固相萃取-高效液相色譜檢測葡萄酒中羅丹明B

李小燕，李 梅，陳其鋒，韋升艷，羅 予，仝海娟

(1.廣西民族大學(xué)化學(xué)與生態(tài)工程學(xué)院，廣西 南寧 530006；2.廣西林產(chǎn)化學(xué)品開發(fā)與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530006)

固相萃取-高效液相色譜檢測葡萄酒中羅丹明B

李小燕1,2，李 梅1，陳其鋒1，韋升艷1，羅 予1，仝海娟1

(1.廣西民族大學(xué)化學(xué)與生態(tài)工程學(xué)院，廣西 南寧 530006；2.廣西林產(chǎn)化學(xué)品開發(fā)與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530006)

建立固相萃取富集凈化，高效液相色譜紫外檢測葡萄酒中禁用色素羅丹明B的方法。葡萄酒樣品中的羅丹明B經(jīng)C18固相萃取，40%乙醇溶液清洗凈化，80%的甲醇溶液洗脫后，用高效液相色譜紫外檢測器進(jìn)行測定。結(jié)果表明：羅丹明B在1.0～10.0μg/mL范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.9924；在1.5～3.5μg/mL添加水平時(shí)，平均回收率為72.06%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.87%(n=5)；定量測出限為0.25μg/mL。表明該方法靈敏度高，重復(fù)性良好，操作簡便快速，適用于葡萄酒中羅丹明B的檢測。

固相萃?。桓咝б合嗌V；羅丹明B；葡萄酒

色彩是食品感官品質(zhì)的一個(gè)重要標(biāo)志。因此，人們?cè)谥谱魇称窌r(shí)常使用食用色素來改善食品的外觀及品質(zhì)，使食品賞心悅目。食用色素有天然色素和合成色素兩大類。相對(duì)于天然色素，合成色素具有價(jià)格低廉，色澤鮮艷，著色穩(wěn)定等特點(diǎn)，但合成色素的使用必須遵循國家有關(guān)規(guī)定。然而，一些不法商家為了用低成本換取高收入，向食品中添加一些違禁色素、香精等，給人們的生活帶來了極大的安全隱患，也使我國的出口貿(mào)易受到一定的限制。因此，食品中違禁色素成為食品安全檢測的重點(diǎn)[1-5]。

羅丹明B(rhodamine B)，又名四乙基羅丹明，玫瑰紅B，堿性玫瑰精，俗名花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料；由間羥基二乙基苯胺和鄰苯二甲酐縮合而成，通常使用的是它的氯化物(分子式為C28H31ClN2O3Cl)。主要用于造紙、制漆、紡織、皮革和瓷器的工業(yè)染色；同時(shí)它也是一種常見的分析試劑，廣泛應(yīng)用于環(huán)保、礦業(yè)、鋼鐵、醫(yī)藥等領(lǐng)域[6-7]。羅丹明B是一種有機(jī)污染物，可通過食入、吸入或皮膚接觸等三種途徑進(jìn)入人體，使人產(chǎn)生頭痛、頭暈、咽干、咽痛、惡心、嘔吐、腹痛、四肢酸痛、乏力、白細(xì)胞增高等不同程度的中毒癥狀。因此我國和歐盟等都不允許在食品中使用[8-9]。

目前葡萄酒中添加人工合成色素(如胭脂紅、莧菜紅、檸檬黃、日落黃、亮藍(lán)等)的檢測已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[10-11]，在海蝦米、辣椒粉、臘腸等食品中檢出羅丹明的事件也時(shí)有發(fā)生[12-14]，而我國目前尚無檢測食品中羅丹明B 的國家標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于食品中羅丹明B的測定尚未見葡萄酒的檢測報(bào)道。為有效地控制工業(yè)染料在食品中的濫用，有必要建立葡萄酒中羅丹明B等違禁色素的檢測方法，防患于未然，以從容應(yīng)對(duì)突發(fā)的食品安全事件。

固相萃取是一種基于色譜分離的樣品前處理技術(shù)，相對(duì)于傳統(tǒng)的液液萃取而言此法能更有效的將目標(biāo)化合物從復(fù)雜樣品體系中分離，減少樣品預(yù)處理步驟，操作簡單、快速，更能提高分析結(jié)果的重現(xiàn)性。近年來已被廣泛應(yīng)用于食品安全檢測、水質(zhì)環(huán)保監(jiān)測、臨床醫(yī)學(xué)、新藥開發(fā)、刑事鑒定、生命科學(xué)等眾多領(lǐng)域[15-16]。本實(shí)驗(yàn)采用固相萃取技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行萃取凈化處理，用高效液相色譜紫外檢測葡萄酒中的痕量羅丹明B的方法，為食品安全檢測提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

干紅葡萄酒及其他葡萄酒 市售。

羅丹明B對(duì)照品(含量99.5%) 中國醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑公司；乙腈(色譜純) 美國飛試公司；無水乙醇、冰醋酸(均為分析純) 天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；甲醇(分析純) 西瓏化工股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Series200型高效液相色譜儀(配有Series 200紫外檢測器、Series 200二元泵、600 Series接口及色譜工作站) 美國Perkin Elmer公司；UV/VIS 916型紫外-可見分光光度計(jì) 澳大利亞GBC科學(xué)儀器公司；Phenomenex Gemini C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；SupelcleanTMLC-C18固相萃取柱(1g，6mL)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取羅丹明B對(duì)照品適量，用無水乙醇溶解，制成質(zhì)量濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。再分別準(zhǔn)確量取貯備液適量，用水稀釋成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅰ)，和1.0、2.5、5.0、7.5、10.0μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅱ)，使用前配制。

1.4 試樣的處理

將SupelcleanTMLC-C18固相萃取柱用5mL甲醇活化，5mL水平衡后，將葡萄酒樣品注入固相萃取柱，分別用體積分?jǐn)?shù)40%的乙醇溶液清洗(5mL×3)，體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇溶液洗脫(5mL×3)，收集洗脫液，加水定容至20mL，經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾后，供高效液相色譜測定用。

1.5 紫外-可見分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取2.0μg/mL羅丹明B溶液在200～700nm進(jìn)行波長掃描，最大吸收波長為553nm。在553nm波長處，以水為參比，分別測定1.3節(jié)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅰ)的吸光度，以質(zhì)量濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：A=0.226C＋0.0008，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

1.6 高效液相色譜條件

色譜條件(Ⅰ)：流動(dòng)相A：乙腈；B：水。梯度洗脫程序：0～5min，A:B(V/V)=15:85；5～30min，A:B(V/V)=45:55。流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：254nm；進(jìn)樣量：20μL。

色譜條件(Ⅱ)：流動(dòng)相：乙腈:水=45:55(V/V)；流速：1.0mL/min；檢測波長：254nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 固相萃取條件的選擇

2.1.1 清洗劑和清洗次數(shù)的選擇

將C18固相萃取柱用甲醇活化(5mL×2)，用蒸餾水平衡(5mL×2)；取5mL葡萄酒注入C18固相萃取柱，收集萃取后的濾液。再分別用5mL蒸餾水、體積分?jǐn)?shù)10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液和無水乙醇連續(xù)清洗，分別收集各個(gè)清洗液，用水定容至10mL。在553nm波長下以水為參比分別測定它們的吸光度和葡萄酒原液及萃取后濾液的吸光度，分別計(jì)算每個(gè)清洗劑所對(duì)應(yīng)的單次清洗率，結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，清洗至乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)40%時(shí)葡萄酒基質(zhì)的總清洗率已接近90%，因此，選擇40%的乙醇溶液作清洗劑較為適宜。

表1 清洗劑的選擇Table 1 Selection of washing solvent for Supelclean- C18 SPE column

另取葡萄酒5mL，注入C18固相萃取柱，用40%乙醇溶液5mL，多次清洗，分別收集清洗液，用水定容至10mL，在553nm波長處以水為參比分別測定它們的吸光度。計(jì)算清洗率，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，清洗至第3次時(shí)清洗液已無色，總清洗率已達(dá)93.28%。

表2 清洗次數(shù)的選擇Table 2 Selection of washing times for Supelclean-C18 SPE column

取5.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，經(jīng)C18固相萃取柱吸附后，分別用40%的乙醇溶液5mL清洗多次，分別收集清洗液并定容至10mL，在553nm波長下分別測定它們的吸光度，以驗(yàn)證上述清洗程序是否對(duì)羅丹明B產(chǎn)生影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 清洗劑和清洗次數(shù)的驗(yàn)證Table 3 Verification of optimal washing solvent and washing times

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羅丹明B不受清洗過程的影響，可完全保留在萃取柱中。選擇40%的乙醇清洗3次，葡萄酒中的基質(zhì)成分的總清洗率可達(dá)93.28%，而目標(biāo)化合物羅丹明B仍保留在萃取柱中，不受清洗過程的影響。因此確定40%的乙醇為清洗劑，清洗次數(shù)為3次。2.1.2 洗脫劑和洗脫次數(shù)的選擇

取5.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，分別注入3支C18固相萃取柱中進(jìn)行吸附后，分別用5mL乙腈、甲醇、無水乙醇洗脫，分別收集洗脫液并用水定容至10mL，按1.5節(jié)方法分別測定吸光度，計(jì)算洗脫率(洗脫率/%=洗脫量/吸附量×100)，結(jié)果見表4。表明甲醇的洗脫能力大于無水乙醇和乙腈，因此，選擇甲醇為洗脫劑。

表4 洗脫劑種類的選擇Table 4 Selection of elution solvent for Supelclean-C18 SPE column

取4.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，經(jīng)C18固相萃取柱吸附后，分別用5mL體積分?jǐn)?shù)10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的甲醇溶液和甲醇連續(xù)洗脫，分別收集各洗脫液，用水定容至10mL，按1.5節(jié)方法分別測定吸光度，計(jì)算每個(gè)洗脫劑所對(duì)應(yīng)的單次洗脫率，結(jié)果見表5。結(jié)果表明：體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇溶液對(duì)應(yīng)的洗脫率最大，因此，確定洗脫劑中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為80%。

表5 洗脫劑比例的選擇Table 5 Selection of methanol concentration for Supelclean-C18 SPE column

取4.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，經(jīng)C18固相萃取柱吸附后，用80%的甲醇溶液5mL洗脫多次，分別收集洗脫液，用水定容至10mL；按1.5節(jié)方法分別測定吸光度，計(jì)算各次的洗脫率，前3次的總洗脫率為103.9%，結(jié)果見表6。

表6 洗脫次數(shù)的選擇Table 6 Selection of elution times for Supelclean-C18 SPE column

由表6可知，選擇80%的甲醇溶液為洗脫劑洗脫3次，可將羅丹明B 洗脫。因此可確定固相萃取條件為：以40%的乙醇溶液作為清洗劑，清洗3次；以80%的甲醇溶液作為洗脫劑，洗脫3次。

2.2 固相萃取條件的驗(yàn)證

在同一條件下，比較固相萃取時(shí)選擇的最大吸收波長553nm和254nm兩個(gè)波長下的色譜圖，并兼顧葡萄酒中其他組分的檢出，確定檢測波長為254nm；按色譜條件(Ⅰ)測定羅丹明B對(duì)照品、陰性葡萄酒樣品和加標(biāo)樣品的色譜圖，如圖1所示。在色譜條件(Ⅰ)下羅丹明B的保留時(shí)間為9.90min。

圖1 羅丹明B對(duì)照品、陰性葡萄酒樣品和加標(biāo)樣品的色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of spiked sample (a)，standard rhodamine B (b) and unspiked sample (c)

由圖1可知，色譜條件(Ⅰ)能使葡萄酒中的基質(zhì)峰與羅丹明B的色譜峰基線分離。取葡萄酒原液5mL，注入C18固相萃取柱，按照以上確定的固相萃取條件和步驟進(jìn)行處理，分別收集其萃取后的濾液、清洗液、洗脫液并用水定容至20mL；另取葡萄酒原液5mL，加水稀釋至20mL；將各溶液經(jīng)0.45μm的有機(jī)濾膜過濾，取濾液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅰ)進(jìn)行測定。葡萄酒上柱后的萃取濾液、清洗液、洗脫液和葡萄酒原液的色譜圖如圖2所示。

圖2 葡萄酒濾液、清洗液、洗脫液和原液色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of flow-through (a), effluent (b), eluate (c)as a result of SPE separation and raw wine sample (d)

從圖2可以看出，葡萄酒中的大部分色素物質(zhì)不被固相萃取柱保留，而隨濾液流出萃取柱；少部分被保留的物質(zhì)在用40%乙醇溶液清洗3次即被完全除去，洗脫液中已無基質(zhì)物質(zhì)存在。說明清洗條件可行。

取10.0μg/mL的羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，注入C18固相萃取柱，按照以上確定的固相萃取條件和步驟進(jìn)行處理，分別收集其萃取后的濾液、清洗液、洗脫液，加水定容至20mL；另取10.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，加水定容至20mL(含羅丹明B 2.5μg/mL)；將各溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾，取濾液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅰ)進(jìn)行測定。羅丹明B對(duì)照品溶液上柱后的萃取濾液、清洗液、洗脫液和羅丹明B對(duì)照品溶液的色譜圖如圖3所示。從圖3可以看出，上柱后的濾液及清洗液中不含羅丹明B，說明羅丹明B上柱后可完全保留在柱中，并且在清洗過程中不被清洗；羅丹明B只出現(xiàn)在洗脫液中，說明其只在洗脫步驟中被洗脫。

圖3 羅丹明B對(duì)照品萃取濾液、清洗液、洗脫液和對(duì)照品溶液色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of flow-through (a), effluent (b), eluate (c)as a result of SPE separation and standard rhodamine B (h)

取羅丹明B貯備液適量，用葡萄酒稀釋，制成質(zhì)量濃度10.0μg/mL的加標(biāo)樣品溶液。取該加標(biāo)樣品溶液5mL，注入C18固相萃取柱，按照以上確定的固相萃取條件和步驟進(jìn)行處理，分別收集其萃取后的濾液、清洗液、洗脫液，分別用水定容至20mL；另取10.0μg/mL加標(biāo)樣品溶液5mL，加水定容至20mL(含羅丹明B 2.5μg/mL)。將上述各溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾，取濾液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅰ)進(jìn)行測定。加標(biāo)樣品上柱后的萃取濾液、清洗液、洗脫液和加標(biāo)樣品原液的色譜圖如圖4所示。由圖4可以看出，葡萄酒中的基質(zhì)峰和羅丹明B的色譜峰基線分離，且峰形尖銳。葡萄酒中的基質(zhì)色素物質(zhì)只出現(xiàn)在過柱萃取后的濾液和清洗液中，而洗脫液中除羅丹明B外無其他雜質(zhì)峰，說明經(jīng)過固相萃取和清洗步驟，已將樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)物除去，不會(huì)干擾羅丹明B的測定。

圖4 加標(biāo)樣品萃取濾液、清洗液、洗脫液和加標(biāo)樣品原液色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of flow-through (a), effluent (b), eluate (c)as a result of SPE separation and spiked wine sample (d)

由圖2～4可知：葡萄酒中的大部分色素物質(zhì)不被固相萃取柱保留，而隨濾液流出萃取柱；少部分被保留的物質(zhì)在用40%乙醇溶液清洗3次后即被完全除去，而目標(biāo)化合物羅丹明B不受清洗過程的影響仍保留在萃取柱上；洗脫液中除了羅丹明B外無其他雜質(zhì)峰，說明80%甲醇溶液洗脫3次能將目標(biāo)化合物羅丹明B洗脫。

以上驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所選擇的固相萃取條件能將葡萄酒中雜質(zhì)物質(zhì)和目標(biāo)化合物羅丹明B分離，從而達(dá)到對(duì)樣品的凈化和對(duì)目標(biāo)化合物的富集作用。符合實(shí)驗(yàn)要求。

2.3 HPLC法標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

取1.3節(jié)質(zhì)量濃度1.0～10.0μg/mL的羅丹明系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅱ)，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)進(jìn)行測定，以質(zhì)量濃度C/(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=87884C－4654，相關(guān)系數(shù)R=0.9924。表明在1.0～10.0μg/mL范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，符合定量要求。以RSN=3計(jì)算方法的最低檢出線為0.25μg/mL。

2.4 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

取羅丹明B儲(chǔ)備液適量，用葡萄酒稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5μg/mL系列加標(biāo)溶液。各取20mL注入C18固相萃取柱。在所選擇的固相萃取條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將各系列加標(biāo)溶液的洗脫液用水定容至20mL，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表7。

表7 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 7 Results of spike recovery test

由表7可知，加標(biāo)質(zhì)量濃度在1.5～3.5μg/mL之間回收率較穩(wěn)定，平均回收率為72.06%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.87%。

2.5 精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取5.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)平行測定5次，峰面積的RSD為0.87%，表明該方法精密度良好。

配制5份加標(biāo)水平為2.0μg/mL羅丹明B的加標(biāo)樣品溶液20mL，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)分別對(duì)洗脫液進(jìn)行測定，結(jié)果見表8?；厥章实腞SD為2.34%，表明該方法的重復(fù)性良好。SupelcleanTMLC-C18固相萃取柱至少可以重復(fù)使用10次。

表8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 8 Results of repeatability test

表9 固相萃取柱使用壽命實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 9 Effect of repeated use of Supelclean-C18 SPE column on rhodamine B recovery

2.7 實(shí)際樣品的測定

經(jīng)2.2節(jié)固相萃取條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明，加標(biāo)樣品經(jīng)過固相萃取及清洗步驟后，洗脫液已很純凈，因此實(shí)際樣品分析可按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)進(jìn)行。在色譜條件(Ⅱ)下羅丹明B的保留時(shí)間為6.40min，其色譜圖見圖5。

圖5 羅丹明B色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram of standard Rhodamine B

對(duì)市售的多個(gè)葡萄酒樣品按1.4節(jié)步驟進(jìn)行萃取、凈化、洗脫，洗脫液按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)進(jìn)行分析，將這些樣品的色譜圖和羅丹明B對(duì)照品色譜圖進(jìn)行比較，樣品在6～7min之間均無色譜峰出現(xiàn)，表明這些市售葡萄酒樣品不含羅丹明B。各樣品色譜圖分別見圖6。

2.6 固相萃取柱使用壽命實(shí)驗(yàn)

用一支固相萃取柱，取加標(biāo)水平為12μg/mL的樣品5mL，按1.4節(jié)方法進(jìn)行試樣處理，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)測定。對(duì)一支固相萃取柱進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)(固相萃取柱可用9:1的甲醇/冰醋酸(V/V)再生)，計(jì)算各次的回收率，結(jié)果見表9。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在加標(biāo)水平高達(dá)12μg/mL的情況下，固相萃取柱重復(fù)使用10次，回收率仍可達(dá)67%～63%，變化較小。因此，可以判定

圖6 冰玫瑰(A)、貴族全汁(B)、紅房子(C)、赤霞珠(D)、情人醉(E)葡萄酒樣品色譜圖Fig.6 HPLC chromatogram of Bingmeigui (A), Guizu (B), Hongfangzi(C), Chixiazhu (D) and Qingrenzui (E) grape wine samples

3 結(jié) 論

3.1 本實(shí)驗(yàn)建立固相萃取凈化、富集，高效液相色譜檢測葡萄酒中禁用色素羅丹明B的方法。該方法靈敏度高，精密度和重復(fù)性好。

3.2 對(duì)C18固相萃取柱進(jìn)行使用壽命測試，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在羅丹明B添加質(zhì)量濃度高達(dá)12μg/mL時(shí)LC-C18固相萃取柱至少可以重復(fù)使用10次。

3.3 雖然在市售葡萄酒樣品中未發(fā)現(xiàn)含羅丹明B的陽性樣品，但本實(shí)驗(yàn)建立的方法可以作為快速檢測葡萄酒中羅丹明B的依據(jù)。

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Determination of Rhodamine B in Red Wine by Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography

LI Xiao-yan1,2，LI Mei1，CHEN Qi-feng1，WEI Sheng-yan1，LUO Yu1，TONG Hai-juan1
(1. College of Chemistry and Ecological Engineering, Guangxi University for Nationalities, Nanning 530006, China；2. Key Laboratory of Development and Application of Forest Chemicals of Guangxi Province, Nanning 530006, China)

A solid phase extraction followed by high performance liquid chromatographic method was developed for the analysis of the prohibited colorant rhodamine B in red wine. The separation of rhodamine B from wines was achieved on a Supelclean-C18SPE column washed with 40% ethanol aqueous solution (V/V) and eluted with 80% methanol aqueous solution (V/V) prior to analysis on a high performance liquid chromatography equipped with a UV detector. The calibration curve of the method was linear over the range of 1.0 to 10.0μg/mL with a correlation coefficient of 0.9924. The recoveries for rhodamine B standard spiked in the range of 1.5 to 3.5μg/mL were between 69.67% and 75.00% with a relative standard deviation (RSD) of 2.87% (n = 5).The detection limit was 0.25μg/mL. Owing to advantages of good linearity, low limit of detection, high precision and rapidity,this method is suitable for the determination of rhodamine B in red wine.

solid phase extraction；high performance liquid chromatography；rhodamine B；red wine

O657.72

A

1002-6630(2011)08-0238-06

2010-07-04

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2010GXNSFA013047)；廣西教育廳科研項(xiàng)目(200911LX84)

李小燕(1961—)，女，研究員，主要從事現(xiàn)代分離分析技術(shù)研究。E-mail：lixiaoyan73515@163.com