念慈庵川貝枇杷膏免疫功能的研究

周華俊

念慈庵川貝枇杷膏由川貝、枇杷葉、沙參、茯神、橘紅等十幾味中藥材提取制成的中成藥，主要用于止咳化痰，降氣平喘。有文獻(xiàn)報(bào)道其部分藥理學(xué)研究［1］。由于其藥材的組成可能有免疫的功效，目前未見(jiàn)該方面的研究報(bào)道。筆者對(duì)此進(jìn)行了研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，SPF級(jí)，購(gòu)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào):粵檢證字SCXK(粵)-2009-0070。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 念慈庵川貝枇杷膏為深圳東方力藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20091128;金水寶膠囊為金水寶膠囊由江西金水寶制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):091107。環(huán)磷酰胺:上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20090821。實(shí)驗(yàn)前用0.9%氯化鈉注射液配成濃度為5 mg/ml的溶液。印度墨汁:北京四中化工廠，批號(hào)900501，用時(shí)用0.9%氯化鈉注射液稀釋10倍。雞紅細(xì)胞懸液:無(wú)菌條件下雞翼下靜脈采血，放入相當(dāng)于雞血體積5倍的Alsever’s液，4℃保存。臨用時(shí)用0.9%氯化鈉注射液反復(fù)洗滌，離心3次，以恒定的血細(xì)胞比容數(shù)用0.9%氯化鈉注射液配成5%雞紅細(xì)胞混懸液(Alsever’s液的制備:葡萄糖 2.05 g，檸檬酸鈉 0.80 g，檸檬酸0.05 g，氯化鈉0.42 g，重蒸餾水加至1.0 L，高壓滅菌，4℃保存)。豚鼠血清:用心臟采血的方法取豚鼠全血，然后離心得到血清。其余試劑為分析純?cè)噭?/p>

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，型號(hào):TU-1901。

1.2 方法

1.2.1 炭粒廓清法［2］取昆明種小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、環(huán)磷酰胺造模組、受試藥物低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只，然后各組小鼠按0.1 ml/10 g體重灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中正常對(duì)照組和環(huán)磷酰胺造模組給等體積蒸餾水。除正常對(duì)照組外，其余5組均于給藥的第3～5天腹腔注射環(huán)磷酰胺50 mg/kg，造成免疫功能低下模型。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水10 h，末次給藥后1 h，各小鼠尾靜脈注射印度墨汁0.1 ml/10 g體重，注射后第2 min(T1)、12 min(T2)分別從眼眶靜脈取血20 μl，溶于2 ml的0.1%碳酸鈉溶液中，搖勻，用雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于680 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，最后將小鼠放血處死，取肝脾稱其質(zhì)量，計(jì)算廓清指數(shù)、校正廓清指數(shù)。

1.2.2 血清溶血素法 小鼠分組，給藥同實(shí)驗(yàn)2.1在試驗(yàn)第1 d每鼠腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.2 ml。末次給藥后1 h，摘取動(dòng)物眼球取血，3000r/min離心10 min，分離血清，用0.9%氯化鈉注射液將血清稀釋100倍。取稀釋血清1 ml，與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 ml、10%豚鼠血清(補(bǔ)體)0.5 ml混勻，在37℃水浴溫育30 min，然后置0℃冰箱中中止反應(yīng)，將上述液體3000r/min離心10 min，取上清液，用雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于540 nm處測(cè)定OD值，另設(shè)不加小鼠血清的空白對(duì)照管調(diào)零。以樣品的OD值代表血清溶血素水平。

廓清指數(shù)K=(logA1-logA2)/(T2-T1)，式中A1、A2分別為第2 min、12 min的OD值。

1.3 2，4-二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)試驗(yàn) 小鼠分組，給藥同實(shí)驗(yàn)2.1隨機(jī)分為免疫正常+DTH陽(yáng)性組、Cy+DTH陰性組、Cy+DTH陽(yáng)性組、Cy+DTH陽(yáng)性+受試藥物低劑量組、Cy+DTH陽(yáng)性+受試藥物中劑量組、Cy+DTH陽(yáng)性+受試藥物低劑量組、Cy+DTH陽(yáng)性+金水寶組。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水10 h，然后各組小鼠按0.1 ml/10 g體重灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中免疫正常+DTH陽(yáng)性組、Cy+DTH陰性組和Cy+DTH陽(yáng)性組給予等體積蒸餾水。除免疫正常+DTH陽(yáng)性組外，其余6組均于給藥的第3～5天腹腔注射環(huán)磷酰胺50 mg/kg，造成免疫功能低下模型。同時(shí)在第3天，除Cy+DTH陰性組以外，其他各組每鼠腹部去毛，將1%的2，4-二硝基氟苯丙酮液50 μl涂于脫毛處致敏，次日再?gòu)?qiáng)化一次。第7天各組小鼠用1%的2，4-二硝基氟苯液10 μl均勻涂于小鼠右耳進(jìn)行攻擊，攻擊24 h后，處死小鼠，剪下左右耳，用直徑9 mm打孔器打下相應(yīng)的圓耳片，稱重，并計(jì)算左右耳的耳腫差。

2 結(jié)果

2.1 炭粒廓清法 由表1可見(jiàn):受試藥物低、中、高劑量組校正廓清指數(shù)與環(huán)磷酰胺造模組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P ＜0.01)。

表1 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(±s)

表1 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(±s)

注:*與陰性對(duì)照組的比較P＜0.05;＊＊與陰性對(duì)照組比較P＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量 廓清指數(shù) 校正廓清指數(shù)正常對(duì)照組 10 - 0.063±0.187＊＊ 8.357±2.143＊＊環(huán)磷酰胺造模組 10 - 0.042±0.011 5.826±1.143受試藥物低劑量組 10 3.0 ml/kg 0.050±0.021 6.552±1.265*受試藥物中劑量組 10 6.0 ml/kg 0.057±0.023＊＊ 7.150±1.163＊＊受試藥物高劑量組 10 12.0 ml/kg 0.059±0.017＊＊ 7.163±1.277＊＊陽(yáng)性對(duì)照藥(金水寶膠囊)組 10 0.50 g/kg 0.061±0.012＊＊ 7.361±0.992＊＊

2.2 血清溶血素法由表2可見(jiàn):受試藥物中、高劑量組校正廓清指數(shù)與環(huán)磷酰胺造模組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 DTH試驗(yàn) 由表3可見(jiàn):受試藥物高劑量組校正廓清指數(shù)與DTH陽(yáng)性造模組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(±s)

表2 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(±s)

注:*與陰性對(duì)照組的比較P＜0.05;＊＊與陰性對(duì)照組比較P＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)(只) 給藥劑量 血清溶血素水平(OD值)正常對(duì)照組 10 - 0.288±0.057＊＊環(huán)磷酰胺造模組 10 - 0.159±0.047受試藥物低劑量組 10 3.0 ml/kg 0.196±0.054受試藥物中劑量組 10 6.0 ml/kg 0.212±0.051*受試藥物高劑量組 10 12.0 ml/kg 0.241±0.051*陽(yáng)性對(duì)照藥物(金水寶膠囊)組 10 0.50 g/kg 0.312±0.108＊＊

表3 受試藥物對(duì)2.4-二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響

3 討論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)可提示念慈庵川貝枇杷膏對(duì)碳粒廓清法，低劑量就表現(xiàn)出了良好的免疫效果，而在血清溶血素試驗(yàn)是中劑量，表現(xiàn)出了良好的免疫功能，DTH試驗(yàn)只有在較高劑量時(shí)，表現(xiàn)出一定的提高免疫功能。綜上所述，念慈庵川貝枇杷膏對(duì)免疫低下小鼠具有一定的細(xì)胞免疫和體液免疫功能。

［1］ 曉龍，蔣偉哲，林自中.龍眼參提取物對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的影響.中國(guó)藥房，2004，15(6):334.

［2］ 吳克明，曾婧，曾南，等.清宮止血顆粒對(duì)免疫低下小鼠免疫功能的影響.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2004，2(3):203-204.