小紅參抗心肌缺血活性部位的篩選研究

　　摘要：目的：初步篩選小紅參抗心肌缺血的活性部位。方法：采用pit尾靜脈注射方法制備大鼠急性心肌缺血模型。將SD大鼠隨機(jī)分為8組：正常對(duì)照組、模型組、消心痛組、復(fù)方丹參滴丸組、小紅參A、B、C、D藥物組。各組均在連續(xù)灌胃15d后造模，測(cè)定大鼠15、30s，1、3、5、10、20min心電圖，腹主動(dòng)脈采血，制備血清測(cè)定AST、CK、LDH、SOD、MDA含量。結(jié)果：小紅參提取物各極性段物質(zhì)A、B、C、D都具有抗心肌缺血的作用（J點(diǎn)位移與模型組比較P<001），以C段物質(zhì)作用比較明顯；小紅參各極性段物質(zhì)可明顯降低血清心肌酶AST、CK、LDH和MDA的含量，提高血清SOD活性（P<005或P<001），作用以B、C兩段物質(zhì)較為明顯。結(jié)論：小紅參抗心肌缺血的活性部位主要集中在B、C段，作用可能與抗氧化有關(guān)，具體有效成分及作用機(jī)制還待進(jìn)一步研究。
　　
　　
　　關(guān)鍵詞：小紅參；心肌缺血；活性部位；實(shí)驗(yàn)研究
　　中圖分類號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349（2011）11-0070-03
　　小紅參又名云南茜草，為云南特有的民族藥，主要分布于云南中部和北部，是茜草科茜草屬植物滇茜草的干燥根及根莖。具有活血通經(jīng)、祛風(fēng)除濕、調(diào)養(yǎng)氣血等功效。長(zhǎng)期以來(lái)被云南少數(shù)民族應(yīng)用來(lái)治療心血管疾?。ㄐ慕g痛、冠心?。?，并取得良好臨床療效。
　　1實(shí)驗(yàn)材料和儀器
　　11實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD雄性大鼠，體重（180±30）g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2010-22。
　　12藥品與試劑小紅參，購(gòu)自云南中醫(yī)學(xué)院門診。小紅參提取物不同活性部位A、B、C、D，由云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院中藥化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室協(xié)助制備。復(fù)方丹參滴丸（天津天士力制藥有限公司，批號(hào)100207），垂體后葉素（pit，天津生物化學(xué)制藥有限公司，批號(hào)20090702），SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所），MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所），消心痛（江蘇方強(qiáng)制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)20091129）
　　13實(shí)驗(yàn)儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海予華儀器設(shè)備有限公司），AB-8型號(hào)大孔樹脂（安徽三星樹脂科技有限公司），BL-420E生物信號(hào)采集系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），臺(tái)式低速離心機(jī)（上海電機(jī)廠）。
　　2實(shí)驗(yàn)方法
　　21動(dòng)物造模參照文獻(xiàn)方法^[1]制備大鼠急性心肌缺血模型。實(shí)驗(yàn)前一天進(jìn)行pit敏感性篩選。（挑選標(biāo)準(zhǔn)：①具備Q-RS-T波群；②J點(diǎn)上升或ST段抬高或壓低01mv以上，T波先高聳后低平或倒置的大鼠作為實(shí)驗(yàn)用鼠）。正常對(duì)照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水，其余各組尾靜脈注射Pit06U/kg，10s內(nèi)勻速注射完畢。
　　22分組及給藥將挑選出的敏感SD大鼠64只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、消心組、復(fù)方組、小紅參活性部位A、B、C、D組，每組8只。在正常飼養(yǎng)基礎(chǔ)上，同時(shí)給予相應(yīng)成分溶液連續(xù)灌胃15d后復(fù)制模型。
　　23檢測(cè)指標(biāo)
　　231大鼠心電圖末次給藥15h后各組大鼠用10%水合氯醛025mL/100g腹腔注射，麻醉后背位固定。造模前，用BL-420E生物信號(hào)采集系統(tǒng)采集II導(dǎo)聯(lián)正常心電圖5min，造模后，分組記錄各組注射pit完畢后15、30s，1、3、5、10、20min的心電圖。
　　232血清心肌酶（AST、CK、LDH）及超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量待大鼠心電圖記錄完畢后，腹主動(dòng)脈取血，低速離心3000r/min，15min，取血清保存于-20℃冰箱，送云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢測(cè)。
　　233統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS170軟件進(jìn)行處理，所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Ax-G±s）表示，采用單因素方差分析。若滿足正態(tài)方差齊性，用LSD法進(jìn)行分析。方差不齊時(shí)，用Tamhane’sT2法。
　　3結(jié)果
　　31對(duì)大鼠急性心肌缺血心電圖的影響見表1。由表1看出：①模型組與正常對(duì)照組比較，缺血后各時(shí)間點(diǎn)J點(diǎn)與正常對(duì)照組比較均有顯著性差異（P<001），提示造模成功；②各藥物組與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001），表明各藥物對(duì)急性心肌缺血后20min內(nèi)都有不同程度的預(yù)防治療作用；③各藥物組與正常組比較：在急性心肌缺血后5min時(shí)間段與正常對(duì)照組比較具有顯著差異（P<005），表明正常對(duì)照組與藥物治療組之間有差異；在缺血后10min，C藥物組與正常組比較沒(méi)有顯著性差異（P>005），在缺血后20min，B藥物組與正常組比較沒(méi)有顯著性差異（P>005），提示B段、C段物質(zhì)對(duì)心肌缺血具有穩(wěn)定、顯著的保護(hù)作用。
　　32對(duì)大鼠急性心肌缺血心率的影響見表2。由表2看出：①模型組與正常對(duì)照組比較，缺血后各時(shí)間點(diǎn)心率與正常組比較均有顯著性差異（P<001），提示造模成功；②各藥物組與模型組比較：C藥物組與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（15s，P<005），A、B、C、D藥物組與模型組比較，在缺血后30s，1、3、5、10、20min內(nèi)沒(méi)有顯著差異（P>005），但對(duì)缺血后心率改善均有上升趨勢(shì)，提示A、B、C、D對(duì)pit導(dǎo)致的急性心肌缺血心率降低改善作用不明顯。
　　33對(duì)急性心肌缺血大鼠心肌酶的影響見表3。由表3看出：①模型組與正常對(duì)照組比較，缺血前后大鼠血清心肌酶有顯著性差異（P<005），提示造模成功；②各給藥組與模型組比較，大鼠血清心肌酶差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），表明各藥物對(duì)急性心肌缺血后心肌損傷有不同程度的預(yù)防保護(hù)作用；③各藥物組的治療效果以B藥物組效果較為明顯。
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　　34對(duì)急性心肌缺血大鼠超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量的影響見表4。由表4看出：①各給藥組與模型組比較：SOD及MDA均有差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），表明各藥物對(duì)急性心肌缺血均有提高SOD活性，降低丙二醛含量，從而對(duì)心肌缺血發(fā)揮預(yù)防治療的保護(hù)作用；②各藥物組的治療效果：在提高SOD活性上以C物質(zhì)明顯；在降低丙二醛含量上以B物質(zhì)作用明顯。
　　
　　4討論
　　現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為心肌缺血是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)^[2]。心肌缺血是多種心臟疾患的初始階段，臨床上主要表現(xiàn)為冠心病心絞痛、心肌梗死等心肌缺血性癥狀，屬于中醫(yī)“胸痹”、“心痛”范疇。其病性總屬本虛標(biāo)實(shí)，心脈痹阻為發(fā)病主要病機(jī)，基本治法為活血化瘀、宣痹通陽(yáng)、扶正固表等^[3]。
　　心電圖測(cè)量作為無(wú)創(chuàng)性檢查手段，對(duì)心肌缺血的評(píng)估、診斷、預(yù)防等有很大幫助。血清心肌酶為多年來(lái)臨床上作為心肌壞死的檢測(cè)標(biāo)記物，心肌缺血壞死時(shí)，細(xì)胞膜的完整性受到損害，膜的通透性增加，酶由細(xì)胞內(nèi)因釋放而減少，血清中酶活性增加。因此，心肌酶AST、CK、LDH的檢測(cè)對(duì)心肌受損程度具有一定參考價(jià)值，也可以作為心肌梗塞范圍的定量指標(biāo)^[4]SOD是機(jī)體防御新陳代謝及其他生命活動(dòng)中氧自由基損傷和破壞的抗氧化酶。大量氧自由基生成及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)是心肌缺血損傷的主要機(jī)制之一^[5]；MDA是氧自由基攻擊生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其值的高低間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度^[6]。心肌缺血時(shí)氧自由基產(chǎn)生增多，氧自由基與不飽和脂肪酸反應(yīng)形成過(guò)氧化脂質(zhì)，過(guò)氧化酯質(zhì)進(jìn)一步分解成MDA，MDA可與蛋白質(zhì)的游離氨基及核酸等形成Schiff堿，而使生物大分子發(fā)生交聯(lián)，心肌細(xì)胞膜的完整性受到破壞，造成對(duì)機(jī)體的損傷^[7]。
　　本實(shí)驗(yàn)采用pit復(fù)制心肌缺血模型，觀察小紅參醇提物不同極性段對(duì)其保護(hù)作用。陽(yáng)性組（消心痛和復(fù)方丹參滴丸）和小紅參醇提物各段物質(zhì)與模型組比較，心電圖J點(diǎn)位移、SOD活性、心肌酶及MDA含量變化均有顯著差異。其中小紅參醇提物B、C段物質(zhì)能抑制J點(diǎn)抬高作用趨勢(shì)明顯，B段物質(zhì)在減少心肌損傷降低心肌酶AST、CK、LDH活性及MDA含量作用趨勢(shì)顯著，C段物質(zhì)能明顯增加SOD活性。小紅參提取物B、C段物質(zhì)在抗心肌缺血方面具有協(xié)同作用，推測(cè)兩極性段物質(zhì)為抗心肌缺血的活性部位，這一作用可能與抗氧化有關(guān)，其具體有效成分及對(duì)于心肌保護(hù)作用的其他作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
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　　（收稿日期：2011-05-11）