北五味子配方顆粒中五味子甲素及乙素的含量測定

　　摘 要：目的：北五味子配方顆粒中五味子甲素（DSSD）及五味子乙素（r-SSD）含量的HPLC方法學(xué)的建立及研究。方法：采用Hypersil C18（Φ 4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動相為甲醇-水（75：25），流速為1.0 mL/min，檢測波長為254 nm。結(jié)果：北五味子配方顆粒中DSSD及r-SSD含量在既定的HPLC測定方法下，在0.265~1.590 μg 和0.638~3.188 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積的線性關(guān)系良好（R=1.0000，R=0.9999），平均回收率為101.12%和100.38%，RSD（%）值為1.75和1.10。結(jié)論：所建立的HPLC測定方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可用于北五味子顆粒中五味子配方顆粒甲素及乙素的質(zhì)量控制。
　　關(guān)鍵詞：北五味子配方顆粒；五味子甲素；五味子乙素；HPLC
　　中圖分類號：R282 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）08-0067-03
　　
　　中藥配方顆粒又稱免煎中藥，單味中藥濃縮顆粒是將單味中藥飲片經(jīng)過科學(xué)加工并提取中藥材的有效成分，制成的中藥飲片新劑型［1］。北五味子配方顆粒劑是以北五味子藥材或飲片為原料，經(jīng)水提取后加適量輔料，濃縮，噴霧干燥，干式制粒而制成的顆粒，臨床要求其具有原藥材相同的功效［2~4］，用于久咳虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗，盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內(nèi)熱消渴，心悸失眠等［5］。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)中藥傳統(tǒng)湯劑的煎煮方法，建立北五味子顆粒中五味子甲素及乙素含量的HPLC檢測方法，現(xiàn)報(bào)道如下。
　　1 儀器和材料
　　1.1 儀器 美國Agilent 1100 高效液相色譜儀，G1322A-Degasser真空脫氣機(jī)，G1311A-QuatPump四元泵，G1313A-ALS自動進(jìn)樣器，G1311B-DAD檢測器，Agilent Chemstation化學(xué)工作站。AND GR202電子分析天平（0.01mg，日本），CREST超聲波清洗器（美國），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠），KDM型連續(xù)可調(diào)控溫電熱套（山東鄄城）。
　　1.2 試劑 娃哈哈純凈水（桂林娃哈哈飲用水有限公司），五味子甲素（批號110764-200405）、五味子乙素（批號110765-200205）由中國藥品生物制品檢定所提供。HPLC用甲醇為色譜純，其他化學(xué)試劑均為分析純。北五味子配方顆粒，自制。
　　2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
　　2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（75：25）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫。理論板數(shù)按五味子甲素和五味子乙素不低于3000，分離度不低于1.5。
　　2.2 溶液的配劑
　　2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取取減壓干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素對照品適量，分別加甲醇配制成0.100 mg/mL及0.125 mg/mL的溶液，即得。
　　2.2.2 供試品溶液的制備 取北五味子顆粒約1.0 g，精密稱定，加氯仿3 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容? mL量瓶中，作為供試品溶液。
　　2.3 測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按確定的色譜條件測定，五味子甲素及五味子乙素與其他成分分離良好，見圖1~圖3。
　　2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取五味子甲素對照品5.0 mg，加甲醇溶解，定容至20 mL，精密吸取1、2、3、4、5 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取五味子乙素對照品6.25 mg，加甲醇溶解，定容至20 mL，精密吸取1、2、3、4、5 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，測定，以峰面積積分Y對五味子甲素及五味子乙素進(jìn)樣量C（μg）進(jìn)行回歸分析，結(jié)果五味子甲素得回歸方程：Y=1969.96C-0.91，R=1.0000，表明五味子甲素在（0.265~1.590） μg進(jìn)樣范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。五味子乙素得回歸方程為：Y=1925.39C-2.84，R=0.9999，表明五味子乙素在（0.638~3.188） μg進(jìn)樣范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
　　2.5 儀器精密度考察 取五味子甲素對照品溶液（100.0 μg/mL）及五味子乙素對照品溶液（125.0 μg/mL），按上述色譜條件，依法操作測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積，計(jì)算RSD（%）值分別為0.149、0.472，說明儀器精密度很好。
　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液10 μL，按樣品溶液制備方法制備樣品溶液，在2、4、6、8、24、48、72 h時(shí)間間隔進(jìn)行分析，測定五味子甲素及五味子乙素色譜峰面積，計(jì)算RSD（%）值分別為2.02和1.28，表明樣品溶液制備后72 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號北五味子配方顆粒6份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定含量進(jìn)行分析，結(jié)果五味子甲素及五味子乙素的平均含量分別為1.827、4.1657 mg/g，RSD（%）分別為1.84、1.79，表明重復(fù)性較好。
　　2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取已知五味子甲素及五味子乙素準(zhǔn)確含量（五味子甲素0.199 mg/g，五味子乙素0.478 mg/g）的樣品6份，每份取1.0 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，精密加入2.0 mL五味子甲素（0.103 mg/mL）及4.0 mL五味子乙素對照品溶液（0.126 mg/mL），揮去甲醇，按樣品溶液制備方法制備，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定五味子甲素及五味子乙素峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，五味子甲素、五味子乙素加樣回收率的平均值分別為100.80%、100.38%，RSD（%）的值分別2.11、1.10，表明所設(shè)定的測定方法回收率較好，結(jié)果見表1、表2。
　　2.9 樣品的含量測定 取北五味子配方顆粒8批，按上述方法測定，測得配方顆粒五味子甲素平均含量為0.0215%，五味子乙素平均含量為0.0416%，結(jié)果見表3。
　　3 討論
　　中藥配方顆粒是近十年來對傳統(tǒng)中藥飲片應(yīng)用形式的突破，它主要是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，供中醫(yī)師臨床配方使用，具有免煎易服、作用迅速、成分完全、療效確切、安全衛(wèi)生、攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)，更有利于藥房調(diào)劑和藥材資源的深度開發(fā)，有利于中藥的標(biāo)準(zhǔn)化和國際化。實(shí)驗(yàn)建立了北五味子配方顆粒中五味子甲素及乙素的HPLC測定方法，五味子甲素、乙素分離效果較好，方法簡便、迅速。
　　方法學(xué)考察初期，曾用正己烷直接萃取濃縮液3次，將萃取物蒸干，用甲醇溶解定容至5 mL，進(jìn)樣測定，五味子甲素、乙素分離較好；但由于溫度等各方面因素的影響，萃取較困難，且用甲醇不能完全溶解萃取液殘?jiān)?，?shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定。之后，又嘗試將濃縮液直接烘干后，用甲醇超聲提取測定，又因濃縮液較難烘干，所以沒有采用該法。最終采用氯仿超聲提取，提取液蒸干，用甲醇溶解定容至5 mL的方法。結(jié)果表明分離效果良好，方法線性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率等方法學(xué)考察均符合定量測定的要求。目前，為了使配方顆粒的功效及特性盡可能地與中藥湯劑接近，國內(nèi)大部分專家、學(xué)者都主張采用水作為提取溶媒。所以在五味子配方顆粒制備過程中，同樣也采納了這一個(gè)主張，但是在研究中發(fā)現(xiàn)，北五味子提取液中五味子甲素、乙素含量較低，這可能與用水作為溶媒有關(guān)，不同批次五味子甲素、乙素含量有一定差異，生產(chǎn)過程中的工藝參數(shù)的控制以及原料選取應(yīng)予以重視。
　　參考文獻(xiàn)：
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