jìn)樣5次，峰面積分別為1016497.85、1014151.81、1012991.14、1014735.03、1015554.85，平均峰面積AO2=1014486.14?？梢缘贸鱿鄬ζ頢D=1309.317，urel（AO1）=1.290×10-3。（2）第二份對照品共進(jìn)樣3次，峰面積分別為：1016454.56、1018113.57、1017112.7，平均峰面積AO2=1017226.94。同理可得urel（AO2）=8.21×10-4。對照品溶液色譜峰面積的相對不確定度：urel（AO）= ■=1.327×10-4。

2.2.7 樣品峰面積的相對不準(zhǔn)確度 樣品1峰面積：1048989.68、1059992.96、1048835.30；樣品2峰面積：044787.33、1049553.47、1048858.12，可以得出相對偏差SDX1=6397.778，urel（AX1）=6.078×10-3SDX2=2574585，urel（AX2）=2.457×10-3。所以供試品峰面積的合成相對不確定度：urel（AX）=■=5.691×10-4。

2.3 不確定分量

各因素引起的不確定量進(jìn)行匯總。見表1。

3 討論

筆者通過對HPLC法測定克霉唑乳膏含量中不確定度的逐一分析和量化，評定出測量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。從結(jié)果可以看出不確定度主要來自對照品的稱量，本實(shí)驗(yàn)對照品取樣量相對供試品較小，容易引起誤差也是必然，為了減少誤差，稱量過程中要多注意環(huán)境的影響，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)校正天平，在試驗(yàn)過程中要遵循SOP嚴(yán)格操作，盡量排除偶然誤差，減小系統(tǒng)誤差，把實(shí)驗(yàn)做好做準(zhǔn)。由于本品為乳膏劑，故在取樣時(shí)應(yīng)特別注意，應(yīng)準(zhǔn)確稱量，避免因稱量不準(zhǔn)所引起的含量值不準(zhǔn)。

不確定度的分析，有助于我們發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)過程中出現(xiàn)的偏差，發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，最終能提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，提高實(shí)驗(yàn)者的試驗(yàn)技能[5]。因此，日常檢驗(yàn)工作中，不確定度的評估工作應(yīng)定期開展。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. 測量不確定度評定與表示[M]. JJF1059-1999，北京：中國計(jì)量出版社，1999：19-24.

[2] 沈圓，郭亞東. 淺談測量不確定度評定中“數(shù)學(xué)模型的建立”[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，15（12）：1534.

[3] 黃諾嘉，楊文紅，黃奕濱，等. HPLC法測定蘆薈膠囊中蘆薈苷含量的不確定度評定[J]. 中國藥業(yè)，2009，12（9）：1318-1320.

[4] 李金海. 誤差理論與測量不確定度評定[M]. 北京：中國計(jì)量出版社，2003：148.

[5] 儲黎娟. 冷原子吸收光譜法測定食品中汞不確定度評定[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究，2011，9（13）：153-154.

（收稿日期：2011-11-04）