東當(dāng)歸化學(xué)成分研究及定量分析

劉向前，李麗麗，倪 娜，鄭禮勝

1中南大學(xué)制藥工程系，長(zhǎng)沙410083;2湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)沙410007;3揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，泰州225321

東當(dāng)歸化學(xué)成分研究及定量分析

劉向前1，2*，李麗麗1，倪 娜3，鄭禮勝1

1中南大學(xué)制藥工程系，長(zhǎng)沙410083;2湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)沙410007;3揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，泰州225321

從當(dāng)歸屬植物東當(dāng)歸的根的乙醇溶液中分離得到了4個(gè)化合物，通過理化特性和波譜分析分別鑒定為雙(5-甲?；坊?醚(bis(5-formylfurfuryl)ether，1)、5-羥甲基糠醛(5-hydroxymethyl-2-furaldehyde，2)、豆甾醇(stigmasterol，3)、十七烷酸(heptadecanoic acid，4)。所有化合物均為首次從該植物中分離得到，其中1為首次從該屬植物中分離得到。采用高效液相色譜法對(duì)東當(dāng)歸所含該屬特征活性成分紫花前胡素進(jìn)行了定量分析。

當(dāng)歸屬;東當(dāng)歸;雙(5-甲?；坊?醚;高效液相色譜法;紫花前胡素

傘形科(Umbelliferae)當(dāng)歸屬(Angelica)植物屬溫帶性屬，全球約90種，主要分布于北溫帶(中國(guó)、朝鮮、韓國(guó)、日本)和新西蘭，多具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛的功效［1］。東當(dāng)歸為當(dāng)歸屬植物東當(dāng)歸Angelica acutiloba(sieb.et Zucc)kigusticum acutilobum.Siebet Zuce的根，別名日本當(dāng)歸、大和當(dāng)歸、延邊當(dāng)歸。早在20世紀(jì)70年代，東當(dāng)歸在中國(guó)吉林省延吉市引種成功，作為朝鮮族的民族藥材，廣泛應(yīng)用于民間。國(guó)內(nèi)除四川從1991年開始引種栽培外，其他地區(qū)尚未有栽培［2］?！度毡舅幘址健酚涊d的“和當(dāng)歸”，即為延邊地區(qū)引種的東當(dāng)歸，具有補(bǔ)血調(diào)經(jīng)、活血止痛、潤(rùn)腸通便的作用，與中國(guó)當(dāng)歸的功能主治相一致。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者僅對(duì)四川引種栽培的東當(dāng)歸揮發(fā)油成分采用GC-MS聯(lián)用法進(jìn)行了分析，未見其化學(xué)成分研究和定量分析的報(bào)道［3］。在系統(tǒng)研究當(dāng)歸屬植物化學(xué)分類的基礎(chǔ)上［4］，為了進(jìn)一步開發(fā)利用我國(guó)延邊地區(qū)的東當(dāng)歸資源，本文對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到4個(gè)化合物;同時(shí)，采用HPLC法對(duì)其中所含的當(dāng)歸屬植物的特征活性成分紫花前胡素進(jìn)行了定量分析。

1 儀器與材料

Bruker DRX 500超導(dǎo)核磁共振波譜儀;Pekin-Elmer 983G型紅外光譜儀;ZAB-HS型質(zhì)譜儀;X-4型顯微熔點(diǎn)儀。GF254薄層色譜硅膠、200～300目柱色譜硅膠(青島海洋化工廠);Sephadex LH-20(amersham pharmacia biotech公司)。實(shí)驗(yàn)用甲醇和乙腈為色譜純，水為三蒸水，其他試劑均為分析純。

東當(dāng)歸藥材購(gòu)于吉林延邊，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉向前教授鑒定為東當(dāng)歸Angelica acutiloba (sieb.et Zucc)的根。標(biāo)本(編號(hào):20070827)存放于中南大學(xué)制藥工程系標(biāo)本室。

2 提取分離

取干燥的東當(dāng)歸根1.0 kg，以85%乙醇冷浸2次，分別為20、30 d。合并2次冷浸濾液，濃縮回收乙醇，得東當(dāng)歸粗浸膏110.0 g。粗浸膏用水混懸，乙醚萃取，除去溶劑后得到干浸膏25.0 g，取約15.0 g進(jìn)行硅膠柱層析分離，以正己烷∶乙酸乙酯= 12∶1→2∶1梯度洗脫，得到Fr.EA(10∶1)，F(xiàn)r.EB(8∶1)，F(xiàn)r.EC(5∶1)，F(xiàn)r.ED(2∶1)4個(gè)粗組分。經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析及Sephadex LH-20凝膠柱層析純化，由Fr.ED(2∶1)部分分得化合物1(70 mg)和2(40 mg)，F(xiàn)r.EB(8∶1)部分分得化合物3(45 mg)，F(xiàn)r.EC (5∶1)部分分得化合物4(30 mg)。

圖1 化合物1和2的結(jié)構(gòu)Fig.1 Stuctures of compounds 1 and 2

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淡黃色針晶(甲醇)，mp.108～109℃。EI-MS m/z:234，205，138，125，109(基峰)，95; TOF-HRMS m/z:235.0585［M+H］+(計(jì)算值為235.0606)，分子式為C12H10O5;IR(KBr)νmax: 3111，2849，1671，1523 cm–1。質(zhì)子核磁共振譜(δ 9.62)和碳譜核磁共振譜(δ 177.7)的信號(hào)說明該化合物含有醛基。質(zhì)子核磁共振譜顯示四組峰號(hào)，其峰面積比為1∶1∶1∶2，碳譜核磁共振譜只有6個(gè)碳信號(hào)，說明該化合物為對(duì)稱結(jié)構(gòu)。13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:64.6(C-6，C-6')，177.7(CO)，4個(gè)芳碳信號(hào):157.2(C-2，C-2')，111.8(C-3，C-3')，121.8(C-4，C-4')，152.8(C-5，C-5')，為呋喃環(huán);1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ:4.63(H-6，H-6'，-CH2O-部分結(jié)構(gòu))，6.57(H-3，H-3')，7.21(H-4，H-4')，9.62(CHO，5'-H)。且數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［5］(5-甲?；坊?醚一致。

化合物2 棕黃色油狀化合物，EI-MS m/z: 126;IR(KBr)νmax:3386，2846，1673，1522，1397，1192，1023，811 cm–1;1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ: 3.91(-OH)，4.67(H-6)，6.49(H-4)，7.21(H-3)，9.51(CHO);13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:57.4 (C-6)，161.1(C-5)，110.0(C-4)，123.4(C-3)，152.2(C-2)，177.8(CO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［6］的5-羥甲基糠醛一致。

化合物3 白色粉末(正己烷-乙酸乙酯)，mp.127～128℃，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性。IR (KBr)νmax:801，1064，1381，1465，1641，2867，2937， 2960，3429;1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ:0.68(s，3H，H-18)，1.01(s，3H，H-19)，0.90(d，3H，J=6.6 Hz，H-29)，0.93(d，6H，J=6.9 Hz，H-26和H-27)，0.82(d，3H，J=6.8 Hz，H-21)，5.35(d，1H，H-6)，5.14(dd，1H，J=15.5，8.5 Hz，H-22)，5.03(dd，1H，J=15.0，8.5 Hz，H-23)，3.52(m，1H，H-3);13C NMR(150 MHz，CDC13)δ:37.2(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.7(C-7)，31.7(C-8)，50.2(C-9)，36.2(C-10)，21.0(C-11)，39.7(C-12)，42.2(C-13)，56.9(C-14)，23.1(C-15)，28.3(C-16)，56.0(C-17)，12.0 (C-18)，19.8(C-19)，42.2(C-20)，21.2(C-21)，138.3(C-22)，129.3(C-23)，51.3(C-24)，34.0(C-25)，21.1(C-26)，18.8(C-27)，26.1(C-28)，12.3 (C-29)，140.8，121.7，138.3，129.3，71.8。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［7］的豆甾醇一致。

化合物4 白色粉末(氯仿)，mp.60～61℃。IR(KBr)νmax:2918，2849，1702，1468，1410，1294，1272，從紅外譜中看出有一系列的飽和烴基存在，還有羰基吸收峰以及 C-O伸縮振動(dòng)的吸收峰。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ:1.185(s，26H)，0.810(m，3H)，2.27(m，2H)，1.56(m，2H);13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ:14.10(C-1)，22.7(C-2)，31.9(C-3)，29.68，29.68，29.66，29.65，29.63，29.58，29.42，29.35，29.23，29.05(10C，C-4～C-14)，24.67 (C-15)，34.02(C-16)，179.92(C-17)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［8］的十七烷酸一致。

4 紫花前胡素的定量分析

4.1 色譜條件［9］

AT.LICHROM C18色譜柱(250 mm×4.6 mm;5 μm)，流動(dòng)相為pH=5.0的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖液(稀釋10倍):乙腈(1∶1)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30°C，進(jìn)樣量10 μL。

4.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取紫花前胡素對(duì)照品8.25 mg，甲醇溶解并定容至50 mL，精密移取1 mL，用甲醇稀釋并定容至25 mL。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

4.3 供試品溶液的制備

精密稱取東當(dāng)歸藥材粉末10.3 g，加乙醚100 mL水浴提取4 h，過濾，濃縮，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

4.4 東當(dāng)歸中紫花前胡素的含量測(cè)定

將“4.3”項(xiàng)下供試品溶液按照“4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定紫花前胡素含量，結(jié)果表明:東當(dāng)歸藥材中紫花前胡素含量為10.05 μg/g。

5 討論

近年來關(guān)于東當(dāng)歸揮發(fā)油組分［10］和提取物藥理作用［11］曾見報(bào)道，但對(duì)其化學(xué)組分及藥理作用卻未有報(bào)道。本文首次對(duì)延邊地區(qū)東當(dāng)歸的根進(jìn)行化學(xué)成分分析。紫花前胡素是1995年韓國(guó)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)的一種吡喃型香豆素，其對(duì)白血病、糖尿性高血壓以及降低腎毒素具有顯著效果［12］，有望開發(fā)成為抗腫瘤等疾病的新藥。筆者曾用HPLC法測(cè)定過不同批次、不同產(chǎn)地的12種當(dāng)歸屬植物中紫花前胡素的含量，結(jié)果表明12種植物均含有紫花前胡素;在此基礎(chǔ)上，本文測(cè)定了東當(dāng)歸中紫花前胡素的含量，結(jié)果亦含有紫花前胡素。由此可知，紫花前胡素可能為當(dāng)歸屬的特征活性成分，廣泛存在于當(dāng)歸屬植物中。本研究為東當(dāng)歸的質(zhì)量控制、今后作為正式藥材納入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及當(dāng)歸屬植物的化學(xué)分類提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 Li LL(李麗麗)，Liu XQ(劉向前)，Gao JM(高敬銘)，et al.Studies on the volatile oils and determination of total coumarins from Angelica spp.growing in China，Japan and Korea.China Pharm(中國(guó)藥師)，2009，12:1344-1347.

2 Sun RW(孫仁文)，Piao HS(樸惠善).Advances in studies on plants of Angelica acutiloba Kitagawa..Mod Chin Med(中國(guó)現(xiàn)代中藥)，2006，8(11):31-33.

3 Du LL(杜蕾蕾)，Wang XJ(王曉靜)，Cai CZ(蔡傳真)，et al.Constituent analysis of essential oils from radix of Angelica acutiloba Kitagawa.J Chin Med Mat(中藥材)，2002，25: 477-478.

4 Li LL(李麗麗)，Liu XQ(劉向前)，Zhang XD(張曉丹).Advances in studies on plants of Angelica spp..Chin Tradit Patent Med(中成藥)，2009，31:601-607.

5 Zhang HQ(張涵慶)，Ding YM(丁云梅)，Chen GY(陳桂英)，et al.Studies on active constituents of root of Euphorbia ebracteolata Hayata.Acta Bot Sin(植物學(xué)報(bào))，1987，29: 429-431.

6 Liu ZL(劉振麗)，Li LF(李林福)，Chao ZM(巢志茂)，et al.Chemical constituents from radix Polygoni multiflori thumb.after Preparing.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2009，21:239-241.

7 Huang S(黃帥)，Zhou XL(周先禮)，Wang HY(王洪燕).Chemical studies on the flowers of Tagetes erecta L..Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2006，18(Supp1): 57-59.

8 Sadtler Research Laboratories.Sadtler Standard NMR Spectra.USA:Sadtler Research Laboratories，1980.2594.

9 Liu XQ(劉向前).One examination method of Decursin.ChinaPatent(中國(guó)專利)，ZL 200610103386.4，2008-02-13.

10 Sun RW(孫仁文)，Piao HS(樸惠善).Extraction and analysis of constituents of essential oil from Angelica acutiloba Kitag.with supercritical fluid CO2and GC-MS method.Lishizhen Med Mat Med Res(時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥)，2007，18:1136-1138.

11 Hatano R，Takano F，F(xiàn)ushiya S，et al.Water-soluble extracts from Angelica acutiloba Kitagawa.enhance hematopoiesis by activating immature erythroid cells in mice with 5-fluorouracil-induced anemia.Exp Hematol，2004，10:918-924.

12 Kang YG，Lee JH，Chae HJ，et al.HPLC Analysis and extraction methods of decursin and decursinol angelate in Angelica gigas roots.Korean J Pharmacogn，2003，34:201-205.

Chemical Constituents and Quantitative Analysis of Angelica acutiloba kitag.

LIU Xiang-qian1，2*，LI Li-li1，NI Na3，ZHENG Li-sheng11Department of Pharmaceutical Engineering，Central South University，Changsha 410083，China;2College of Pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410007，China;3Yangtze River Pharmaceutical Group，Taizhou 225321，China

Four compounds were isolated from the roots of Angelica acutiloba kitag.and their structures were identified as bis(5-formylfurfuryl)ether(1)，5-hydroxymethyl-2-furaldehyde(2)，stigmasterol(3)，heptadecanoic acid(4)by spectroseopic evidences(1H NMR，13C NMR，HR-MS，etc).All the compounds were isolated from this plant for the first time and compounds 1 was obtained from this genus for the first time.The relative contents of decursin which was the special active constituent of Angelica genus were analyzed by HPLC.

Angelica;Angelica acutiloba kitag.;bis(5-formylfurfuryl)ether;HPLC;decursin

1001-6880(2011)04-0693-03

2009-11-09 接受日期:2010-01-14

*通訊作者 Tel:86-731-88995848;E-mail:lxq0001cn@163.com

R284.2

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