“CK-MB”測(cè)定的干擾現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)對(duì)策

彭 蘭,張 娥,萬(wàn) 芳,鄒志寶

(興山縣人民醫(yī)院,湖北 興山 443711）

用免疫抑制法檢測(cè)血清CK-MB活性,觀察其活力單位及與CK的比值關(guān)系作為診斷急性心肌梗死的相對(duì)特異性指標(biāo)、預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈再通的治療效果和觀察病情變化等,已被臨床廣泛應(yīng)用。一般情況下正常人CK-MB主要存在于人體心肌細(xì)胞內(nèi),血清中CK的存在形式主要是CK-MM,只有少量CK-MB,不超過(guò)總活性的5%,心肌梗死發(fā)生時(shí)最高值也不超過(guò)38%。但在日常檢測(cè)工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)臨床血清標(biāo)本中CK-MB檢測(cè)值與理論值不符合,最多見的就是CK-MB檢測(cè)值大于總CK檢測(cè)值的現(xiàn)象?，F(xiàn)就肌酸激酶及其同工酶的組成、臨床意義和檢測(cè)的方法學(xué)等方面簡(jiǎn)要分析其原因并就解決方法提出建議。

CK-MB存在于心肌細(xì)胞胞漿中,CK-MB作為診斷急性心肌梗塞或心肌壞死的特異時(shí)指標(biāo),在心肌壞死癥狀發(fā)作4-5 h達(dá)正常上限,12-24 h達(dá)高峰,72 h逐步恢復(fù)?；鶎訉?shí)驗(yàn)室多采用免疫抑制法測(cè)定CK-MB,對(duì)不同病程的心肌病提供較特異診斷,本室通過(guò)3組不同人群的CK-MB測(cè)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),采用免疫抑制法測(cè)定CK-MB指標(biāo)有假性增高現(xiàn)象,與臨床體征明顯不符,現(xiàn)先從實(shí)驗(yàn)原理探討;免疫抑制法測(cè)定CK-MB是用抗體將M亞基抑制,測(cè)定

B亞基,結(jié)果乘以2即為CK-MB活性,當(dāng)血清中出現(xiàn)文獻(xiàn)報(bào)道中的巨CK或CK-BB及其它成份時(shí),由于它們不受抗M亞基抗體抑制,其活性已完全測(cè)出,再乘以系數(shù)2,就可能出現(xiàn)CK-MB升高或高于總CK的現(xiàn)象,造成CK-MB結(jié)果失真,本室從1999.9-2000.5共收集71份血清測(cè)定CK-MB及總CK活性,現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的異常結(jié)果提出探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集10份本院血庫(kù)健康獻(xiàn)血員血清,收集56份本院心內(nèi)科病員血清,收集15份本院惡性腫瘤病員血清。

1.1.2 試劑及儀器 上海長(zhǎng)征公司提供的凍干粉劑,CB-171半自動(dòng)化分析儀。

1.2 方法

1.2.1 正確收集血清標(biāo)本,防止溶血,從血清采集到測(cè)定完畢在30 min以內(nèi)。

1.2.2 采用免疫抑制法測(cè)CK-MB及酶偶聯(lián)速率測(cè)總CK。

2 結(jié)果與討論

2.1 3組人群血清中CK-MB,總CK的測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 3組人群血清CK-MB、總CK測(cè)定結(jié)果

2.2 本室對(duì)10名獻(xiàn)血員進(jìn)行CK-MB檢測(cè),發(fā)現(xiàn)一例CK-MB值異常升高,達(dá)總CK活性的61%,經(jīng)體檢證實(shí)為健康人員,在56名心內(nèi)乎病員血清中,有16例CK-MB結(jié)果升高,基中有兩份大于總CK活性,數(shù)值為 264U/L,272 U/L;其余平均值達(dá)總CK35%。經(jīng)臨床追蹤調(diào)查,實(shí)驗(yàn)診斷與臨床體征明顯不符,實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在干擾成份;在15名惡性腫瘤血清中有7份血清CK-MB結(jié)果升高,其中一份大于總CK,數(shù)值為269 U/L。其平均值達(dá)總CK活性的22.3%,臨床診斷排除心肌病,確定為乳腺癌2例,卵巢癌1例,肺癌2例,胃癌 1例,肝癌1例。在56名心內(nèi)科病員血清中有28份標(biāo)本CK-MB和總CK結(jié)果同時(shí)升高,經(jīng)臨床證實(shí),均系心肌病患者,具相應(yīng)的臨床體征,在15份惡性腫瘤病員的血清中有一例CK-MB及總CK結(jié)果同時(shí)升高,臨床診斷為肺癌合并心肌病,本室測(cè)定的總CK單項(xiàng)活性增高數(shù)值范圍介于242-305 U/L,本文未做分析。

2.3 通過(guò)表1數(shù)據(jù)表明,采用免疫抑制法測(cè)定CKMB實(shí)驗(yàn)中存在干擾成分,基于基層實(shí)驗(yàn)條件有限,具體干擾成分的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行,現(xiàn)將部分文獻(xiàn)資料提示的干擾產(chǎn)生分析原因如下,以共商榷:

血清中存在的巨CK1,巨CK1是一種CK同工酶抗原與自身抗體的復(fù)合物,最多的CK-BB與IgG或IgA的復(fù)合物,也有少數(shù)CK-MM與IgG或IgA的復(fù)合物,巨CK1可至CK-MB假性增高,對(duì)有心肌缺血的患者,易引起錯(cuò)誤的判斷,故在對(duì)臨床解釋結(jié)果應(yīng)高度注意。

巨CK2是一種低聚的線粒體CK,又稱CKMt,存在細(xì)胞線粒體膜上,當(dāng)線粒體崩解時(shí),線粒體膜的小碎片進(jìn)入血液,故ckmt呈低聚狀態(tài),CK-Mt的抗原性與CKM和CKB不同,故抗M抗體不能抑制CK-Mt,形成CK-MB的假陽(yáng)性。較多文獻(xiàn)認(rèn)為,巨CK2與惡性腫瘤密切相關(guān),根據(jù)本室15例惡性腫瘤病員血清檢測(cè)CK-MB有7例結(jié)果升高的情況,進(jìn)一步證實(shí),在惡性腫瘤中血清存在特殊干擾成份,可致CK-MB假性升高。用免疫抑制法測(cè)定CK-MB時(shí),如出現(xiàn)CK-MB高于總CK的現(xiàn)象時(shí),就要懷疑有巨CK的存在。多見于一些自身免疫病患者血清。進(jìn)一步進(jìn)行鑒定方法有:

①瓊脂糖凝膠電泳分析?？梢裳暹M(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合熒光染色掃描分析,發(fā)現(xiàn)巨CK1位于CK-MM與CK-MB之間,巨CK2位于CK-MM的陰極側(cè)。

②熱失活法。將可疑血清置45℃20 min測(cè)定CK活性,發(fā)現(xiàn)CK-BB和CK-MB幾乎完全失活,而CK不受影響。

③免疫學(xué)結(jié)合電泳法。將可疑血清先與抗人IgG或IgA的抗血清進(jìn)行混合,置4℃過(guò)夜,離心取上清液進(jìn)行CK同工酶電泳。觀察與Ig反應(yīng)前后電泳區(qū)帶的變化。巨CK2無(wú)任何變化,但巨CK1則不同。只要與相應(yīng)的抗IgG或IgA抗血清發(fā)生反應(yīng)后,原有的異常帶減弱或消失,則提示巨CK1的存在,其形成與該免疫球蛋白有關(guān)。

④免疫學(xué)測(cè)定。用FEIA或CLIA等技術(shù)直接測(cè)定CK-MB質(zhì)量,觀察有無(wú)非CK-MB存在。目前建議在急性心肌梗死的診斷中建議用肌鈣蛋白如cTnI/cTnT,如用CK-MB則建議測(cè)定CK-MB質(zhì)量(CK-MBmass）,不要用免疫抑制法進(jìn)行測(cè)定。

CK-BB,正常血清中CK-BB極少,免疫抑制測(cè)定CK-MB方法設(shè)計(jì)的前提是將CK-BB忽略不計(jì),但當(dāng)血清CK-BB增高,而用免疫抑制法測(cè)定CK-MB時(shí),由于BB不受限制,其活性100%測(cè)出,且還乘上系數(shù)2,導(dǎo)致成倍的擴(kuò)大誤差,出現(xiàn)CK-MB等于或高于總CK活性的反?，F(xiàn)象。

腺苷酸激酶(AK）,AK在紅細(xì)胞和血小板中大量存在,當(dāng)樣本溶血或血小板未能去除的情況,AK或CK參與NADP轉(zhuǎn)化成NADPH,造成假陽(yáng)性。

在臨床實(shí)驗(yàn)中,因免疫抑制法快捷,價(jià)格適中,較適宜廣大基層醫(yī)療實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,又因是廣泛應(yīng)用中出現(xiàn)眾多的“干擾”現(xiàn)象,使CK-MB結(jié)果部分失真,針對(duì)這種情況,本室認(rèn)為,當(dāng)CK-MB/總CK超過(guò)30%或50%以上,應(yīng)考慮血清中有無(wú)巨CK或CK-BB存在,通常出現(xiàn)巨CK者往往是年齡較大的患者,女性較多,心血管疾病,惡性腫瘤,風(fēng)濕病,對(duì)此合理準(zhǔn)確地解釋CK-MB實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及采用實(shí)驗(yàn)特異性更高的檢測(cè)項(xiàng)目,在臨床心肌梗死的診斷至關(guān)重要。

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