HPLC法測定火麻仁中α-亞麻酸的含量*

夏林波，鄧仕任，郭 瑩

（遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600）

分析測試

HPLC法測定火麻仁中α-亞麻酸的含量*

夏林波，鄧仕任，郭 瑩

（遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600）

本文采用HPLC法對中藥火麻仁中α-亞麻酸進行了含量測定。確定色譜條件為：色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18（150mm×4.6mm,5μm）；流動相乙腈-水（體積比為80∶20）；流速1.0mL·min-1；檢測波長210nm；柱溫30℃。在此條件下，α-亞麻酸甲酯與其它組分得到良好的分離，線性范圍為10.5～168μg（r=0.9998），平均加樣回收率為97.26%（RSD=0.84%）。

火麻仁；α-亞麻酸；高效液相色譜法

Abstract：The method of determination α -linolenic acid in hemp seed by HPLC was established in this thesis.The chromatography was carried out on an Agilent Eclipse XDB-C18column （150mm×4.6mm,5μm）with acetonitrile-water（V∶V=80∶20）as themobile phase at a flow rate of 1.0mL·min-1,The detection wavelength was set at 210nm.α-linolenic acid separated thoroughly from other components on this condition,the calibration curve was linearwithin the range of 10.5～168 μg（r=0.9998）and the average recoverieswere 97.26%（RSD=0.84%）.

Key words：hemp seed;α-linolenic acid;high performance liquid chromatography

火麻仁別名麻子、麻子仁、大麻子，為桑科植物大麻Cannabissativa L．的干燥成熟種仁，是一味亦藥亦食的潤下藥，其性味歸經甘、平，主治腸燥便，血虛津虧等癥[1]。現代研究表明，火麻仁中油脂含量非常豐富（約占30%），火麻仁油脂對便秘和腹瀉有良好的雙向治療作用[2]，因此，建立火麻仁中油脂成分的分析方法對火麻仁的系統研究具有重要意義。文獻中關于火麻仁油脂中脂肪酸的化學成分研究多采用GC-MS法[3]，然而該方法對儀器要求較高，考慮到HPLC的通用性和普及性，本文采用柱前衍生化，結合HPLC技術，建立了火麻仁藥材中的特征成分－α-亞麻酸的含量測定方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Shimadzu LC-10Avp高效液相色譜儀；AR2140電子分析天平（力能）；RE52CS旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；KQ2200型超聲波清洗器（舒美），HH-4數顯恒溫水浴鍋（國華）。

α-亞麻酸甲酯對照品（中國藥品生物制品檢定所）；火麻仁購于河北安國，經遼寧中醫(yī)藥大學鑒定教研室翟延君教授鑒定為?？浦参锎舐镃annabis sativa L.的干燥成熟果實；色譜純甲醇（天津科密歐）；二次重蒸水，其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件色譜柱：AgilentEclipse XDB-C18（150mm×4.6

mm,5μm）；流動相：乙腈 - 水（80∶20）；檢測波長：

210 nm；流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30℃，進樣量

10μL。

1.3 對照品溶液的制備

精密稱取α-亞麻酸甲酯對照品105.0mg，轉移至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻即得。（α- 亞麻酸甲酯 10.5mg·mL-1）。

1.4 火麻仁油脂的提取

準確稱取火麻仁藥材粉末（過40目篩）5.00 g，置具塞錐形瓶中，加入75mL石油醚，冷浸30min后，超聲振蕩30min，過濾后取濾液。重復上述提取過程3次，濾液合并后減壓蒸干溶劑，得火麻仁油脂，收率31.2%。

1.5 火麻仁樣品的甲酯化

準確稱取火麻仁油脂0.20g，置25mL燒瓶中，加入5%NaOH-CH3OH溶液4mL，60℃水浴回流30min（油滴完全消失），冷卻后加入14%BF3-CH3OH甲醇溶液5mL，繼續(xù)回流2min，繼而加入4mL正庚烷回流5min，冷卻，加入5mL飽和NaCl溶液振蕩后分層，精密吸取上清液1mL，揮干溶劑，殘留物用甲醇定容至1mL，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2 結果與討論

2.1 線性關系考察

精密吸取對照品溶液 1、4、8、12、16 μL，注入高效液相色譜儀中，按1.2項下色譜條件測定色譜峰面積，以絕對進樣量為橫坐標（X）、峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，并計算線性回歸方程為Y=3.96×105X+1.65×107，r=0.9998。結果表明 α-亞麻酸甲酯在10.5～168μg范圍內，其峰面積與進樣量有良好的線性關系。

2.2 精密度試驗

取同一供試品溶液，按1.2項下色譜條件，連續(xù)進樣5次，測得α-亞麻酸甲酯峰面積值的相對標準偏差為0.70%，表明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗

取同一新鮮制備的供試品溶液，在 0、2、4、6、8、10 h各進樣10μL，測得α-亞麻酸甲酯峰面積的相對標準偏差0.90%，表明α-亞麻酸甲酯在10 h內穩(wěn)定。

2.4 重復性試驗

取同一供試品5份，按1.4項下方法制備5份供試液，分別測定α-亞麻酸甲酯含量，相對標準偏差分別為0.80%，表明方法重復性較好。

2.5 加樣回收率試驗

取已知含量（α-亞麻酸含量為83.9mg·g-1）的火麻仁粉末5份，各約0.64 g，分別加入α-亞麻酸甲酯對照品溶液（10.5mg·mL-1）5μL，按 1.4、1.5 項制備供試液，求得α-亞麻酸甲酯平均加樣回收率為97.26%，相對標準偏差為0.84%。

2.6 樣品測定

平行取3份火麻仁藥材粉末5 g，按1.4、1.5項分別制成供試品溶液。取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀測定含量，結果顯示該批次火麻仁藥材中α-亞麻酸含量為83.9mg·g-1，色譜圖顯示該峰峰型對稱，與相鄰峰達到基線分離。具體測定結果見表1，樣品色譜圖見圖1。

表1 α-亞麻酸含量測定結果Tab.1 Determination results for contentofα-linolenic acid

圖1 火麻仁供試品溶液高效液相色譜圖Fig.1 HPLC of hemp seed sample

3 結論

現代研究證明，多不飽和脂肪酸有明顯降低高密度脂蛋白血清膽固醇作用，進而減少高血壓、心臟病及中風等疾病的發(fā)病率，在食品、藥品等領域具有廣泛的用途[4]?；鹇槿手杏椭控S富（約占30%），且不飽和脂肪酸（如α-亞麻酸、亞油酸）含量很高，約占油脂總量的85%以上，其油脂被認為是火麻仁潤腸通便作用的有效成分，因而建立油脂的成分分析及含量測定方法對火麻仁的質量控制具有重要意義。本文采用HPLC法，建立了火麻仁中亞麻酸含量的測定方法，該法簡便、易行、適用范圍廣，經方法學考察證明準確、可靠、重復性好，可作為火麻仁中α-亞麻酸的質量控制方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京:化學工業(yè)出版社,2010.74.

［2］張明發(fā),朱自平.火麻仁的消化系統藥理研究概述［J］.藥學實踐雜志,1997,15（5）:267.

［3］張媛,王 之.火麻仁脂溶性成分的GC-MS分析［J］.西北植物學報,2006,26（9）:195.

［4］鄭子新,張榮欣.構成脂肪的脂肪酸和必需脂肪酸（營養(yǎng)與健康卷）［M］.成都:四川人民出版社,1999.50.

Determ ination ofα-linolenic acid in hem p seed by HPLC*

XIA Lin-bo,DENG Shi-ren,GUO Ying

（College of Pharmacy,Liaoning University of Tradional Chinese Medicine,Dalian 116600,China）

O657.7 TS225.1

A

1002-1124（2011）03-0017-03

2010-12-22

遼寧省教育廳科學技術研究項目（No.2008450）；遼寧中醫(yī)藥大學優(yōu)秀青年藥學人才基金（yxrc0912）

夏林波（1977-），女，講師，博士，主要研究方向：中藥分析。

導師簡介：鄧仕任（1979-），男，副教授，博士，主要研究方向：中藥質量標準規(guī)范化，中藥炮制。