宮頸上皮內(nèi)瘤病變及宮頸鱗癌HPV與P16表達(dá)相關(guān)性研究

滕彥玲

宮頸鱗癌宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)由癌前病變演變?yōu)榘┑倪B續(xù)性病理過(guò)程。許多研究己經(jīng)提示，高危型人類乳頭瘤病毒(HPV)是導(dǎo)致宮頸癌的主要原因［1］。我們應(yīng)用抑制基因蛋白(P16)來(lái)檢測(cè)不同的HPV感染性宮頸病變中，為提高早期診斷率尋找更為客觀、可靠的指標(biāo)及監(jiān)測(cè)病變的進(jìn)展。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院活檢或手術(shù)切除的子宮頸組織標(biāo)本，分為2組:①實(shí)驗(yàn)組:共105例，其中子宮頸鱗癌15例，子宮頸上皮內(nèi)瘤變89例CINⅠ組39例，CINⅡ組18例，CINⅢ組32例;②對(duì)照組:20例為非子宮頸病變手術(shù)切除正常子宮頸組織標(biāo)本。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 HPV檢測(cè) 石蠟常規(guī)包埋切片，水化，枸櫞酸鹽緩沖液微波修復(fù)抗原15 min，免疫組化。HPV陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)以細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞 ＞5%者為陽(yáng)性。

1.2.2 P16檢測(cè) 所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，切片厚0.4 μm，常規(guī)HE染色，光鏡下行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，以確定病理診斷及分組。免疫組化染色采用S-P法，按說(shuō)明書(shū)操作。陽(yáng)性對(duì)照片為已知宮頸癌陽(yáng)性片，PBS代替一抗為陰性對(duì)照片。免疫組化結(jié)果:P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核棕黃著色，連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，以免疫組化反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)超過(guò)25%作為陽(yáng)性的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 HPV與P16在宮頸上皮內(nèi)瘤病變中表達(dá)的相關(guān)性

2 結(jié)果

HPV與P16在宮頸上皮內(nèi)瘤病變中表達(dá)的相關(guān)性，HPV16、P16在頸上皮內(nèi)瘤病變和癌組織中均有較高表達(dá)，在HPV陽(yáng)性表達(dá)的癌組織中，Ki267表達(dá)多在“++”以上，而12例HPV陰性癌組織中，P16亦為高表達(dá)。經(jīng)等級(jí)相關(guān)性分析，HPV和P16在頸上皮內(nèi)瘤病變和癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(χ2=20.11，P＜0.05)。見(jiàn)表1。

3 討論

人類腫瘤中的細(xì)胞增殖失控是發(fā)生惡性病變的重要原因，P16是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)的抑癌基因，它定位于人類染色體9P21，全長(zhǎng)8.skb，由2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子組成。P16是細(xì)胞周期蛋白依賴激酶CDK4/6的抑制因子，P16基因轉(zhuǎn)錄抑制必然導(dǎo)致P16表達(dá)減少甚至消失，cyclin D失去競(jìng)爭(zhēng)對(duì)象，大量與CDK4結(jié)合，激發(fā)Rb的磷酸化，細(xì)胞大量由G1期進(jìn)入S期開(kāi)始增殖，在無(wú)限制增殖過(guò)程中發(fā)生表型變化導(dǎo)致腫瘤形成。隨病變進(jìn)展，P16蛋白以漿表達(dá)→漿核共表達(dá)→核表達(dá)依次推進(jìn)，推測(cè)漿內(nèi)可能作為腫瘤抑制基因的靜止?fàn)顟B(tài)存在，需要時(shí)進(jìn)入核內(nèi)發(fā)揮作用。何慧儀等［2］發(fā)現(xiàn)，宮頸癌與癌前病變中P16的表達(dá)升高與HPV的感染有關(guān)，所以推測(cè)腫瘤細(xì)胞中P16的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)即意味著HPV在細(xì)胞中的整合。本研究發(fā)現(xiàn)P16的陽(yáng)性率及陽(yáng)性細(xì)胞的分布、著色強(qiáng)度在HPV感染的不同病變中均有不同，并隨著病變程度的加重P16陽(yáng)性率明顯增高，陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，著色明顯增強(qiáng)。對(duì)于P16蛋白在宮頸鱗癌中高表達(dá)可能與Rb基因的失活有關(guān)［3］。Rb可抑制P16基因的表達(dá)，提示在Rb基因失活的腫瘤中，失活的Rb蛋白一方面失去對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用，使細(xì)胞生長(zhǎng)失控，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生;另一方面解除了對(duì)P16的抑制作用，使P16轉(zhuǎn)錄反饋性表達(dá)增強(qiáng)，導(dǎo)致P16蛋白表達(dá)升高［4］。綜上所述，P16缺失可能導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生，其抑制作用可能是通過(guò)抑制宮頸癌的細(xì)胞周期實(shí)現(xiàn)的。因此P16基因在宮頸癌的診治中發(fā)揮重要作用，可成為基因治療宮頸癌的靶基因。

［1］車雅敏，王家璧.HPV在宮頸癌發(fā)病中的作用機(jī)制研究.國(guó)外醫(yī)學(xué)·腫瘤學(xué)分冊(cè)，2004，31(4):306-309.

［2］何慧儀，盧麗娜，杜洪，等.Ki-67、Survivin、P16表達(dá)在宮頸癌和宮頸癌前病變?cè)\斷中的意義.中國(guó)婦幼保健，2006，21(13):1825-1827.

［3］董建新，韓萍，侯靈彤.宮頸上皮內(nèi)瘤變與基因表達(dá).中國(guó)婦幼保健，2009，24(18):2591-2593.

［4］張亞靜，拉萊，蘇祖克，等.P16、Ki-67在子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30(4):372-374.