小腸上皮分泌細(xì)胞特性的組織學(xué)觀察

晏 芳

小腸上皮分泌細(xì)胞特性的組織學(xué)觀察

晏 芳

（南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室，廣州510515）

目的 尋找一種可以替代人體消化管的動物標(biāo)本，并通過特殊染色方法，使得小腸上皮分泌細(xì)胞的形態(tài)特征能夠明顯地顯示出來。方法 隨機(jī)采集成年貓小腸的新鮮標(biāo)本，經(jīng)Bouin液灌注固定24h后，石蠟包埋切片脫蠟入水。分別采用Gomori染色法、PAS反應(yīng)、Gomori＋PAS反應(yīng)、阿利新藍(lán)（alcian blue，AB）染色法、AB＋PAS反應(yīng)、HE染色法和蘇木精-焰紅染色法進(jìn)行染色。結(jié)果 在各種染色的切片標(biāo)本上，能夠觀察到杯狀細(xì)胞的形態(tài)、分布和染色特性以及腸內(nèi)分泌細(xì)胞的特點，并發(fā)現(xiàn)在它們之間還存在一種綠色顆粒細(xì)胞和嗜酸性顆粒細(xì)胞。結(jié)論 通過特殊染色可以肯定貓的小腸杯狀細(xì)胞合成的是中性粘蛋白和酸性粘蛋白；綠色顆粒細(xì)胞為未成熟杯狀細(xì)胞；嗜酸性顆粒細(xì)胞為Paneth細(xì)胞，其特點是單個分散分布。腸內(nèi)分泌細(xì)胞與周圍其他上皮細(xì)胞的染色對比明顯而容易識別。

杯狀細(xì)胞；Paneth細(xì)胞；腸內(nèi)分泌細(xì)胞；Gomori染色法

在組織學(xué)的實驗教學(xué)中，消化管一直是重點的觀察內(nèi)容之一。由于人體標(biāo)本的獲得本身存在困難；并且在普通染色中，小腸上皮內(nèi)某些分泌細(xì)胞顯示的顏色相似，學(xué)生不容易辨認(rèn)。故本次實驗的目的，是希望尋找一種可以替代人體消化管的動物標(biāo)本，并通過特殊染色方法，使得小腸上皮分泌細(xì)胞的形態(tài)特征能夠明顯地顯示出來，易于鑒別。

材料和方法

1.材料 成年貓小腸的新鮮標(biāo)本。

2.方法 Bouin液灌注固定24h。石蠟包埋。石蠟切片后常規(guī)脫蠟入水。分別采用Gomori染色法、PAS反應(yīng)、Gomori＋PAS反應(yīng)、阿利新藍(lán)（alcian blue，AB）染色法、AB＋PAS反應(yīng)、HE染色法和蘇木精-焰紅染色法進(jìn)行染色。

2.1 Gomori染色法：切片按常規(guī)脫蠟，脫水入水，用明礬蘇木精染核5min。水洗。Gomori染液染色5-10min。常規(guī)酒精和二甲苯順序脫水和透明，中性樹膠封片。

2.2 PAS反應(yīng)：切片按常規(guī)脫蠟，脫水入水，在1%高碘酸水溶液內(nèi)氧化10min。蒸餾水洗5min。入Schiff試劑10-20min。流水沖洗10min，蘇木精淺染細(xì)胞核1-2min。從95%酒精開始脫水，100%酒精兩次，二甲苯透明，中性樹膠封片。

2.3 Gomori＋PAS反應(yīng)：切片按常規(guī)脫蠟，脫水入水。用明礬蘇木精染核5min。水洗。Gomori染液染色5-10min。流水沖洗后入蒸餾水。1%高碘酸水溶液5min。蒸餾水充分洗。Schiff試劑15min。流水沖洗10min。無水酒精沖洗及脫水。二甲苯透明，中性樹膠封片。

2.4 阿利新藍(lán)（alcian blue，AB）染色法：切片按常規(guī)脫蠟，脫水入水，3%醋酸水溶液（pH2.5）略漂洗。阿利新藍(lán)染液染色5-15min，蒸餾水漂洗。0.5%中性紅水溶液染核3-5min。蒸餾水漂洗數(shù)次。95%及無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

2.5 AB＋PAS反應(yīng)：切片按常規(guī)脫蠟，脫水入水，3%醋酸水溶液（pH2.5）略漂洗。阿利新藍(lán)染液（pH2.5）染5min。流水沖洗后入蒸餾水。1%高碘酸水溶液5min。蒸餾水充分洗。Schiff試劑15min。流水沖洗10min，蘇木精淡染后水洗使胞核顯淡藍(lán)色。無水酒精沖洗及脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

2.6 HE染色（省略）

2.7 蘇木精-焰紅染色法［1］（省略）

3.染液配置

3.1 Gomori三色染液［2］：鉻變藍(lán)2R0.6g，固綠FCF 0.3g，磷鎢酸 0.6g，冰醋酸1ml加入蒸餾水100ml。

3.2 1%高碘酸溶液：稱取高碘酸1g，加蒸餾水100ml，待溶解后置于4oC冰箱避光保存。進(jìn)行染色時需要提前取出恢復(fù)至常溫。

3.3 Schiff試劑：堿性品紅1g，蒸餾水200ml，偏重亞硫酸鈉1g，N-HCl 20ml，活性炭2g。

3.4 阿利新藍(lán)染液（pH2.5）：阿利新藍(lán) 8GX 1g，加入3%醋酸水溶液100ml。

結(jié) 果

在各種染色的切片標(biāo)本上，分別觀察了在吸收細(xì)胞之間和腸腺細(xì)胞之間的杯狀細(xì)胞的形態(tài)、分布和染色特性，并觀察到在它們之間還存在一種綠色顆粒細(xì)胞和嗜酸性顆粒細(xì)胞。還觀察了腸內(nèi)分泌細(xì)胞的特點。

1.杯狀細(xì)胞

1.1 形態(tài)：細(xì)胞頂端膨大，胞質(zhì)充滿粘原顆粒，依染色方法不同而顯示不同顏色。胞核位于細(xì)胞基底部，呈半月形或三角形。

1.2 分布：分布在腸腺上皮內(nèi)的杯狀細(xì)胞較小，分布在絨毛上皮內(nèi)的杯狀細(xì)胞較大。

1.3 杯狀細(xì)胞有以下染色特點：

1.3.1 Gomori染色時，粘原顆粒呈綠色（圖1）。

1.3.2 PAS反應(yīng)陽性，粘原顆粒呈玫瑰紅色（圖2）。

1.3.3 Gomori＋PAS反應(yīng)陽性，粘原顆粒呈玫瑰紅色（圖3）。

1.3.4 AB染色時，粘原顆粒呈藍(lán)色（圖4）。

1.3.5 AB＋PAS反應(yīng)陽性，粘原顆粒呈紫色（圖5）。

1.3.6 HE染色：小腸上皮細(xì)胞胞質(zhì)呈弱嗜酸性，胞核呈藍(lán)紫色，杯狀細(xì)胞呈空泡狀。

1.3.7 蘇木精-焰紅染色時，胞質(zhì)染色為紫紅色。

2.未成熟杯狀細(xì)胞-綠色顆粒細(xì)胞

2.1 形態(tài)：低柱狀或卵圓形。Gomori染色時，胞質(zhì)含綠色顆粒，胞核圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央或偏于細(xì)胞基底部（圖6）?？梢娪晌闯墒毂瓲罴?xì)胞向成熟杯狀細(xì)胞發(fā)育的形態(tài)過程。

2.2 分布：此種細(xì)胞數(shù)量甚少，一般分布在腸腺的體部和基底部。

3.嗜酸性顆粒細(xì)胞

3.1 形態(tài)：為低柱狀細(xì)胞，胞質(zhì)充滿粗大的嗜酸性顆粒，觀察到脫顆粒現(xiàn)象（圖7）。胞核呈圓形，位于細(xì)胞基底部。

3.2 分布：分散地分布在小腸絨毛的根部和腸腺頸部的上皮內(nèi)。在十二指腸較空腸、回腸更多見。

3.3 嗜酸性顆粒細(xì)胞有以下染色特點：

3.3.1 HE染色和Gomori染色時，顆粒呈鮮紅色（圖1）。

3.3.2 PAS反應(yīng)時，顆粒也呈玫瑰紅色，但顆粒粗大，容易與杯狀細(xì)胞區(qū)別（圖2）。

3.3.3 Gomori＋PAS反應(yīng)時，顆粒呈鮮紅色，有別于呈玫瑰紅色的粘原顆粒（圖3）。

3.3.4 AB染色時，顆粒不著色。阿利新藍(lán)＋PAS反應(yīng)時，未看到該種顆粒。

3.3.5 蘇木精-焰紅染色時，顆粒呈鮮紅色（圖8）。

4.腸內(nèi)分泌細(xì)胞

4.1 形態(tài)：體積較大，胞質(zhì)內(nèi)可見大小不等暗紅色顆粒，分布在細(xì)胞基底部。細(xì)胞核深染，一般位于細(xì)胞中央，核周胞質(zhì)一般透亮（圖9）。

4.2 分布：細(xì)胞散在分布于腸腺上皮細(xì)胞之間。

討 論

Gomori染色法顯示杯狀細(xì)胞有以下優(yōu)點

1.杯狀細(xì)胞頂端粘原顆粒呈綠色，而杯狀細(xì)胞周圍的腸腺上皮細(xì)胞和絨毛上皮細(xì)胞均顯淺紫紅色，故而比HE染色的切片較易于辨認(rèn)杯狀細(xì)胞。

2.吸收上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，包括紋狀緣，腸腺和十二指腸腺上皮的結(jié)構(gòu)均同樣清晰。

3.膠原纖維呈綠色，觀察腸壁結(jié)締組織成分突出。

4.平滑肌細(xì)胞呈紅色，肌層更明顯，粘膜肌層也易分辨，尤其絨毛固有層內(nèi)平滑肌纖維也呈紅色，易于與膠原纖維（綠色）區(qū)分。

5.血管和神經(jīng)叢均較易觀察。

6.從染色過程來說，Gomori三色法更容易掌握，而且花費(fèi)時間短，降低染料的使用成本，適合教學(xué)標(biāo)本制作。

關(guān)于杯狀細(xì)胞合成粘蛋白的性質(zhì)

PAS反應(yīng)、阿利新藍(lán)染色的分別染色和雙重染色［3］的結(jié)果表明，貓的小腸杯狀細(xì)胞合成中性粘蛋白和酸性粘蛋白。

關(guān)于嗜酸性顆粒細(xì)胞的討論

1.嗜酸性顆粒細(xì)胞的特點是胞質(zhì)內(nèi)含有粗大的嗜酸性顆粒，這種顆粒在HE染色、Gomori染色時呈鮮紅色，PAS反應(yīng)呈玫瑰紅色，而阿利新藍(lán)染色呈陰性，表明顆粒含中性粘蛋白，這些染色特性均符合Paneth細(xì)胞的染色特點［4］。故本文認(rèn)為嗜酸性顆粒細(xì)胞應(yīng)為Paneth細(xì)胞。為進(jìn)一步證實，本文采用Paneth細(xì)胞特染法--焰紅染色法對貓的小腸進(jìn)行染色；結(jié)果如圖8所見，同樣證實了這種嗜酸性顆粒細(xì)胞有可能是Paneth細(xì)胞。

2.一般記載，人及大鼠、小鼠、豚鼠、猴、牛、馬和羊等的小腸腸腺上皮內(nèi)有大量的Paneth細(xì)胞，并5-15個細(xì)胞成群地分布于腸腺基底部，而犬和貓等動物的小腸腸腺則缺少或沒有Paneth細(xì)胞［5，6］。本實驗在貓小腸腸腺基底部確未觀察到成群分布的Paneth細(xì)胞，但在其腸腺的頸部和絨毛的根部上皮內(nèi)觀察到嗜酸性顆粒細(xì)胞-Paneth細(xì)胞，且是單個分散地而不是成群地分布，這可能是貓小腸腸腺Paneth細(xì)胞不同于人和其它動物小腸Paneht細(xì)胞分布的特點，是種屬的差異。

關(guān)于內(nèi)分泌細(xì)胞的討論

腸腺上皮內(nèi)的腸內(nèi)分泌細(xì)胞在常規(guī)染色中很難辨認(rèn)，傳統(tǒng)上一般要通過銀染的方法才能使其顯色［7］。本實驗采用Gomori染色法對小腸進(jìn)行染色后，由于腸內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)透明，可見細(xì)小的基底顆粒，與周圍其他上皮細(xì)胞的染色對比明顯而容易識別。

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［7］Leslie PG，James LH.Color Textbook of Histology.Second edition，2001：388

圖 版 說 明

圖1 貓小腸中的杯狀細(xì)胞和嗜酸性顆粒細(xì)胞。（Gomori染色法，×400，箭頭所示：白色-杯狀細(xì)胞，黑色-嗜酸性顆粒細(xì)胞）

圖2 貓小腸中的杯狀細(xì)胞和嗜酸性顆粒細(xì)胞。（PAS反應(yīng)，×400，箭頭所示：白色-杯狀細(xì)胞，黑色-嗜酸性顆粒細(xì)胞）

圖3 貓小腸中的杯狀細(xì)胞和嗜酸性顆粒細(xì)胞。（Gomori＋PAS反應(yīng)，×400，箭頭所示：白色-杯狀細(xì)胞，黑色-嗜酸性顆粒細(xì)胞）

圖4 貓小腸中的杯狀細(xì)胞。（AB染色，×400，箭頭所示：白色-杯狀細(xì)胞）

圖5 貓小腸中的杯狀細(xì)胞。（AB＋PAS反應(yīng)，×400，箭頭所示：白色-杯狀細(xì)胞）

圖6 貓小腸中的未成熟杯狀細(xì)胞和杯狀細(xì)胞。（Gomori染色法，×400，箭頭所示：黑色-未成熟杯狀細(xì)胞，白色-杯狀細(xì)胞）

圖7 貓小腸中嗜酸性顆粒細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象。（Gomori染色法，×400，箭頭所示：黑色-嗜酸性顆粒細(xì)胞）

圖8 貓小腸中的嗜酸性顆粒細(xì)胞。（蘇木精-焰紅染色法，×400，箭頭所示：黑色-嗜酸性顆粒細(xì)胞）

圖9 貓小腸中的腸內(nèi)分泌細(xì)胞。（Gomori染色法，×400，箭頭所示：黑色-腸內(nèi)分泌細(xì)胞）

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Goblet cell（white arrow）and acidophil granule cell（black arrow）in cat small intestine.（Gomori staining，×400）

Fig.2 Goblet cell（white arrow）and acidophil granule cell（black arrow）in cat small intestine.（PAS，×400）

Fig.3 Goblet cell（white arrow）and acidophil granule cell（black arrow）in cat small intestine.（Gomori＋PAS，×400）

Fig.4 Goblet cell（white arrow）in cat small intestine.（AB

staining，×400）

Fig.5 Goblet cell（white arrow）in cat small intestine.（AB＋PAS，×400）

Fig.6 Immature goblet cell（black arrow）and goblet cell（white arrow）in cat small intestine.（Gomori staining，×400）

Fig.7Degranulation patterns of acidophil granule cell（black arrow）in cat small intestine.（Gomori staining，×400）

Fig.8Acidophil granule cell（black arrow）in cat small intestine.（HE-phloxine B staining，×400）

Fig.9Enteroendocrine cells（black arrow）in cat small intestine.（Gomori staining，×400）

Histologic observation of intestine epithelial secretory cells

Yan Fang
（Department of histology ＆embryology，School of medical sciences，Southern Medical University，Guangzhou510515，China）

Objective To find an animal digestive tube instead of human that can clearly show the morphological characteristics of small intestine epithelial secretory cells by special staining methods.Methods Adult cat intestines were collected randomly，fixed with Bouin for 24h，embedded with paraffin and then dewaxed into water.Small intestine sample were stained with Gomori，PAS，Gomori＋PAS，Alcian Blue（AB），AB＋PAS，HE and Hematoxylin-Azophloxin.Results In all kinds of sample sections，the morphology，distribution and staining characteristics of goblet cells and enteroendocrine cells were observed.Moreover，green granule cells and eosinophil granule cells were found.Conclusion By special staining，it is confirmed that neutral and acidic mucins were synthesized in cat intestine goblet cells.The green granule cell are immature goblet cell，and the eosinophil granule cells are Paneth cells，which are dispersively distribution.The enteroendocrine cell and the other epithelial cells are apparently identified because the staining is very obvious by comparison.

Goblet cell；Paneth cell；Enteroendocrine cell；Gomori staining

R322.451

A

10.3870／zgzzhx.2011.06.013

2011-05-09

2011-09-28

晏芳，女（1978年），漢族，實驗師。