血清中sHLA-G水平與自然流產的關系

范 倩，汪 泓，朱雄峰，王 萍

(皖南醫(yī)學院 1.醫(yī)學一系;2.微生物學與免疫學教研室，安徽 蕪湖 241002)

妊娠過程中，胎兒對于母體來說作為一種特殊的同種異體移植物，妊娠成功與否主要取決于母體對胎兒產生保護性免疫應答即母胎免疫耐受。有研究顯示，sHLA-G分子在抑制胎兒同種異體排斥過程中可能有決定性的作用，被認為可能是妊娠期一種特異性免疫抑制分子［1］，在維持正常妊娠中起著重要的免疫調節(jié)作用［2］。鑒于此，我們通過定量測定正常妊娠與自然流產患者血清中sHLA-G的水平，比較并探討血清中sHLA-G的表達水平與正常妊娠的關系。

1 資料和方法

1.1 研究資料 隨機選擇2010年3～6月在皖南醫(yī)學院門診部體檢并確診為妊娠的正常妊娠婦女16 例，平均年齡為(28.1 ±4.1)歲，平均孕周為(8.9±7.1)周;自然流產患者 16 例，平均年齡為(29.1±5.8)歲，平均孕周為(8.3 ±3.0)周。所有研究對象經超聲以及婦科檢查顯示子宮增大符合孕周，夫妻雙方染色體正常，內分泌檢查無異常，排除全身或感染性疾病，排除遺傳疾病，同時經抗心磷脂抗體(ACL)等自身抗體篩查，均為陰性者，雙方免疫狀態(tài)檢查正常。

1.2 方法 正常妊娠婦女與自然流產患者于體檢時抽取肘靜脈血3～5 ml，經離心(4 000 r/min，10 min)，留取血清，置于－20℃凍存。采用雙抗夾心ELISA法(試劑盒購自史瑞可公司)，檢測可溶性HLA-G(sHLA-G)的水平，具體操作嚴格按照試劑盒的說明書進行。本實驗測定的為總的sHLA-G水平。選用酶標儀(Anthos Lucy 2)測定吸光度(A)值，波長為450 nm。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用ELISA Calc回歸/擬合計算程序V 0.1和SPSS 13.0進行統(tǒng)計學分析，結果以±s表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

經檢測16例正常妊娠婦女血清sHLA-G的水平為(1.37±1.44)IU ∕ ml，16 例自然流產患者血清 sHLA-G 的水平為(0.57 ±0.27)IU/ml，后者血清中的sHLA-G水平明顯低于前者，兩組之間比較有統(tǒng)計學意義(t=2.166，P ＜0.05)，表明血清中的sHLA-G水平與妊娠的成功與否相關。

3 討論

人類白細胞G抗原(HLA-G)作為一種新發(fā)現(xiàn)的非經典HLA-I類分子，在母-胎免疫耐受及維持正常妊娠中起重要的免疫調節(jié)作用［2］。HLA-G分子主要存在于絨毛遠端的細胞滋養(yǎng)層。其通過與免疫活性細胞(如殺傷性T細胞、NK細胞等)和有關因子如IL-2等發(fā)生作用，阻斷母體對胎兒的免疫應答，保護妊娠順利進行。

最早發(fā)現(xiàn)HLA-G在體內的分布僅限于母胎界面的絨毛膜滋養(yǎng)層細胞上，但隨著有效檢測水平的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)如血清、血漿、羊水等體液和培養(yǎng)的滋養(yǎng)細胞上清液中均可檢測到sHLA-G［3］。sHLA-G主要由胎盤組織分泌，通過母-胎屏障而進入母體血液循環(huán)，有3種形式存在，即 sHLA-G1、G2、G3。其通過體液循環(huán)遍布全身各組織器官，對機體起系統(tǒng)化免疫調節(jié)作用，保護胎兒免受母體免疫系統(tǒng)的攻擊而維持正常的妊娠［4］。

在胚胎著床期間，子宮蛻膜有大量浸潤的免疫活性細胞，其中70% ～80%是NK細胞，sHLA-G能抑制NK細胞的殺傷活性。其通過與多種NK細胞抑制性受體結合，下調蛻膜NK細胞對胎兒的殺傷，此外，sHLA-G還可促使CD8+T細胞表達并分泌Fas配體，導致CD8+T細胞發(fā)生Fas/FasL程序性死亡，從而殺傷同種異體反應性T細胞，抑制其對胎兒的細胞毒作用［5］;又可誘導Th2型細胞因子IL-4、IL-10等的產生，抑制 TNF-α的分泌，使Th1/Th2平衡向Th2型方向移動，減少了Th1介導的母體對胎兒的免疫排斥［6］，因此，HLA-G的減少可能使滋養(yǎng)細胞易受母體免疫系統(tǒng)攻擊，影響著床和妊娠維持，從而導致妊娠的失敗。

本組通過定量測定顯示，正常妊娠組血清中sHLA-G水平顯著高于自然流產組，提示sHLA-G對妊娠成功有重要影響。Fuzzi等［4］通過檢測285份體外受精(IVF)早期胚胎期培養(yǎng)液中的sHLA-G，發(fā)現(xiàn)胚胎植入成功的僅見于培養(yǎng)液中有sHLA-G表達者，提示HLA-G在早期胚胎的表達是獲得妊娠成功的基本和必要條件。Yie等［7］回顧性研究亦發(fā)現(xiàn)分泌sHLA-G的胚胎卵裂率活產率顯著高于sHLA-G缺乏者，并指出sHLA-G不足使得胚胎植入過程中容易被母體的免疫細胞攻擊，血液中sHLA-G是胚胎早期成功植入的重要因素，此外還認為胚胎sHLA-G水平和卵裂率對妊娠結局具一定預測價值。Athanassakis等［8］也發(fā)現(xiàn)，反復自然流產(RSA)患者血清中，sHLA-G水平較同期正常妊娠下降42%，而可溶性人類白細胞DR抗原(sHLA-DR)則上升63%，提示排斥反應增強。綜上所述，sHLA-G對維持正常妊娠可能有重要作用，sHLA-G不足可能使得胚胎在發(fā)育過程中受母體的免疫細胞攻擊，而導致妊娠失敗和流產的發(fā)生。但關于sHLA-G的生物學作用及其機制在很多方面還存在眾多疑問，仍需要進一步地研究探討。

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