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    BRD7在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達及臨床意義

    2011-09-11 07:48:24陳龍喻風(fēng)雷
    中國肺癌雜志 2011年10期
    關(guān)鍵詞:結(jié)構(gòu)域免疫組化淋巴結(jié)

    陳龍 喻風(fēng)雷

    溴區(qū)包含蛋白7(bromodomain-containing protein 7,BRD7)基因?qū)儆赽romodomain家族成員,該家族的大多數(shù)成員與上皮類腫瘤、惡性血液病的發(fā)生密切相關(guān)[1]。過表達BRD7基因可抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進程,并部分逆轉(zhuǎn)鼻咽癌細(xì)胞的惡性表型[2]。基于BRD7在鼻咽癌中的作用及與上皮類腫瘤的密切關(guān)系,推測BRD7可能參與肺癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究旨在通過免疫組化技術(shù)檢測BRD7在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)組織中的表達,探討B(tài)RD7基因在NSCLC臨床和病理診斷中可能的作用及意義。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料 收集2009年1月-2011年5月中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院有明確病理診斷的NSCLC手術(shù)標(biāo)本101例作為實驗組,并取其中33例正常組織(距癌組織>10 cm)標(biāo)本作為對照組,以上標(biāo)本切取后立即置于液氮中保存?zhèn)溆茫溆嗖糠殖R?guī)送病理檢查。

    101例NSCLC包括男性81例,女性20例,年齡36歲-78歲,平均53歲。根據(jù)2004年WHO肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)進行組織學(xué)分類:鱗癌44例,腺癌52例,大細(xì)胞癌5例;高分化7例,中分化73例,低分化16例(大細(xì)胞癌屬于未分化癌,故未納入該分組)。依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟2009年修訂的肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進行分期:I期52例,II期17例,III期32例;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者47例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者54例。所有患者術(shù)前均未行化療、放療等輔助治療。

    1.2 實驗試劑與方法 大鼠抗-BRD7單抗原液(1.0 mg/mL)購自美國Sigma生物技術(shù)公司,即用型二步法大鼠免疫組化檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

    試驗方法:標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定,常規(guī)脫水包埋,4 μm厚連續(xù)切片,石蠟切片常規(guī)HE染色進行組織學(xué)認(rèn)定后,采用免疫組化二步法檢測BRD7在不同肺組織中的表達。DAB顯色,以PBS代替一抗作陰性對照,用已知陽性肺癌切片作陽性對照。

    1.3 實驗結(jié)果及判斷標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞內(nèi)呈棕色顆粒者為陽性染色。根據(jù)染色細(xì)胞百分率和染色程度進行評定和分析。每例均隨機觀察10個高倍視野(×400),每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞,陽性細(xì)胞率計分標(biāo)準(zhǔn):≤10%為0分,11%-25%為1分,26%-50%為2分,51%-75%為3分,>75%為4分。染色強度:淺棕色為1分,棕色為2分,深棕色為3分。最后按乘積分?jǐn)?shù)分為4個等級:0分為陰性(-),1分-4分為弱陽性(+),5分-8分為中度陽性(++),9分-12分為強陽性(+++)。結(jié)果判斷:將(-)和(+)定為陰性表達,(++)和(+++)定為陽性表達。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件,組間比較采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 BRD7在NSCLC癌組織、正常肺組織中的表達 BRD7蛋白的表達以細(xì)胞核為主,在正常肺組織中很少見到淺棕色顆粒,表明BRD7蛋白在正常肺組織中低表達或不表達;在癌組織中可以看到大部分組織都出現(xiàn)較多的棕色或深棕色顆粒,顯示BRD7蛋白表達明顯增強(圖1)。BRD7蛋白在正常肺組織組及NSCLC組表達陽性率分別為6.1%(2/33)和76.2%(77/101),兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=50.622, P<0.001)。

    2.2 BRD7的表達與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者BRD7的陽性表達率(89.4%)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(64.8%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004)。BRD7的陽性表達率隨著TNM分期的升高而升高,I期、II 期、III期患者中分別為65.4%、76.5%、93.8%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.012)。BRD7的表達與患者性別、年齡、吸煙、病理類型、分化程度無關(guān)(P>0.05)(表1)。

    3 討論

    肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤,其中約有80%為NSCLC。近年來NSCLC發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升和年輕化趨勢,其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是一個極其復(fù)雜的多基因調(diào)控異常的過程[3,4]。因此,研究肺癌的病因、發(fā)病機制、尋找新的治療靶點具有重要的臨床意義。BRD7基因是1999年克隆的一個新的bromodomain基因,該基因定位于染色體16q12.1-12.2, cDNA全長2,317 bp,其編碼產(chǎn)物BRD7蛋白是一種含溴區(qū)(bromodomain)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì),屬于bromodomain家族成員[5]。溴區(qū)結(jié)構(gòu)域是一個進化上高度保守的功能結(jié)構(gòu)域,可特異性地與組蛋白末端乙?;馁嚢彼嵛稽c結(jié)合,并將核內(nèi)的組蛋白乙酰化信號傳遞給轉(zhuǎn)錄相關(guān)的蛋白質(zhì)復(fù)合物,通過改變?nèi)旧|(zhì)的構(gòu)象參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控[6]。近年來國內(nèi)研究人員對BRD7基因在鼻咽癌中的功能研究結(jié)果[7,8]表明,BRD7在鼻咽癌中具有抑瘤作用。

    研究[9-11]表明BRD7基因是一個p53依賴的抑癌基因,BRD7基因與p300相互作用,通過溴區(qū)結(jié)構(gòu)域連接乙?;M蛋白,幫助維持p53轉(zhuǎn)錄時連接位點的組蛋白在一個合適的乙?;癄顟B(tài);同時BRD7基因被鑒別為BRG1的特有的染色體重塑復(fù)合體,可減弱p21的表達,從而降低p53和p21啟動子連接,促進p53導(dǎo)致核小體重新分布而發(fā)生染色體重塑。此外BRD7基因作為一個其它蛋白轉(zhuǎn)錄輔助因子參與Ras/MEK/ERK和Rb/E2F途徑的調(diào)節(jié)[1]。因此BRD7不僅參與p53調(diào)控,也參與細(xì)胞周期管理基因的調(diào)節(jié)。

    圖1 BRD7在不同組織中的表達情況(SP法;A、C、E×100;B、D、F×400)。A、B:BRD7在正常肺組織中低表達;C、D:在鱗癌中高表達;E、F:在腺癌中高表達。Fig 1 The expression of BRD7 in different tissues (SP method; A, C, E×100; B, D, F×400). A and B: low expression of BRD7 in normal lung tissue; C and D:high expression in squamous cell carcinoma tissue; E and F: high expression in adenocarcinoma tissue.

    本研究對NSCLC的病理標(biāo)本進行免疫組化檢測,首次方便、快速、高效地檢測了BRD7在NSCLC中的表達,并探討其與肺癌患者性別、年齡、吸煙情況、組織類型、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及臨床分期的關(guān)系,從而進一步探討B(tài)RD7在肺癌中的作用。本研究發(fā)現(xiàn)BRD7在NSCLC癌組織中有較高陽性表達率,說明BRD7在NSCLC中的表達具有較高的敏感性。通過進一步分析發(fā)現(xiàn)BRD7在NSCLC中的表達與性別、年齡、吸煙情況、組織類型及分化程度無關(guān),提示BRD7靶點的NSCLC治療有較廣泛的適宜人群。BRD7在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,不同TNM分期中BRD7的陽性表達率隨著分期的升高而升高,提示BRD7可以作為針對促進腫瘤轉(zhuǎn)移的在體標(biāo)志物。許多研究[7-10]表明,BRD7可促進細(xì)胞的運動、粘附及遷移,在細(xì)胞生長、生存、轉(zhuǎn)化中也具有重要作用,提示BRD7可能與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

    研究[12]發(fā)現(xiàn)人類腫瘤的半數(shù)都發(fā)生p53的突變,且突變多發(fā)生在外顯子5-8。當(dāng)p53基因發(fā)生突變時其介導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控,DNA合成程序紊亂,發(fā)生遺傳不穩(wěn)定性及多倍性,也可能使p53介導(dǎo)的凋亡喪失而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。突變的p53基因不僅抑癌活性喪失,而且具備促進癌癥發(fā)生的作用,p53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)變成癌基因。p53基因突變是肺癌中發(fā)生頻率最高的遺傳改變。Mechanic等[13]研究表明p53基因突變譜的不同可能影響到肺癌的易感性以及相應(yīng)腫瘤形成的結(jié)論。BRD7與p53有交互作用,被認(rèn)為是腫瘤抑制基因。BRD7在NSCLC中出現(xiàn)高表達,可能是由于BRD7基因突變,而使BRD7正常的蛋白功能喪失,因此雖然在肺癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達的趨勢,但是實際已經(jīng)喪失了抑制腫瘤功能,這種表達模式與p53類似。

    BRD7與NSCLC的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系,深入研究BRD7基因?qū)τ诹私夥伟┑陌l(fā)生、發(fā)展具有重要意義。BRD7在肺癌細(xì)胞中是否存在突變以及存在哪些位點的突變,尚需要進一步的深入研究。

    表1 BRD7的表達水平與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系Tab 1 Relationship between BRD7 expression and clinicopathological characteristics of non-small cell lung cancer

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