六味地黃丸對大鼠脂肪細(xì)胞生長的影響

蔣俊和，劉蓉芳

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.咸寧市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 咸寧 437100）

隨著人們保健意識的提高，人們越來越注重養(yǎng)生保健。保健品中以補(bǔ)虛為主，而補(bǔ)虛又以補(bǔ)腎為主，導(dǎo)致時下補(bǔ)腎藥物被大量濫用。不可否認(rèn)，六味地黃丸確實是一種好藥，但并非人人皆宜、多多益善。我們在臨床使用過程中發(fā)現(xiàn)即使無糖型六味地黃丸也可能具有引起各類人群肥胖的副作用[1]。因此，研究六味地黃丸對機(jī)體脂肪細(xì)胞生長的影響，對于科學(xué)、合理地使用六味地黃丸，具有很重要的指導(dǎo)意義。本文通過動物實驗進(jìn)一步證明其作用，并對其機(jī)制進(jìn)行了初步探討。現(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。

1 材料與方法[2-3]

1.1 材料

1.1.1 動物 SD大鼠，雄性75只，體質(zhì)量200～220 g，清潔級，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物 六味地黃丸8粒為3 g，每日用量為9 g），河南宛西制藥，公司提供。批號：061263。

1.1.3 儀器 卡尺，軟尺，精度為0.00的電子秤，動脈導(dǎo)管，剪刀，止血鉗，OLYMPUS1X70倒置顯微鏡。Motic Image Advanced 3.0圖像分析系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 藥物配制方法 六味地黃丸水溶液的配制：每天新鮮配制，以48粒六味地黃丸溶入100 mL蒸餾水中，攪拌待充分混勻后放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 高脂高營養(yǎng)飼料配制方法[4]自購原料，配方由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心加工。配方為：每100 g飼料中內(nèi)含豬油10 g，全脂奶粉15 g，白糖10 g，花生油 10 g，基礎(chǔ)飼料 55 g。

1.2.3 動物分組及飼養(yǎng)方法 75只雄性SD大鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分為3組，每組25只，3組大鼠平行飼養(yǎng)。正常組給予普通飼料，高脂飼料組（簡稱對照組）給予高脂飼料，于每天上午9：00給予蒸餾水灌胃。六味地黃丸組給予普通飼料，并于每天上午9：00給予六味地黃丸（簡稱實驗組）灌胃每只大鼠生藥量為90 mg/100 g，溶液濃度為固定濃度，4周和8周灌胃劑量隨大鼠體質(zhì)量增加而變化，自由飲用潔凈水及攝食。實驗室溫度18～27℃，相對濕度：40%～70%。

1.2.4 檢測指標(biāo)及方法[5]分別于第4周和第8周末，從各組隨機(jī)取出10只大鼠，根據(jù)體質(zhì)量以2%戊巴比妥鈉溶液2.3 mL/kg（45 mg/kg）腹腔注射麻醉并稱體質(zhì)量。取軟尺經(jīng)大鼠雙側(cè)髖骨頂點(diǎn)繞腹1周測量大鼠腹圍，并記錄。然后再用卡尺經(jīng)大鼠鼻尖至肛門測量大鼠體長，并記錄，用以計算大鼠Lee Index(肥胖評判指數(shù))。大鼠體質(zhì)指數(shù)Lee Index=體質(zhì)量(g)1/3×103/體長(cm)。最后沿腹正中線打開腹腔，取出腎周、腸系膜、睪周的脂肪墊并在精度為0.00的電子秤上稱取質(zhì)量，記錄，將腎周脂肪墊放入裝有甲醛固定液的瓶中，送檢。脂肪墊用甲醛固定液浸泡、脫水、切片、HE染色。在OLYMPUS1X70倒置顯微鏡下觀察脂肪組織病理學(xué)改變，用Motic Image Advanced 3.0圖像分析系統(tǒng)采集圖像，并將圖像用攝影鏡頭傳輸?shù)轿C(jī)顯示屏上，用Motic Image Advanced 3.0圖像分析系統(tǒng)測得脂肪細(xì)胞的截面積。最后計算所得的數(shù)據(jù)均值作為該部位脂肪細(xì)胞面積的最終數(shù)值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察

第1～2周：正常組大鼠攝食、活動、二便同前；實驗組、對照組大鼠攝食量均較正常組減少；實驗組大鼠有排軟便甚至腹瀉情形，墊料更換頻繁，活動減少；對照組大鼠也存在活動減少，排便軟等情況。

第3～4周：實驗組、對照組大鼠排軟便現(xiàn)象持續(xù)，但攝食較前增加；其中實驗組小便量多,墊料更換頻繁、活動不多、喜臥，部分大鼠腹圍開始增大但組內(nèi)不均勻；對照組大鼠腹圍快速增大并組內(nèi)均勻，活動不多、嗜睡、大便軟、量不多；正常組攝食一般，活動相對其他組較多，腹圍無增大現(xiàn)象,二便正常。

第5～8周：實驗組、對照組大鼠攝食均較正常組增多；實驗組排大便軟而多、活動減少、嗜睡、體態(tài)豐滿,但不及對照組,并組內(nèi)肥胖程度不均衡,性情溫順、皮肉結(jié)實、毛色光亮、體毛分布均勻、少脫毛；對照組排大便軟而少、活動少、精神萎頓、反應(yīng)遲鈍、體形肥胖、腹圍大,組內(nèi)相互間均衡,皮肉松弛、毛色無光亮、多脫毛、體毛分布不均勻；正常組大鼠攝食、活動均同前,皮肉結(jié)實度和毛色光亮度均不及實驗組,偶有脫毛。

2.2 大鼠Lee’s指數(shù)及腹圍比較

4周時：對照組大鼠腹圍和Lee’s指數(shù)均較正常組和實驗組大，并且差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05，P＜0.01），顯示肥胖對照成功；而實驗組與正常對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示此時六味地黃丸對大鼠的致肥胖作用不顯著。見表1。

8周時：對照組和實驗組大鼠Lee’s指數(shù)與腹圍均較正常對照組增大，并且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），提示此時六味地黃丸具有與高脂飼料相同的致肥胖作用；但對大鼠指標(biāo)的影響比六味地黃丸更顯著（高脂與六味地黃丸比P＜0.01），提示六味地黃丸對大鼠致肥胖的能力要大于正常飼料，但又不及高脂飼料。見表1。

從時間上看，正常組腹圍和Lee’s指數(shù)第8周與第4周相比，無明顯差異；而對照組和六味地黃丸組的大鼠腹圍和Lee’s指數(shù)，第8周均較第4周明顯增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。 結(jié)果見表1。

表1 六味地黃丸對大鼠腹圍與Lee’s指數(shù)數(shù)值的影響 （n=10，s）

表1 六味地黃丸對大鼠腹圍與Lee’s指數(shù)數(shù)值的影響 （n=10，s）

注：與正常組比△P＜0.05，△△P＜0.01；與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01；與第 8 周比 #P＜0.05，#＃P＜0.01。

腹圍(cm) Lee’s指數(shù)第4周 第8周 第4周 第8周正常組 16.790±1.216 17.390±1.162# 301.673±5.751 301.692±5.858對照組 18.240±0.368△△ 24.320±0.210＃# 312.787±7.349△ 333.009±9.378△△#實驗組 16.830±0.962**19.720±2.612△△**＃ 302.062±12.942*316.265±15.134△△**#組 別

2.3 大鼠腹腔內(nèi)臟脂肪含量、脂肪個數(shù)及面積

隨著飼養(yǎng)時間的增加，正常組脂肪個數(shù)和脂肪面積無明顯變化，而對照組和實驗組大鼠脂肪含量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），脂肪細(xì)胞面積明顯增大（P＜0.01），單位視野所見的脂肪細(xì)胞個數(shù)顯著減少（P＜0.01）。但組間比較有差別。見表2。

4周時：對照組的脂肪含量最多，與正常組和實驗組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），雖然其脂肪細(xì)胞面積均值最大、脂肪細(xì)胞個數(shù)均值最少，但較正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），而較實驗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。 實驗組的脂肪含量與正常組比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但其脂肪細(xì)胞個數(shù)之多和脂肪細(xì)胞的面積之小較正常組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

8周時：正常組的脂肪細(xì)胞個數(shù)及面積，相對第4周無明顯改變（P＞0.05），而對照組和實驗組均較第4周有明顯的改變（P＜0.01）；并且六味地黃丸顯示出與高脂飼料同樣增多脂肪含量、增大脂肪面積、減少單位視野所見脂肪細(xì)胞個數(shù)的能力，即較正常對照組均差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.01）；但高脂飼料對大鼠的這種影響較六味地黃丸更為顯著 （對照組與實驗組比，P＜0.05）。見表2，圖 1～2。

表2 六味地黃丸對大鼠脂肪含量、細(xì)胞個數(shù)及面積的影響

表2 六味地黃丸對大鼠脂肪含量、細(xì)胞個數(shù)及面積的影響

注：與正常組比△P＜0.05，△△P＜0.01；與對照組比 *P＜0.05，**P＜0.01；與第 8 周比 #P＜0.05，#＃P＜0.01。

組 別脂肪含量(g) 脂肪細(xì)胞個數(shù)(個) 脂肪細(xì)胞面積(μm2)第4周 第8周 第4周 第8周 第4周 第8周正常組 11.155±1.153 12.734±0.793## 29.50±6.15 30.20±4.39# 77 751.27±19 631.62 78 153.23±17 040.09#對照組 14.825±0.901△△ 19.565±1.923△△＃ 25.90±12.47 11.90±4.70△△#＃ 128 777.8±84 848.51 270 737.0±124 656.33△實驗組 11.099±0.721** 15.370±1.537△△**#＃ 64.10±13.09△△** 18.00±5.40△△*#＃ 28 030.75±11 158.19△△* 148 746.5±42 680.81△*△#＃*

圖1 六味地黃丸對第4周大鼠脂肪細(xì)胞的影響光鏡圖（10×10）

圖2 六味地黃丸對第8周大鼠脂肪細(xì)胞的影響光鏡圖（10×10）

3 討論

從中醫(yī)理論上認(rèn)識,六味地黃丸導(dǎo)致肥胖的原因可能是在體內(nèi)形成了痰濕，而形成痰濕引起肥胖可能與以下幾個方面有關(guān)。

3.1 腎陰陽失衡

中醫(yī)認(rèn)為，最理想的健康狀態(tài)，是陰陽平衡的狀態(tài)，即《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載的“陰平陽秘，精神乃治”。腎陰,又稱元陰、真陰,是人體陰液的根本,對全身各臟腑組織起滋養(yǎng)、濡潤的作用。腎陽,又稱元陽,是人體陽氣的根本,對全身各臟腑組織起溫煦、推動的作用。腎陰腎陽互相制約，對人體的代謝和功能起著調(diào)節(jié)作用，其中任何一方偏盛或偏衰都會導(dǎo)致陰陽不平衡而引起疾病。

歷代醫(yī)家認(rèn)為六味地黃丸是補(bǔ)腎之專品，并將其視為補(bǔ)陰之神方。如 《校注婦人良方》、《景岳全書》、《證治準(zhǔn)繩》皆認(rèn)為六味地黃丸為“壯水之劑，夫人之生，以腎為主，凡病皆由腎虛而致，此方乃天一生水之劑，無有不可用者，世所罕知?！薄夺t(yī)宗已任編》從六味地黃丸的組成及藥性上分析，認(rèn)為“此純陰重味潤下之方也，純陰腎之氣，重味腎之質(zhì)，潤下腎之性，非此不能使水歸其壑?！源艘詠?，為補(bǔ)陰之神方矣?！?/p>

正常大鼠體質(zhì)是處于陰陽平衡的狀態(tài)，服用六味地黃丸這種偏于助長腎陰一方的藥物后，勢必破壞了原先的陰陽平衡狀態(tài)，導(dǎo)致腎陰過度滋長，機(jī)體滋潤太過；而腎陽的一方卻相對不夠，溫煦不及，不能制約腎水，從而津液生成過多或者運(yùn)行緩慢，將原來的“滋潤、灌溉”變成了水濕泛濫，水液不走常道，或滲入腸胃，則大便溏；或水液停留體內(nèi)，日久聚而為痰引起肥胖。實驗中觀察到實驗組大鼠小便多，墊料易濕、更換頻繁和大便稀軟甚至不成形之現(xiàn)象，是否因六味地黃丸對正常體質(zhì)大鼠造成腎陽溫煦不及而導(dǎo)致體內(nèi)津液氣化失常而引起，尚待進(jìn)一步研究。

3.2 脾腎功能失衡

人體之中,精微物質(zhì)的生成、轉(zhuǎn)化的過程，即《素問·陰陽應(yīng)象大論》中“氣歸精，精歸化”的過程。這一過程需要保持相對的動態(tài)平衡，精微物質(zhì)才能被有效利用，代謝物則排出體外。反之，精微物質(zhì)若失去平衡，不能轉(zhuǎn)化，則精微物質(zhì)不能被機(jī)體所利用，反而形成痰濕積聚?！毒霸廊珪贩Q：“痰即人之津液，無非水谷所化。此痰也既化之物，而非不化之屬也。但化得其正，則形體強(qiáng)，營衛(wèi)充；而痰涎本血?dú)?，若化失其正，則臟腑病，津液敗，而血?dú)饧闯商迪选薄Ａ兜攸S丸雖然是三陰并補(bǔ)之方，但以滋補(bǔ)腎陰為主。土能克水，由于滋補(bǔ)腎陰太過，引起腎水泛濫，則反侮脾土，即土為水濕所困，導(dǎo)致脾的運(yùn)化水谷精微功能失常，脾不散精，積聚濁敗，漸成痰濕積聚，反為其害。

3.3 脾胃功能失調(diào)

脾為陰土，胃為陽土，脾喜燥惡濕，而胃喜濕惡燥。雖然中醫(yī)理論認(rèn)為六味地黃丸其組方有“三補(bǔ)”“三瀉”，“滋而不膩”“補(bǔ)而不滯”之說，其中茯苓、澤瀉利水祛濕，但其量效不敵熟地、山藥、山茱萸之滋膩，因而正常體質(zhì)下的大鼠，其脾土仍然為水濕所困；胃喜濕惡燥，它不為濕所困，加之六味地黃丸方中山藥、茯苓又有健脾胃之功，從而形成了胃強(qiáng)脾弱之證。即實驗中六味地黃丸能使大鼠食欲增加，但由于不能很好的將所攝取進(jìn)來的水谷精微正常地布散，故最后形成了肥胖。討論中后兩點(diǎn)也正符合中醫(yī)理論中“脾為生痰之源”之說。

六味地黃丸是非處方藥品，而不是保健品，它適用中醫(yī)辨證屬于腎陰虛證或見肝腎陰虛證的患者。因此，我們認(rèn)為必須按照中醫(yī)的辨證，或在中醫(yī)師的指導(dǎo)下服用，否則不但不能保健養(yǎng)生，反而會適得其反。

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