• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    毛節(jié)纈草抗抑郁和抗腫瘤活性組分的研究

    2011-12-27 03:50:42趙麗輝張一折韓德明孫秀平
    關(guān)鍵詞:小鼠劑量

    趙麗輝,張一折,杜 娟,韓德明,田 堅(jiān),孫秀平

    (1.長(zhǎng)春理工大學(xué)國(guó)際納米光子學(xué)與生物光子學(xué)聯(lián)合研究中心,吉林長(zhǎng)春 130022;2.鄭州大學(xué)生物工程系,河南鄭州 450001)

    毛節(jié)纈草抗抑郁和抗腫瘤活性組分的研究

    趙麗輝1,張一折2,杜 娟1,韓德明1,田 堅(jiān)1,孫秀平1

    (1.長(zhǎng)春理工大學(xué)國(guó)際納米光子學(xué)與生物光子學(xué)聯(lián)合研究中心,吉林長(zhǎng)春 130022;2.鄭州大學(xué)生物工程系,河南鄭州 450001)

    對(duì)毛節(jié)纈草乙醇滲漉提取的濃縮物和藥材蒸餾獲得的水提液中的活性組分進(jìn)行了分析.分別加水混懸后,通過(guò)小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了抗抑郁活性組分;醇提濃縮物加水混懸后用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取、濃縮,各萃取組分通過(guò)MTT比色法測(cè)定了體外培養(yǎng)的Hella細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞的增殖抑制率.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:纈草水提取物具有抗抑郁的活性,纈草乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及萃取后水相對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用均不明顯;而提取物的氯仿萃取相抗腫瘤作用明顯,且表現(xiàn)出一定的劑量相關(guān)性.

    纈草;抗腫瘤;抗抑郁;活性組分

    纈草(ValerianaofficinalisL.)為敗醬科纈草屬多年生野生草本植物,多數(shù)可作藥用,根及根莖是主要入藥部位.在中國(guó)和歐洲,該屬植物具有悠久的藥用歷史,其成分多種多樣,且隨著氣候及生態(tài)環(huán)境的不同而有所不同.纈草主要含環(huán)烯醚萜、倍半萜、生物堿和黃酮4大類型化學(xué)成分[1-2],其中一種新類型天然產(chǎn)物環(huán)烯醚酯類物質(zhì),經(jīng)藥理研究表明具有鎮(zhèn)靜作用,同時(shí)還具有細(xì)胞毒性和抗腫瘤等多種生物活性[3-4].本文對(duì)纈草的化學(xué)組分進(jìn)行了抗抑郁和抗腫瘤活性組分活性研究,以為制備毒副作用小甚至無(wú)毒副作用的新型抗抑郁、抗腫瘤藥物提供理論支持.

    目前治療抑郁癥、腫瘤的藥物服后不僅有不良的反應(yīng),還可產(chǎn)生多種危害,長(zhǎng)期服用,可引起依賴性和耐受性,有的還具有成癮性.這就迫切需要盡快開(kāi)發(fā)研制出療效確切,既能抑郁癥、殺傷腫瘤細(xì)胞,且毒副作用又小的國(guó)產(chǎn)抗抑郁癥、抗腫瘤植物藥[5].中藥抗抑郁癥、抗腫瘤作用具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多效應(yīng)的特點(diǎn),可作用于治療抑郁癥、腫瘤發(fā)生、發(fā)展的多個(gè)環(huán)節(jié);同時(shí)其毒副作用低,能提高機(jī)體免疫力,不易產(chǎn)生耐藥性,為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)[6-7].纈草的活性成分也正是我們要篩選的抗抑郁癥、抗腫瘤藥物之一.

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 材料和試劑

    乙醇溶液(95%)購(gòu)于北京化工廠;PBS液(無(wú)鈣、鎂離子),0.5%胰蛋白酶,3%谷氨酰胺,培養(yǎng)液(RPMI1640+10%小牛血清),MTT(Sigma,5 mg/m L),甲瓚溶解液(10%十二烷基硫酸鈉),吐溫80等試劑均購(gòu)于鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司;安樂(lè)片由四川琦云藥業(yè)有限責(zé)任公司出品;Hella細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞,本實(shí)驗(yàn)室保存.ICR小鼠80只(雌雄各半,體重18~22 g),由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.

    1.2 纈草的提取

    首先將纈草根粗粉,用15倍(質(zhì)量)95%乙醇滲漉提取,收集滲漉液,在78℃以下減壓回收乙醇,得膏狀物;另取纈草根加水蒸餾5 h,將藥渣水相過(guò)濾、減壓濃縮,得水提濃縮液[8].

    1.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

    實(shí)驗(yàn)選取自主活動(dòng)次數(shù)相近的小鼠80只,隨機(jī)分為8組,每組10只,雌雄各半,分籠飼養(yǎng).其中:

    Ⅰ組為陰性對(duì)照組,每日以生理鹽水0.02 m L/g灌胃;

    Ⅱ組為陽(yáng)性對(duì)照組,每日以抗抑郁藥安樂(lè)片20 mg/kg灌胃給藥;

    Ⅲ,Ⅳ組分別以纈草醇提取物100 mg/kg以及200 mg/kg灌胃給藥;

    Ⅴ,Ⅵ組分別以纈草水提取物100 mg/kg以及200 mg/kg灌胃給藥;

    Ⅶ組以纈草揮發(fā)油0.5μL/g灌胃給藥.

    每個(gè)對(duì)照組均需另加劑量為10 m L/L的乳化劑吐溫80,以利于溶解.連續(xù)給藥10 d.

    1.4 纈草乙醇提取物的萃取

    稱取纈草乙醇提取物500 g,分3份分別混懸于500 m L水中,分別用適量的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取,各萃取3次.合并萃取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀依次回收萃取液,得氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和萃取后剩余水相.

    1.5 MTT法

    將傳代腫瘤細(xì)胞懸液離心后,用含10%小牛血清的RPMI1640重懸配成單個(gè)細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,每孔加入100μL,鋪板使待測(cè)細(xì)胞密度為1 000~10 000個(gè)/孔,隨即加入不同濃度的待試藥液.陽(yáng)性對(duì)照組加入5-氟尿嘧啶(5-Fu),溶劑組加0.9%NaCl溶液,容積均為20μL.培養(yǎng)液中藥物終濃度分別為0.05,0.1,0.15,0.02 g/L.37℃,5%CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)5 d后,每孔加入MTT溶液20μL,孵育4 h后每孔加入DMSO 150μL,在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570 nm(630 nm校準(zhǔn))處測(cè)量各孔的吸光值(D(570)值).

    配制濃度為5 mg/m L的MTT:稱取MTT 0.5 g,溶于100 m L的磷酸緩沖液(PBS)或無(wú)酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22μm濾膜過(guò)濾以除去溶液里的細(xì)菌,4℃避光保存.用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果,為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性,MTT的吸光度最好在0~0.7范圍內(nèi),用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量[9].

    2 結(jié)果與分析

    2.1 纈草提取物對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響

    動(dòng)物持續(xù)灌胃給藥11 d,至第11天時(shí),給藥30 min后,將小鼠放入水深為10 cm、高20 cm、直徑10 cm的圓柱形玻璃缸中,每缸一只,水溫25℃,小鼠游泳2 min后,立即開(kāi)始觀察,觀察持續(xù)5 min,記錄此5 min內(nèi)小鼠在水中停止掙扎、或呈漂浮狀態(tài)、或僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的持續(xù)時(shí)間(不動(dòng)時(shí)間),結(jié)果見(jiàn)表1.

    表1 提取物對(duì)小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間的影響

    表1顯示,Ⅲ,Ⅴ與Ⅰ(陰性對(duì)照組)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);Ⅱ,Ⅳ,Ⅵ,Ⅶ與Ⅰ比較有顯著性差異(P<0.05).由此可見(jiàn),纈草醇提物低劑量組、水提物低劑量組對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著影響;纈草醇提物高劑量組、水提物高劑量組均能縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間.

    2.2 纈草提取物對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響

    動(dòng)物灌胃給藥12 d,至第12天給藥30 min后,測(cè)懸尾不動(dòng)時(shí)間:將小鼠尾部后1/3處用鐵夾固定,懸吊于鐵架臺(tái)上,使其頭部向下懸掛,出現(xiàn)不動(dòng)時(shí)用秒表計(jì)時(shí),累計(jì)6 min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間,結(jié)果見(jiàn)表2.

    表2顯示,Ⅲ,Ⅴ與Ⅰ(陰性對(duì)照組)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);Ⅱ,Ⅳ,Ⅵ,Ⅶ與Ⅰ比較有顯著性差異(P<0.05).由此可見(jiàn),纈草醇提物低劑量組、水提物低劑量組對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著影響;纈草醇提物高劑量組、水提物高劑量組均能縮短小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間.

    表2 提取物對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響

    綜合表1、表2可知,纈草醇提物高劑量組、水提物高劑量組能縮短小鼠強(qiáng)迫游泳及懸尾不動(dòng)時(shí)間,有抗抑郁作用,具有較大的研究?jī)r(jià)值.

    2.3 纈草乙醇提取物抗腫瘤實(shí)驗(yàn)

    顯微鏡下觀察,培養(yǎng)后期溶劑組腫瘤細(xì)胞活躍增殖,全視野密集均勻分布,5-Fu和醇提氯仿層萃取物的腫瘤細(xì)胞明顯稀疏,部分細(xì)胞破碎壞死,尤以大劑量組為甚.加入MTT后,溶劑組鏡下可見(jiàn)大量放射叢狀結(jié)晶,5-Fu和醇提氯仿層萃取物組的結(jié)晶隨濃度加大腫瘤細(xì)胞明顯減少.各試劑組在不同濃度下的光密度值見(jiàn)表3及表4.

    表3 MTT比色法測(cè)定纈草提取物對(duì)Hella細(xì)胞的增殖影響

    表4 MTT比色法測(cè)定纈草提取物對(duì)骨髓瘤細(xì)胞的增殖影響

    從表3可以看出,纈草乙醇提取物氯仿萃取相與溶劑組(陰性對(duì)照組)比較有顯著性差異(P<0.05);纈草乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及萃取后水相與溶劑組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);纈草乙醇提取物氯仿萃取相與5-Fu組(陽(yáng)性對(duì)照組)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05).可見(jiàn)纈草乙醇提取物氯仿萃取相具有抗Hella細(xì)胞活性.

    從表4可以看出,纈草乙醇提取物氯仿萃取相與溶劑組(陰性對(duì)照組)比較有顯著性差異(P<0.05);纈草乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及萃取后水相與溶劑組比較無(wú)顯著性差異(P> 0.05);纈草乙醇提取物氯仿萃取相與5-Fu組(陽(yáng)性對(duì)照組)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05).可見(jiàn)纈草乙醇提取物氯仿萃取相具有抗骨髓瘤細(xì)胞活性.

    3 討論

    小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)實(shí)驗(yàn)和小鼠尾懸吊實(shí)驗(yàn)屬于行為絕望實(shí)驗(yàn),被廣泛用于抗抑郁藥的篩選和評(píng)價(jià)[10-11].本研究采用了這兩種抗抑郁動(dòng)物模型,以觀察纈草乙醇提取物、纈草水提取物對(duì)小鼠抑郁狀態(tài)行為的影響,結(jié)果顯示纈草醇提物、水提物均不同程度地縮短了小鼠不動(dòng)時(shí)間,其中纈草水提物抗抑郁作用顯著.纈草醇提物高劑量組、水提物高劑量組能縮短小鼠強(qiáng)迫游泳及懸尾不動(dòng)時(shí)間,有抗抑郁作用,具有極大的研究?jī)r(jià)值.

    采用MTT比色法[12-13],以人體宮頸癌細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞,對(duì)纈草乙醇提取物各萃取相的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示纈草乙醇提取物的乙酸乙酯萃取層、正丁醇萃取層和剩余水層對(duì)體外培養(yǎng)的宮頸癌細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞增殖抑制作用均不明顯;氯仿萃取相抗腫瘤作用顯著,劑量在0.05~0.20 g/L之間抑制作用明顯.

    [1]石晉麗.國(guó)產(chǎn)纈草屬藥用植物資源的研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,2004.

    [2]陳磊,秦路平,鄭漢臣.纈草的化學(xué)成分、植物資源和藥理活性[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2000,18(5):277-279.

    [3]張書(shū)勤,薛存寬,何學(xué)斌,等.纈草環(huán)烯醚萜酯體外抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,27(1):27-29.

    [4]張振學(xué),姚新生.藥用植物纈草的生物活性物質(zhì)研究進(jìn)展與開(kāi)發(fā)[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2000,17(3):222-225.

    [5]吳敏.中醫(yī)藥防治抑郁癥的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2006,12(5):82.

    [6]梁紅,鐘振國(guó).中藥抗腫瘤作用的途徑和作用靶位點(diǎn)的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)中藥,2006,24(11):2086-2088.

    [7]豆長(zhǎng)明.中藥抗腫瘤作用機(jī)制研究態(tài)勢(shì)評(píng)析[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,21(3):361.

    [8]李瑤,齊曉麗,孟祥穎,等.竹葉中黃酮提取純化工藝研究[J].東北師大學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2006,38(1):91-94.

    [9]施汀蘭,楊雪,冉長(zhǎng)情.中藥抗腫瘤作用研究概況[J].重慶中草藥研究,2008,12(2):32-35.

    [10]PORSOLT R D,LEPICHON M,JALFRE M,et al.Depression:a new animal model sensitive to antidepressant treatment[J].Nature,1977,266(5604):730-732.

    [11]MONGINI F,KELLER R,DEREGIBUS A,et al.Personality traits,depression and migraine in women:a longitudinal study[J].Cephalalgia,2003,23(3):186-192.

    [12]姚祺,李太原.大腸癌細(xì)胞體外培養(yǎng)藥敏試驗(yàn)與臨床特征關(guān)系探討[J].實(shí)用癌癥雜志,2006,21(6):564-566.

    [13]安曉雯,劉巨濤,范圣第.Schiff堿氧釩配合物、載藥脂質(zhì)體的合成與抑瘤作用研究[J].東北師大學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2010,42(2):86-90.

    Studies of activities component of antidepressie and anticancer onValerianaofficinalisL.

    ZHAO Li-h(huán)ui1,ZHANG Yi-zhe2,DU Juan1,HAN De-ming1,TIAN Jian1,SUN Xiu-ping1

    (1.International Joint Research Center for Nanophotonics and Biophotonics,Changchun University of Science and Technology,Changchun 130022,China;2.Bioengineering Department,Zhengzhou University,Zhengzhou 540001,China)

    In this report,obtained ethanol concentrate by using percolation,and waterextract by distillation.Add water after suspension,detect antidepressant active component by the mice in vivo.Using chloroform,ethyl acetate,andn-butanol ordinal extraction,ethanol concentrate add water after suspension,get extract and extraction surplus water phase concentrate.Each extraction is determinede on inhibition rate of Hella cells and mylenoma in vitro by MTT colorimetric.The result shows that water extract has antidepressant activity,ethyl acetate extract phase,n-butanol extractphase and surplus water phase of ethanol extractive has not a significant action in inhibition of cell proliferation.The CHCl3extract phase of ethanol extractive is effective with tumor,and it also shows some of the dose correlation.

    ValerianaofficinalisL.;anti-tumor;antidepressie;active component

    R 284

    360·4010

    A

    1000-1832(2011)03-0122-04

    2011-04-12

    吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20070902-02).

    趙麗輝(1966—),女,博士,教授,主要從事生物化學(xué)和分子生物研究.

    方 林)

    猜你喜歡
    小鼠劑量
    課堂內(nèi)外·初中版(科學(xué)少年)(2023年10期)2023-12-10 00:43:06
    ·更正·
    中藥的劑量越大、療效就一定越好嗎?
    不同濃度營(yíng)養(yǎng)液對(duì)生菜管道水培的影響
    90Sr-90Y敷貼治療的EBT3膠片劑量驗(yàn)證方法
    小鼠大腦中的“冬眠開(kāi)關(guān)”
    米小鼠和它的伙伴們
    Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
    加味四逆湯對(duì)Con A肝損傷小鼠細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用
    高劑量型流感疫苗IIV3-HD對(duì)老年人防護(hù)作用優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)劑量型
    国产精品久久久av美女十八| 国产精品国产三级国产专区5o| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产精品999| 久久99一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 久久国产精品人妻蜜桃| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 一级片免费观看大全| 99久久精品国产亚洲精品| 色视频在线一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产av国产精品国产| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 波多野结衣av一区二区av| 天天添夜夜摸| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 精品久久久精品久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲精品美女久久av网站| 久久免费观看电影| 大片电影免费在线观看免费| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日日爽夜夜爽网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| av欧美777| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品一二三区在线看| 一进一出抽搐动态| 欧美少妇被猛烈插入视频| 黄色毛片三级朝国网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 久久av网站| cao死你这个sao货| 正在播放国产对白刺激| 国产精品一二三区在线看| 午夜福利一区二区在线看| 欧美激情高清一区二区三区| 免费不卡黄色视频| 丁香六月欧美| 国产深夜福利视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲av男天堂| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | av片东京热男人的天堂| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产激情久久老熟女| 热99国产精品久久久久久7| 91成人精品电影| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久天堂一区二区三区四区| 一级片免费观看大全| 成年女人毛片免费观看观看9 | 日韩中文字幕视频在线看片| 水蜜桃什么品种好| 在线精品无人区一区二区三| 99久久国产精品久久久| 中文字幕高清在线视频| 18禁观看日本| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 一二三四在线观看免费中文在| 午夜免费观看性视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品一二三区在线看| 亚洲av美国av| 日本av免费视频播放| 国产一卡二卡三卡精品| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 女人久久www免费人成看片| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品高清国产在线一区| 在线观看人妻少妇| 久久人妻熟女aⅴ| 少妇的丰满在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | a在线观看视频网站| 男女国产视频网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 最近最新免费中文字幕在线| av网站免费在线观看视频| 男女免费视频国产| 亚洲av美国av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| av又黄又爽大尺度在线免费看| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲欧洲日产国产| 国产99久久九九免费精品| 91九色精品人成在线观看| 丝袜脚勾引网站| 国产精品一二三区在线看| 久久久国产欧美日韩av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 国产精品影院久久| 中亚洲国语对白在线视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本av手机在线免费观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲成人国产一区在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| netflix在线观看网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品高清国产在线一区| 老熟女久久久| 伊人亚洲综合成人网| www.熟女人妻精品国产| 午夜精品国产一区二区电影| 99国产精品一区二区蜜桃av | 免费看十八禁软件| 大片免费播放器 马上看| av在线老鸭窝| 超色免费av| 色视频在线一区二区三区| 亚洲 国产 在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 老司机深夜福利视频在线观看 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩一区二区三区影片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 性少妇av在线| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品.久久久| 99热网站在线观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 最新在线观看一区二区三区| 国产日韩欧美视频二区| 午夜福利免费观看在线| 多毛熟女@视频| 在线观看www视频免费| 国产精品二区激情视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产片内射在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产三级黄色录像| av网站在线播放免费| 久久国产精品影院| 亚洲av美国av| 亚洲免费av在线视频| 一区二区三区乱码不卡18| 青春草视频在线免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 在线观看舔阴道视频| 国产xxxxx性猛交| 1024视频免费在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 大香蕉久久网| 免费av中文字幕在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品.久久久| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 97精品久久久久久久久久精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 制服诱惑二区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲精华国产精华精| 精品少妇久久久久久888优播| 精品人妻1区二区| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 日本91视频免费播放| 丝袜人妻中文字幕| 一本大道久久a久久精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 亚洲人成电影观看| 又黄又粗又硬又大视频| 久久久久精品人妻al黑| 美女扒开内裤让男人捅视频| av线在线观看网站| 日韩大码丰满熟妇| 精品少妇内射三级| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲专区字幕在线| 亚洲第一青青草原| 免费不卡黄色视频| 飞空精品影院首页| 亚洲国产欧美一区二区综合| netflix在线观看网站| 久久久欧美国产精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 少妇 在线观看| 国产精品.久久久| √禁漫天堂资源中文www| 飞空精品影院首页| 最新的欧美精品一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲国产看品久久| 亚洲国产av影院在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品一区蜜桃| 两性夫妻黄色片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 欧美日韩一级在线毛片| 97人妻天天添夜夜摸| 国产伦理片在线播放av一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 丝袜在线中文字幕| 色精品久久人妻99蜜桃| 在线观看舔阴道视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产在线视频一区二区| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 国产色视频综合| 天堂8中文在线网| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 桃花免费在线播放| 午夜91福利影院| 自线自在国产av| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲情色 制服丝袜| 蜜桃国产av成人99| 女性生殖器流出的白浆| 精品久久久久久电影网| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 无限看片的www在线观看| 日韩电影二区| 桃花免费在线播放| 不卡一级毛片| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 高清在线国产一区| 精品亚洲成国产av| 女警被强在线播放| 欧美日韩黄片免| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 色播在线永久视频| 日本黄色日本黄色录像| 国产亚洲欧美精品永久| 涩涩av久久男人的天堂| 中文字幕人妻熟女乱码| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产91精品成人一区二区三区 | 精品福利观看| 国产福利在线免费观看视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲专区国产一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| av天堂在线播放| 免费高清在线观看日韩| av片东京热男人的天堂| 777久久人妻少妇嫩草av网站| av视频免费观看在线观看| 亚洲人成电影观看| 制服人妻中文乱码| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久人妻熟女aⅴ| 丰满迷人的少妇在线观看| 蜜桃国产av成人99| 免费观看av网站的网址| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲免费av在线视频| 99久久综合免费| 日韩欧美国产一区二区入口| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩大片免费观看网站| 99国产精品一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲精华国产精华精| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 最近最新中文字幕大全免费视频| 男女国产视频网站| 国产精品一二三区在线看| 国产精品九九99| 国产区一区二久久| 九色亚洲精品在线播放| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| netflix在线观看网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 黄片大片在线免费观看| 亚洲av片天天在线观看| 日韩电影二区| 久久九九热精品免费| 欧美性长视频在线观看| 国产免费现黄频在线看| 男男h啪啪无遮挡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 看免费av毛片| 久久久水蜜桃国产精品网| 夫妻午夜视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 2018国产大陆天天弄谢| 搡老岳熟女国产| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 在线观看www视频免费| 亚洲一区二区三区欧美精品| 美女国产高潮福利片在线看| 国产av精品麻豆| 一级毛片精品| 日韩三级视频一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久免费观看电影| 黑人操中国人逼视频| 欧美在线黄色| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 丝袜在线中文字幕| 在线观看免费午夜福利视频| 好男人电影高清在线观看| 久久久国产成人免费| 亚洲中文字幕日韩| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲一区中文字幕在线| 国产成人精品无人区| av电影中文网址| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品国产国语对白av| 久久久国产精品麻豆| 免费在线观看日本一区| 大香蕉久久网| 亚洲国产欧美网| 久久久久精品人妻al黑| 国产成人免费无遮挡视频| 在线精品无人区一区二区三| 日日夜夜操网爽| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品免费视频内射| 18在线观看网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美激情高清一区二区三区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久人妻熟女aⅴ| av不卡在线播放| 日韩欧美免费精品| av不卡在线播放| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久久久久久精品精品| 捣出白浆h1v1| 中文字幕av电影在线播放| 91精品三级在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品二区激情视频| 一级毛片精品| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| av片东京热男人的天堂| 人妻人人澡人人爽人人| 国产在线观看jvid| 午夜精品久久久久久毛片777| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲avbb在线观看| www.自偷自拍.com| 亚洲精华国产精华精| 精品卡一卡二卡四卡免费| a级片在线免费高清观看视频| 操美女的视频在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 中文字幕人妻丝袜制服| 天堂8中文在线网| 久热这里只有精品99| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 黄色 视频免费看| 欧美精品一区二区大全| 真人做人爱边吃奶动态| 久久av网站| 99久久精品国产亚洲精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日本五十路高清| a在线观看视频网站| 9热在线视频观看99| 91成年电影在线观看| 午夜免费鲁丝| 另类亚洲欧美激情| 最新在线观看一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 免费观看a级毛片全部| 亚洲五月色婷婷综合| 国产福利在线免费观看视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 黄色a级毛片大全视频| 搡老岳熟女国产| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 麻豆乱淫一区二区| 91成年电影在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美日韩一级在线毛片| 秋霞在线观看毛片| 美女大奶头黄色视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 日韩三级视频一区二区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线观看免费视频网站a站| 狂野欧美激情性xxxx| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜激情av网站| 亚洲黑人精品在线| 曰老女人黄片| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 亚洲avbb在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产免费福利视频在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 精品高清国产在线一区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 在线观看免费高清a一片| 久久中文看片网| 久久久精品94久久精品| 亚洲第一av免费看| 精品久久蜜臀av无| 国产精品一二三区在线看| 久久久精品区二区三区| 久久久久国内视频| 一本久久精品| 黄色视频,在线免费观看| 国产成人av激情在线播放| 考比视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲av男天堂| 乱人伦中国视频| 制服诱惑二区| 不卡一级毛片| 欧美日韩视频精品一区| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲一区二区三区欧美精品| 下体分泌物呈黄色| 国产福利在线免费观看视频| 丝袜美足系列| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产激情久久老熟女| 免费黄频网站在线观看国产| 一区二区av电影网| 乱人伦中国视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 最黄视频免费看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品av久久久久免费| av在线播放精品| 女性生殖器流出的白浆| 久久久久久久精品精品| 人妻 亚洲 视频| 精品久久蜜臀av无| videos熟女内射| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 两性夫妻黄色片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲精华国产精华精| 九色亚洲精品在线播放| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 老司机深夜福利视频在线观看 | 欧美人与性动交α欧美软件| 日韩视频一区二区在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久欧美国产精品| 国产高清videossex| 亚洲成人免费av在线播放| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 免费看十八禁软件| 亚洲精品一区蜜桃| 伦理电影免费视频| 老司机影院毛片| 国产精品久久久久成人av| 午夜福利在线观看吧| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲综合色网址| 人妻一区二区av| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产一级毛片在线| 欧美精品一区二区免费开放| 另类精品久久| 国产精品影院久久| 欧美在线一区亚洲| 亚洲欧美清纯卡通| 午夜福利免费观看在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产在线视频一区二区| 亚洲情色 制服丝袜| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产高清videossex| 亚洲国产精品999| 精品一区在线观看国产| 国产精品久久久人人做人人爽| 大片电影免费在线观看免费| 男人添女人高潮全过程视频| 夫妻午夜视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 又黄又粗又硬又大视频| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品国产av成人精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产精品影院久久| 成人影院久久| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品1区2区在线观看. | 日韩欧美免费精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 少妇的丰满在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 老司机影院成人| 最黄视频免费看| 午夜免费观看性视频| 久久 成人 亚洲| 最近最新免费中文字幕在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产精品一区三区| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产男人的电影天堂91| 国产在线视频一区二区| 97人妻天天添夜夜摸| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 人妻 亚洲 视频| 黑人操中国人逼视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日本五十路高清| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美xxⅹ黑人| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 老司机深夜福利视频在线观看 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 午夜免费鲁丝| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品影院久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 满18在线观看网站| 韩国精品一区二区三区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产成人欧美| 国产精品欧美亚洲77777| 91成年电影在线观看| 亚洲三区欧美一区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 成人免费观看视频高清| 精品一区二区三卡| av在线播放精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日本91视频免费播放| 国产99久久九九免费精品| 永久免费av网站大全| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产精品一区三区| 国产成人精品无人区| av线在线观看网站| 青青草视频在线视频观看| 欧美精品一区二区大全| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品 欧美亚洲| 久久中文字幕一级| 午夜视频精品福利| 欧美另类一区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 午夜视频精品福利| 搡老乐熟女国产| 男女之事视频高清在线观看| 国产高清视频在线播放一区 | 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产亚洲一区二区精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 啦啦啦 在线观看视频| 国产亚洲av高清不卡| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲av美国av| 9热在线视频观看99| 夜夜夜夜夜久久久久| 黄色视频不卡| 日韩中文字幕欧美一区二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 90打野战视频偷拍视频| 丰满饥渴人妻一区二区三|